Aula pratica 2304

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Microbiologia Agrícola
Aula prática 4
Conhecer os procedimentos de isolamento de microrganismos 
presentes em amostras de solo e tecidos vegetais. 
Objetivos da aula
Qual a importância do isolamento de microrganismos de amostras de 
solo e vegetais?
Como deve ser feito o isolamento de microrganismos?
Contextualização da teleaula
Bactérias e fungos: 
endofíticos x fitopatogenicos
São aqueles que crescem nos tecidos vegetais causando doenças 
através de alterações fisiológicas e ou morfológicas..
Microrganismos fitopatogênicos
Fonte: http://bit.ly/2IRhb5T
São aqueles que colonizam o interior das plantas.
 São simbióticos.
Epifíticos – colonizam a superfície
Microrganismos endofíticos
Fungos endofíticos
Fonte: http://bit.ly/2GSGPVr; http://bit.ly/2Wjhjy0
Extraídos de Duroia macrophylla Extraídos de 
Rhizophora mangle
http://bit.ly/2GSGPVr
Bactérias endofíticas
Fonte: http://bit.ly/2GBGKVY; http://bit.ly/2WeC1ir 
Gênero Pseudomonas da rizosfera
http://bit.ly/2GBGKVY
Meios de cultura
Meios de cultura
 Soluções ricas em nutrientes.
 Acrescidas com substâncias específicas.
• Seletivos
• Diferenciais
 Sólidos ou não
 Ex. Ágar Batata Dextrose
Meios de cultura
Fonte: http://bit.ly/2ITEtI3
Desenvolvimento da prática
Procedimento 1 – Isolamento direto: para amostras de tecido vegetal 
contendo esporos de fungo.
Procedimento 2 – Isolamento indireto: para amostra de tecido vegetal 
contaminado com bactérias.
Procedimento 3 – Isolamento de microrganismos a partir de amostras 
de solo.
Procedimentos práticos
Bico de Bunsen
Placa de Petri
Tubos de ensaio
Agulha ou alça microbiológica
Alça de Drigalski
Amostras de tecido vegetal
Amostra de solo
Álcool 70%
Hipoclorito de sódio 0,5%
Água destilada estéril
Estufa de fotoperíodo
Materiais
Meio de cultura BDA.
Meio de cultura Dodine.
Lupa
Materiais
Vídeo - Materiais
Começa em: 00:00 corta em: 00:44.
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-
02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microb
iologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microbiologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Utilização de EPIs:
 Jaleco
 Luvas
Higienização das mãos.
Assepsia da bancada
Cuidados prévios
Vídeo – Higienização das Mãos
Começa em: 27:02 corta em: 28:00.
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-03-
28/video/67f08d0bcfc4a56f66098a9d80812d5b/2_Disciplina_de_Micro
biologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4

http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-03-28/video/67f08d0bcfc4a56f66098a9d80812d5b/2_Disciplina_de_Microbiologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Isolamento direto: para amostras de tecido vegetal contendo esporos 
de fungo. 
 Focalizar as estruturas do patógeno (esporos) utilizando o lupa para ajudar a 
isolar; 
 Flambar a alça microbiológica; 
 Esperar a ponta da alça esfriar; 
 Transferir esporos presentes na amostra para o meio de cultura BDA, 
 Distribuir em três pontos na placa, 
formando um triângulo equilátero; 
 Colocar a placa de Petri numa estufa de 
fotoperíodo até o aparecimento da colônia; 
Procedimento 1
Começa em: 02:58 corta em: 04:40.
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-
02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microb
iologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4

Vídeo – Isolamento direto
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microbiologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Isolamento indireto: para amostra de tecido vegetal contaminado com 
bactérias.
 Retirar fragmentos de tecidos da região limítrofe entre a área lesionada e a área 
sadia; 
 Colocar os fragmentos com ajuda de uma pinça em béquer com álcool a 70% por 
2 minutos; 
 Passar para outro béquer com hipoclorito de sódio a 0,5% por 2 minutos; 
 Lavar os fragmentos com água destilada 
estéril por três vezes, ou de forma contínua; 
Procedimento 2
 Transferir o fragmento para um papel de filtro, dobrá-lo e levá-lo para a câmara 
de fluxo laminar. 
 Com o auxílio de uma pinça, colocar pelo menos três fragmentos em forma de 
um triângulo na placa de Petri, previamente pronta com o meio de cultura 
Dodine; 
 Flambar as placas de Petri e fechá-las 
com filme PVC; 
 Identificar as placas contendo o tipo de semeadura, seu nome e data; 
 Incubar a(s) placa(s) de Petri com os fragmentos 
em uma estufa com fotoperíodo de 12 horas, 
de cinco a sete dias, a 25 °C; 
Procedimento 2
Começa em: 16:23 corta em: 21:44.
Começa em: 04:41 corta em: 10:09.
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-
02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microb
iologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Vídeo – Isolamento indireto
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microbiologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Isolamento de microrganismos a partir de amostras de solo.
 As amostras de solo devem ser homogeneizadas para a retirada de uma 
subamostra de 1g do material; 
 Tubo de ensaio - acrescentar de água destilada esterilizada 1:10 (10ml); 
 Diluição seriada - diluídas em cem vezes; 
 Inocular 0,1ml da amostra em meio de cultura Dodine; 
Flambar a alça de Drigaslky e esperar esfriar; 
Espalhar a amostra sobre o meio de cultura; 
Incubar em uma estufa com fotoperíodo de 12 horas,
de cinco a sete dias, a 25 °C; 
Procedimento 3
Começa em: 10:11 corta em: 16:22.
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-
02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microb
iologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Vídeo – Isolamento de microrganismos do solo
http://pvbps-sambavideos.akamaized.net/account/182/102/2019-04-02/video/00c69a25eba31f36f5453bffc903efba/3_Disciplina_de_Microbiologia_Agrcola_Prof_Vincius_Rinco.mp4
Resultados
Procedimento 1 – Isolamento direto 
Procedimento 2 – Isolamento indireto
Procedimento 3 – Isolamento do solo
Bactérias do solo
CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICA DE BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS 
ISOLADAS DA RAIZDO Cereus jamacaru.
Oliveira et al. (Disponível em: http://bit.ly/2IPB1OL)
Biodiversidade: promotores de crescimento, controle biológico. 
Isolamento de microrganismos: aplicações
Detecção de biodiversidade 
http://bit.ly/2IPB1OL
BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS DE CANA-DE-AÇÚCAR: ISOLAMENTO E 
SOLUBILIZAÇÃO DEFOSFATO INORGÂNICO.
Barbosa et. al. (disponível em: http://bit.ly/2ZL14fq)
Isolamento de microrganismos: aplicações
Detecção de bactérias 
solubilizadoras de fosfato 
inorgânico
BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS COMO AGENTES 
PROMOTORES DOCRESCIMENTO DE PLANTAS DE 
TOMATEIRO E DE INIBIÇÃOIN VITRO DE Ralstonia
solanacearum
Barretti et. al. (disponível em: http://bit.ly/2IOVeEB)
150 isolados de folhas, caules e raízes de tomateiros 
sadios. 
53 promoviam crescimento.
2 isolados inibiram o crescimento de Ralstonia
solanacearum (bactéria)
Isolamento de microrganismos: aplicações
Fonte: 
http://bit.ly/2LeOJwK
http://bit.ly/2IOVeEB