Caracterizao_de_Lipdeos_adaptado_

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UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAÍBA 
Centro de Ciências Exatas e da Natureza 
Departamento de Biologia Molecular 
Laboratório Didático de Bioquímica 
 
 
PRÁTICA – CARACTERIZAÇÃO DE LIPÍDEOS 
Nome: Data: 
Disciplina: Curso: 
 
 
I. OBJETIVOS: 
- Avaliar a solubilidade dos triglicerídeos em diferentes solventes; 
- Conhecer a reação de saponificação a partir de óleos e gorduras; 
- Identificar a presença de ácidos graxos insaturados na estrutura dos triglicerídeos; 
- Detectar a formação de emulsão em solução água e óleo; 
- Detectar a presença de fitoesteróis em óleos vegetais. 
 
II. FUNDAMENTOS TEÓRICOS 
 
II.A - TESTE DE SOLUBILIDADE 
Neste teste vamos identificar a presença de lipídios nas amostras. Para isso utilizamos 
algumas substâncias como acetona (ou éter), água e etanol. 
Sabendo que os lipídios são moléculas apolares e conhecendo o princípio da 
solubilidade que "semelhante dissolve semelhante", certamente as amostras que contêm 
lipídios formarão soluções de apenas uma fase com as substâncias apolares; e com as 
substâncias polares formarão soluções onde observaremos mais de uma fase. 
 
II.B – SAPONIFICAÇÃO 
A reação de saponificação também é muito conhecida como hidrólise alcalina e é 
através dela que se dá o processo de manufaturação do sabão (Ver anexo I). Em termos 
químicos, seria a mistura de um éster (proveniente de um ácido graxo) e uma base (hidróxido 
de sódio) para se obter sabão (sal orgânico). 
A equação abaixo apresenta esse processo: 
Éster + base forte → sabão + glicerol 
 
Praticamente, todos os ésteres são oriundos de óleos e gorduras, daí o porquê de usar o 
óleo comestível para a confecção do sabão caseiro. 
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II.C – TESTE DE INSATURAÇÃO 
 
 Este teste identifica a presença de ácido graxo insaturado. Ocorre uma reação de halogenação, 
em que o iodo reage com as duplas ligações do ácido graxo insaturado (Ver anexo I). Se houver 
dupla ligação, o iodo será consumido e a coloração característica da solução de iodo diminuirá de 
intensidade. 
 
II.D TESTE DE FORMAÇÃO DE EMULSÃO 
 
Emulsão é a mistura entre dois líquidos imiscíveis (polar e apolar), o líquido que está 
em maior quantidade é o dispergente e o líquido que se encontra em menor quantidade é o 
disperso, distribuindo-se em gotículas muito pequenas difundidas em suspensão. Exemplos de 
emulsões incluem manteiga, margarina, maionese, café expresso e alguns cosméticos. As 
emulsões mais conhecidas consistem de água e óleo. 
 
II.E DETECÇÃO DE COLESTEROL 
 
Os esteróides formam um grupo de compostos biológicos que apresentam em sua 
estrutura um grupo químico comum: o ciclopentanoperidrofenantreno (corresponde à 
estrutura anelar geminada C1 até C10. O colesterol, o principal esterol nos tecidos animais, 
apresenta uma função alcoólica em C3, uma insaturação entre C5 e C6 e uma cadeia alquil 
substituintes em C17. O colesterol e outros esteróis podem ser evidenciados através da Reação 
de Salkowski. Essa reação é comum para os esteróis de uma maneira geral, o aparecimento da 
cor vermelha é própria de esteróis que são insaturados no anel A ou B ou em ambos dando 
origem a cromóforos (ocorrendo desidratação na insaturação formando um composto 
colorido) fato que serve para distingui-los dos que possuem anel A ou B saturados. 
 
III. PROCEDIMENTO: Amostra - Óleo Vegetal (óleo de soja). 
 
a) TESTE DE SOLUBILIDADE 
Colocar 1 mL de amostra em cada um de 3 tubos de ensaio. Acrescentar 2 mL dos 
seguintes solventes: no primeiro, água, no segundo, acetona, e no terceiro, etanol. Agitar 
vigorosamente todos os tubos, deixar em repouso por 2 minuto, observar a solubilidade em 
cada um dos solventes e anotar o resultado obtido. 
 
b) SAPONIFICAÇÃO 
Colocar em um tubo de ensaio 1 mL da amostra e adicionar 3 mL de solução alcoólica de 
hidróxido de potássio (KOH) a 5%. Colocar o tubo de ensaio no banho maria em ebulição 
por 10 min. Após este tempo, retirar o tubo do banho-maria, com auxílio de uma pinça. 
 Repartir a solução da hidrólise alcalina em dois tubos de ensaio: 
a) Adicionar 2 mL da reação de saponificação mais 1 mL de água, agitar e observar o 
resultado; 
b) Adicionar 2 mL da reação de saponificação mais 0,5 mL de CaCl2 a 10%, observar o 
resultado. 
 
c) TESTE DE INSATURAÇÃO 
Colocar 1 mL de amostra em cada um de 2 tubos de ensaio, adicionar 2 gotas de lugol a 
cada tubo, agitar levemente até que o todo o lugol se misture ao óleo vegetal. O tubo 2 
deve ser aquecido em banho maria a 100 ºC durante 5 min. Observar a mudança de 
coloração do sistema. Logo em seguida, adicionar 1,0 mL de amido em cada tubo e agitar. 
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Observar o desenvolvimento de cor em cada tubo e anotar o resultado obtido. 
 
d) TESTE DE FORMAÇÃO DE EMULSÃO 
Colocar 1 mL de amostra em um tubo de ensaio e acrescentar 2 mL de carbonato de sódio 
(Na2CO3) a 2%. Agitar vigorosamente o tubo e verificar a formação de emulsão (compare 
com o tubo de lipídeo-água do teste de solubilização), deixar em repouso por 2 minuto e 
observar o tempo de duração da emulsão em cada tubo e anotar o resultado obtido. 
 
e) DETECÇÃO DE ESTEROIDES - MÉTODO DE SALKOWISKI 
Colocar 1 mL de amostra em um tubo de ensaio, leve a estante com o tubo para a capela de 
exaustão de gases e continue o procedimento. Adicionar 1 mL de ácido sulfúrico 
concentrado. Observar o desenvolvimento de cor e anotar o resultado obtido. 
 
REFERÊNCIAS 
SOUZA, K.A.F.D.; NEVES, V.A.; Experimentos de Bioquímica. Disponível em: 
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/menu.htm. Acesso em: 19 abril 2022.