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Tópicos: - Importância do isolamento de microrganismos em meio de cultura; - Classificação dos microrganismos em relação ao oxigênio; - Técnicas de isolamento de microrganismos aeróbios e anaeróbios. Isolamento de microrganismos anaeróbios e aeróbios em meio de cultura. Importância do Isolamento Microbiano Crescimento em caldo ? ? ? ? ? ? Obtenção de colônias isoladas (cultura pura) de bactérias e fungos Importância do Isolamento Microbiano Fungos filamentosos Fungos Leveduriformes Bactérias 1. Esgotamento do inóculo por estrias; 2. Método “spread plate”; 3. Método “pour plate”. 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS 1. Esgotamento do inóculo por estrias; 2. Método “spread plate”; 3. Método “pour plate”. 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS Função da alça de platina (alça de inoculação) Esgotamento do inóculo por estrias Estrutura Esterilização Semeadura na superfície Ao inocular a amostra com auxílio da alça de platina em um ponto do ágar, quanto maior o número de estrias, mais os microrganismos são espalhados. Nas últimas estrias, menos microrganismos serão depositados na superfície do ágar gerando colônias isoladas. Esgotamento do inóculo por estrias (1) Estria simples (2) Estria composta Colônias 1. Esgotamento do inóculo por estrias; 2. Método “spread plate”; 3. Método “pour plate”. 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS Spread plate colônias crescem somente na superfície do Agar. Incubação Plaqueamento :Método de semeadura por espalhamento – “Spread plate”. Spread plate com alça de Drigalski 1. Esgotamento do inóculo por estrias; 2. Método “spread plate”; 3. Método “pour plate”. 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS Pour plate: Colônias crescem na superfície e no interior do Agar. Incubação Plaqueamento: Método de semeadura em profundidade – “Pour plate”. Isolamento pelo método de Pour plate. Técnica de “spread plate” Técnica de “pour plate” Técnicas de “spread plate” e “pour plate” Aerobiose X Anaerobiose Métodos de Isolamento Microbiano 1 2 3 4 5 Classificação dos microrganismos em relação ao oxigênio 1- Aeróbios estritos 2- Anaeróbios estritos 3- Aeróbios Facultativos 4- Microaerófilos 5- Anaeróbios aerotolerantesT e n s ã o d e O 2 Alta Baixa ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS AERÓBIOS 01. Meios de cultura redutores 02. Técnica de Zeissler 03. Técnica de Gaspak 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS ANERÓBIOS 01. Meios de cultura redutores 02. Técnica de Zeissler 03. Técnica de Gaspak 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS ANERÓBIOS Meios de cultura redutores Meios contendo agentes redutores que proporcionam ambiente anaeróbico. Exemplos: -Meio Tioglicolato (tioglicolato sódico e cisteína) -Ágar Azida ou ágar azida sangue (azida sódica) -Ágar para anaeróbios seg. Brewer (tioglicolato sódico, sulfoxilatoformaldeído e cistina) Enterococcus faecalis em ágar azida 01. Meios de cultura redutores 02. Técnica de Zeissler 03. Técnica de Gaspak 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS ANERÓBIOS Isolamento de microrganismos anaeróbios Técnica ZEISSLER. 01. Meios de cultura redutores 02. Técnica de Zeissler 03. Técnica de Gaspak 3 ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS ANERÓBIOS Isolamento de microrganismos anaeróbios Técnica GASPAK. 18 Manutenção de bactérias anaeróbias 16