ROTEIRO - Reação em Cadeia da Polimerase - PCR

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1 ALGETEC – SOLUÇÕES TECNOLÓGICAS EM EDUCAÇÃO 
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LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR / GENÉTICA 
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE - PCR 
 
INSTRUÇÕES GERAIS 
 
 
1. Neste experimento, você irá identificar e analisar as bases da biologia molecular 
executando a reação em cadeia da polimerase – PCR. 
 
2. Utilize a seção “Recomendações de Acesso” para melhor aproveitamento da 
experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito do 
VirtuaLab. 
 
3. Caso não saiba como manipular o Laboratório Virtual, utilize o “Tutorial 
VirtuaLab” presente neste Roteiro. 
 
4. Caso já possua familiaridade com o Laboratório Virtual, você encontrará as 
instruções para realização desta prática na subseção “Procedimentos”. 
 
5. Ao finalizar o experimento, responda aos questionamentos da seção “Avaliação 
de Resultados”. 
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RECOMENDAÇÕES DE ACESSO 
 
PARA ACESSAR O VIRTUALAB 
 
 
 
 
 
 
 
 
1. Caso utilize o Windows 10, dê preferência ao navegador Google Chrome; 
2. Caso utilize o Windows 7, dê preferência ao navegador Mozilla Firefox; 
3. Feche outros programas que podem sobrecarregar o seu computador; 
4. Verifique se o seu navegador está atualizado; 
5. Realize teste de velocidade da internet. 
 
Na página a seguir, apresentamos as duas principais dúvidas na utilização dos 
Laboratórios Virtuais. Caso elas não se apliquem ao seu problema, consulte a nossa seção 
de “Perguntas Frequentes”, disponível em: https://algetec.movidesk.com/kb/pt-br/ 
Neste mesmo link, você poderá usar o chat ou abrir um chamado para o contato com 
nossa central de suporte. Se preferir, utilize os QR CODEs para um contato direto por 
Whatsapp (8h às 18h) ou para direcionamento para a central de suporte. Conte conosco! 
ATENÇÃO: 
O LABORATÓRIO VIRTUAL DEVE SER ACESSADO POR COMPUTADOR. ELE NÃO DEVE SER 
ACESSADO POR CELULAR OU TABLET. 
O REQUISITO MÍNIMO PARA O SEU COMPUTADOR É UMA MEMÓRIA RAM DE 4 GB. 
SEU PRIMEIRO ACESSO SERÁ UM POUCO MAIS LENTO, POIS ALGUNS PLUGINS SÃO 
BUSCADOS NO SEU NAVEGADOR. A PARTIR DO SEGUNDO ACESSO, A VELOCIDADE DE 
ABERTURA DOS EXPERIMENTOS SERÁ MAIS RÁPIDA. 
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https://algetec.movidesk.com/kb/pt-br/
 
 
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PERGUNTAS FREQUENTES 
 
 
1. O laboratório virtual está lento, o que devo fazer? 
 
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” -> 
“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a 
opção e reinicie o navegador. 
 
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de 
trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações 
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de 
máximo desempenho. 
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de 
vídeo instalado na máquina. 
 
c) Feche outros aplicativos e abas que podem sobrecarregar o seu computador. 
 
d) Verifique o uso do disco no Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) -> 
“Detalhes”. Se estiver em 100%, feche outros aplicativos ou reinicie o 
computador. 
 
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2. O laboratório apresentou tela preta, como proceder? 
 
a) No Google Chrome, clique em “Configurações” -> “Avançado” -> “Sistema” -> 
“Utilizar aceleração de hardware sempre que estiver disponível”. Habilite a 
opção e reinicie o navegador. Caso persista, desative a opção e tente 
novamente. 
 
b) Verifique as configurações do driver de vídeo ou equivalente. Na área de 
trabalho, clique com o botão direito do mouse. Escolha “Configurações 
gráficas” e procure pela configuração de performance. Escolha a opção de 
máximo desempenho. 
Obs.: Os atalhos e procedimentos podem variar de acordo com o driver de 
vídeo instalado na máquina. 
 
c) Verifique se o navegador está atualizado. 
 
 
 
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DESCRIÇÃO DO LABORATÓRIO 
 
 
MATERIAIS NECESSÁRIOS 
 
• Água ultrapura; 
• Béquer de 500 mL com hipoclorito de sódio; 
• Buffer amplificação 10x; 
• Capela de fluxo laminar; 
• DNTPs; 
• MgCl2; 
• Micropipeta de 0,5 - 10 µl; 
• Ponteira de micropipeta de 10 µl; 
• Primer F; 
• Primer R; 
• Suporte para Eppendorf; 
• Taq DNA polimerase; 
• Termociclador; 
• Tubo Eppendorf (1,5 mL) contendo amostra de DNA; 
• Tubo Eppendorf de 0,5 mL (blendshape). 
 
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PROCEDIMENTOS 
 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Higienize as mãos na pia. Coloque os equipamentos de proteção individual localizado 
no “Armário de EPIs”: jaleco, luvas, óculos de proteção e máscara. 
2. ASPIRANDO OS REAGENTES 
 
Na capela de exaustão, selecione a micropipeta de 10 µl, regule o volume, mova para 
o recipiente e aspire o reagente, seguindo a ordem: 5 µl para o buffer, 2.5 µl de MgCl2, 
0.5 µl do primer F, 0.5 µl do primer R, 8 µl do dNTP, 0.5 da Taq DNA polimerase e 5 µl 
da amostra do DNA. Para cada reagente troque a ponteira, que deve ser descartada 
no béquer com hipoclorito de sódio, e transira para o tubo de Eppendorf. 
 
3. ASPIRANDO DILUENTE 
 
Na capela de exaustão, selecione a micropipeta de 100 µl, regule o volume para 28 µl, 
mova a micropipeta para o recipiente de água ultrapura, aspire e transfira para o tubo 
de Eppendorf. Em seguida, descarte a ponteira, que deverá ser descartada no béquer 
com hipoclorito de sódio. 
 
 
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4. FINALIZANDO O EXPERIMENTO 
 
Abra o termociclador e coloque o Eppendorf. Feche o equipamento. Em seguida, 
clique no menu “File”, abra a pasta “Test” e clique em “Edit”. Configure os ciclos 
clicando com o botão esquerdo do mouse em “Time”, “Temp/c” e “Cycle”. Utilize o 
teclado numérico lateral para efetuar a configuração. 
 
 Ciclo 1 Ciclo 2 Ciclo 3 Ciclo 4 Ciclo 5 
Temperatura (ºC) 95 94 59 72 60 
Tempo (min) 11 1 1 1 60 
Ciclo 1 28 28 28 1 
 
 
5. AVALIANDO OS RESULTADOS 
 
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, neste roteiro, e responda de acordo 
com o que foi observado nos experimentos. 
 
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AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 
 
 
 
1. Qual importância da Taq DNA polimerase e dos primer`s utilizados? 
 
 
 
2. Qual aimportância do PCR na área da saúde? 
 
 
 
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TUTORIAL VIRTUALAB 
 
 
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
 
Visualize a pia clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome “Pia” 
localizada dentro do painel de visualização no canto superior esquerdo da tela. Se 
preferir, também pode ser utilizado o atalho do teclado “Alt+1”. 
 
 
 
 
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Lave as mãos clicando na transmissão da torneira com o botão esquerdo do mouse. 
 
 
 
Visualize o armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o 
nome “EPIs” ou através do atalho do teclado “Alt+2”. 
 
 
 
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Abra o armário de EPI clicando com o botão esquerdo do mouse sobre as portas. 
 
 
 
Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com o botão esquerdo 
do mouse sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas óculos de 
proteção e máscara. 
 
 
 
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Feche as portas do armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse sobre elas. 
 
 
 
 
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2. VISUALIZANDO A LÂMINA 
 
Visualize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Capela” ou através do atalho do teclado “Alt+3”. 
 
 
 
Selecione a micropipeta de 10 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
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Ajuste o volume para 5 µL na aba lateral e clique com o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
 
Mova a pipeta para o Buffer 10x e aspire o reagente clicando na micropipeta com o 
botão direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Buffer 10x”. 
 
 
 
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Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
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Selecione a micropipeta de 10 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
 
Ajuste o volume para 2,5 µl na aba lateral e clique com o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
 
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Mova a pipeta para o tubo de MgCl2 e aspire o reagente clicando na micropipeta com o 
botão direito do mouse e selecione a opção “Colocar em MgCl2”. 
 
 
 
Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
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Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
Selecione a micropipeta de 10 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
 
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Ajuste o volume para 0,5 µl na aba lateral e clique com o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
 
Mova a pipeta para o Primer F e aspire o reagente clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Primer F”. 
 
 
 
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Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
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Mova a pipeta para o Primer R e aspire o reagente clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Primer R”. 
 
 
 
Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
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Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
Selecione a micropipeta de 10 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
 
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Ajuste o volume para 8 µl na aba lateral e cliquecom o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
 
Mova a pipeta para o dNTP, e aspire o reagente clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em dNTP,”. 
 
 
 
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LABORATÓRIO DE BIOLOGIA MOLECULAR / GENÉTICA 
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Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
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Selecione a micropipeta de 10 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
 
Ajuste o volume para 0.5 µl na aba lateral e clique com o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
 
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Mova a micropipeta para a Taq DNA polimerase e aspire clicando na micropipeta com o 
botão direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Taq DNA polimerase”. 
 
 
 
Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
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Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
Selecione a micropipeta de 10 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
 
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Ajuste o volume para 5 µl na aba lateral e clique com o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
 
Mova a pipeta para a amostra de DNA e aspire o reagente clicando na micropipeta com 
o botão direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Amostra de DNA”. 
 
 
 
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Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
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3. ASPIRANDO O DILUENTE 
 
Selecione a micropipeta de 100 µl clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Reajustar volume”. 
 
 
 
Ajuste o volume para 28 µl na aba lateral e clique com o botão esquerdo do mouse em 
“OK”. 
 
 
mailto:contato@algetec.com.br
 
 
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Mova a pipeta para a garrafa de água e aspire o clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Água ultra pura”. 
 
 
 
Mova a micropipeta para o tubo de Eppendorf clicando na micropipeta com o botão 
direito do mouse e selecione a opção “Colocar em Eppendorf 0,5 mL”. 
 
 
 
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REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE - PCR 
Troque a ponteira da micropipeta clicando na micropipeta com o botão direito do mouse 
e selecione a opção “Trocar ponteira”. 
 
 
 
Tampe o Eppendorf e recipientes utilizados clicando com o botão esquerdo do mouse 
na garrafa. 
 
 
 
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REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE - PCR 
 
4. FINALIZANDO O EXPERIMENTO 
 
Visualize o termociclador clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o 
nome “Termociclador” ou através do atalho do teclado “Alt+4”. 
 
 
 
Abra a tampa do termociclador clicando com o botão esquerdo do mouse no 
termociclador. 
 
 
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Visualize a capela clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com o nome 
“Capela” ou através do atalho do teclado “Alt+3”. 
 
 
 
Mova o suporte de tubos Eppendorf clicando com o botão direito do mouse no suporte 
de tubos de Eppendorf. 
 
 
 
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Feche a tampa do termociclador clicando com o botão esquerdo do mouse no 
termociclador. 
 
 
 
Visualize o visor do termociclador clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera 
com o nome “Visor termociclador” ou através do atalho do teclado “Alt+5”. 
 
 
 
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Comece a configurar o termociclador clicando com o botão esquerdo do mouse em 
“File”. 
 
 
 
Abra a pasta “TEST” clicando com o botão esquerdo do mouse em “TEST”, e em seguida, 
clique em “Open”. 
 
 
 
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Abra o menu “Edit” clicando com o botão esquerdo do mouse em “Edit”. 
 
 
 
Configure os ciclos clicando com o botão esquerdo do mouse em “Time”, “Temp/c” e 
“Cycle”. Utilize o teclado numérico lateral para efetuar a configuração clicando nos 
respectivos números com o botão esquerdo do mouse. 
 
 
 
 
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Configure o primeiro ciclo com o “Time” de 11 minutos, “Temp/c” de 95ºC e “Cycle” de 
1. Adicione um novo ciclo clicando com o botão esquerdo do mouse em “+”. 
 
 
 
Configure o segundo ciclo com o “Time” de 1 minutos, “Temp/c” de 94ºC e “Cycle” de 
28. Adicione um novo ciclo clicando com o botão esquerdo do mouse em “+”. 
 
 
 
 
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Configure o terceiro ciclo com o “Time” de 1 minutos, “Temp/c” de 59ºC e “Cycle” de 1. 
Adicione um novo ciclo clicando com o botão esquerdo do mouse em “+”. 
 
 
 
Configure o quarto ciclo com o “Time” de 1 minutos, “Temp/c” de 72ºC e “Cycle” de 1. 
Adicione um novo ciclo clicando com o botão esquerdo do mouse em “+”. 
 
 
 
 
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Configure o quinto ciclo com o “Time” de 60 minutos, “Temp/c” de 60ºC e “Cycle” de 1. 
Adicione um novo ciclo clicando com o botão esquerdo do mouse em “+”. 
 
 
 
Salve os ciclos configurados clicando com o botão esquerdo do mouse em “Save”. 
 
 
 
 
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Conclua a configuração selecionando as opções com o botão esquerdo do mouse: Hot 
Lid com especificação numérica de 1 a 10, Control mode: “tube” e Sample volume: 50. 
 
 
 
Salve a configuração clicando com o botão esquerdo do mouse em “Save”. 
 
 
 
 
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Inicie o processo clicando com o botão esquerdo do mouse em “Run”. 
 
 
 
Avance a escala do tempo clicando com o botão esquerdo do mouse em “Avançar”. 
 
 
 
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5. AVALIADO OS RESULTADOS 
 
Siga para a seção “Avaliação dos Resultados”, neste roteiro, e responda de acordo com 
o que foi observado nos experimentos. 
 
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