relatório aula pratica Coloração de Gram

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ANHANGUERA-UNIDERP 
CURSO - MEDICINA VETERINÁRIA 
 
 
 
 
DENÍLSON ARGUELHO LINO1 
 
THAÍS THALIA COSTA OLIVEIRA2 
 
 
 
 
 
RELATORIO AULA PRÁTICA: BACTERIOLOGIA. 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CAMPO GRANDE- MS 
2023
 
1 RA: 399071913328 
2 RA: 369756313328 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
DENÍLSON ARGUELHO LINO 
 
 
THAÍS THALIA COSTA OLIVEIRA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATORIO AULA PRÁTICA: BACTERIOLOGIA. 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
Trabalho apresentado no Curso de Medicina 
Veterinária das Faculdades Anhanguera 
UNIDERP de Campo Grande como pré-
requisito para a obtenção de nota semestral. 
Professores: Vanessa e Giovane 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
CAMPO GRANDE- MS 
2023
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Figura 1:Parede celular bactéria Gram positiva 
Figura 4: Parede celular bactéria Gram 
negativa. 
Figura 3: Vista microscópica de bactérias 
Gram negativa. 
1 OBJETIVO 
 
Com a orientação da professora Vanessa, a aula prática, realizada no dia 23/08/2023, 
teve como objetivos vivenciar uma rotina em um laboratório. O principal deles era ensinar a 
técnica de coloração de Gram que permite a identificação de bactérias presentes nas amostras 
biológicas em um curto espaço de tempo. 
O método foi descoberto por um médico dinamarquês chamado, Hans Cristian 
Joaquim Gram, em 1884. Com uma série de análises, Gram percebeu a existência de coloração 
diferentes para as bactérias, algumas ficavam roxas e outras vermelhas. Dessa forma, o cientista 
conseguiu classificar as bactérias que estava observando em dois grandes grupos. As bactérias 
que ficaram roxas foram denominadas de Gram-positivas e as vermelhas ele denominou de 
Gram-negativas. 
 As bactérias Gram-positivas retêm o cristal violeta devido a presença de uma espessa 
camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma 
espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes 
celulares, como ilustrado na figura 1, apresentando-se na cor roxa, de acordo com a figura 2. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina, 
conforme figura 3, que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem 
a cor vermelha no processo de coloração final como mostra a figura 4. 
 
 
 
 
Figura 2: Vista microscópica de bactérias Gram 
positivas 
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A partir do resultado da leitura da lâmina faz-se uma avaliação qualitativa, quantitativa 
e morfológica da bactéria presente, isso com base nas propriedades tintoriais e em conjunto 
com os demais sinais clínicos. Assim podendo fornecer informações sobre a conduta terapêutica 
mais eficaz para o tratamento contra a bactéria. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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2 LISTAS DE MATERIAS USADOS PARA A METODOLOGIA DE 
COLORAÇÃO DE GRAM. 
✓ Água corrente 
✓ Alça de platina 
✓ Álcool 
✓ Bico de bunsen 
✓ Cronômetro 
✓ Fosforo 
✓ Lâmina para microscópio 
✓ Lápis 
✓ Lugol fraco 
✓ Meio de cultura de bactérias Staphylococcus 
✓ Microscópico 
✓ Óleo de imersão 
✓ Pia 
✓ Pinça De Madeira Para Tubo De Ensaio 
✓ Pipeta pasteur 
✓ Safranina 
✓ Violeta Genciana. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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3 PASSO A PASSO DA TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM. 
1. Confeccione o esfregaço lâmina. 
2. Espere secar. 
3. Flambar a lâmina 
4. cubra a lâmina com cristal violeta e deixe agir por 60 segundos. 
5. Lave em água corrente. 
6. cubra a lâmina com lugol e deixe agir por 60 segundos. 
7. Lave em água corrente 
8. cubra a lâmina com álcool e deixe agir por 04 segundos 
9. Lave em água corrente 
10. Cubra a lâmina com fucsina e deixe agir por 30 segundos. 
11. Lave em água corrente. 
12. Espere a lâmina secar. 
13. Cubra com óleo de imersão sobre o esfregaço. 
14. Leia em objetiva de imersão (100 X). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Lugol 
Figura 5: Passo a passo da Coloração de Gram. 
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Figura 6: Esterilização alça de platina. 
4 DESCRIÇÃ DO PROCESSO DA COLORAÇÃO DE GRAM. 
Utilizando um fósforo, inicia-se a ignição do bico de Bunsen. Para esterilizar a alça de 
platina, é necessário introduzi-la na chama até que atinja um ponto de incandescência, como 
mostrado na figura 6. Após esse processo, a alça é removida da chama, mas é mantida em 
proximidade constante dela, conforme ilustrado na figura 7. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Em seguida, abre-se o meio de cultura e esteriliza-se a boca do tubo na chama (figura 
7). Depois introduz-se a alça dentro do tubo retirando uma pequena amostra que é esfregue na 
lâmina (figura 8 e 9). Feito isso, flambe-se a lâmina passando-a rapidamente por três vezes na 
chama (figura 10). 
 
 
Figura 7: Mantendo a alça de platina 
próximo a chama e esterilizando a boca do tubo 
do meio de cultura 
Figura 8: Retirando amostra de 
bactérias do meio de cultura. 
Figura 9: esfregaço da amostra na 
lâmina 
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Feito isso, foi posta a lâmina sobre a pia onde se iniciou o processo de coloração, 
começando por cobrir a lâmina com o cristal violeta e deixando-o agir por 60 segundos (figura 
11). Passado esse tempo foi feito o enxague em água corrente (figura 12). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Logo após, cobre-se a lâmina com lugol, deixando agir também por 60 segundos (figura 
13) e lavando novamente em água corrente para retirada de todo o produto. Em seguida, coloca-
se álcool sobre a lâmina deixando agir por 04 segundos e lavando outra vez em água corrente 
(figura 14). 
Figura 10: Flambagem da lâmina 
Figura 11: Cristal violeta agindo 
na amostra. 
Figura 12: Lavando a 
amostra em água corrente. 
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Por fim, adicione fucsina cobrindo a lâmina deixando agir por 30 segundos (figura 15). 
Depois do tempo necessário, lave a amostra em água corrente e espere secar (figura 16). Com 
a lâmina seca, goteje algumas gotas de óleo de imersão sobre o esfregaço (figura 17) e faça a 
leitura na objetiva de 100 X no microscópio. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 13: Lugol agindo sobre a 
amostra. 
Figura 14: Lavando o álcool logo 
após ele agir por 04 segundos em água 
corrente. 
Figura 15: Cobrindo a lâmina com fucsina 
e deixando agir por 30 segundos. Figura 16: esperando o 
esfregaço secar. 
Figura 16: Gotejando óleo de imersão 
no esfregaço. 
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5 RESULTADOS. 
Realizou-se um esfregaço utilizando amostras biológicas de Staphylococcus, um tipo 
de bactéria com características distintas. Esses micro-organismos são esféricos, podendo viver 
em ambientes aeróbios ou facultativos, sendo classificados como Gram positivos e formando 
aglomerados semelhantes a cachos de uva (conforme ilustrado na Figura 18). Eles podem ser 
imóveis em grande parte e ocasionalmente possuir cápsulas, mas não têm a capacidade de 
formar esporos. São considerados microrganismos não exigentes, o que significa que crescem 
bem em meios de cultura comuns, e podem sobreviver em uma faixa de temperatura que varia 
de 6°C a 48°C, além de suportarem valores de pH entre 4,2 e 9,3. 
 
Figura 17: Leitura microscópica da bactéria Staphylococcus 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Essas bactérias são patogênicas tanto para seres humanos quanto para animais, causando 
uma variedade de doenças. Entre essas doenças estão dermatites, piodermites, mastite, 
foliculite, endometrite, conjuntivite, pododermatite, onfalite, linfadenite, cistite, pneumonia, 
meningite, endocardite e outras. 
Infelizmente, o resultado do esfregaço não atendeu às expectativas. Isso ocorreu devido 
à adição excessiva de amostra biológica, o que prejudicou a fixação correta da coloração de 
Gram. Essa inadequação comprometeu a possibilidade de analisar as características da bactéria 
por meio do microscópio.11 
 
 
 
 
 
6. ANÁLISE. 
Apesar da frustração por não conseguir ler a amostra biológica sob o microscópio, sob 
a orientação da professora Vanessa, obtivemos uma experiência prática significativa sobre a 
execução da técnica da coloração de Gram. Durante esse processo, adquirimos um 
entendimento detalhado dos passos envolvidos e da relevância dessa técnica na rotina 
laboratorial. 
A coloração de Gram é um procedimento de curta duração que nos permite identificar 
e categorizar as bactérias em dois grupos distintos: as Gram-positivas, que adquirem uma 
coloração roxa, e as Gram-negativas, que se tingem de vermelho. A partir dessa diferenciação, 
conseguimos obter informações valiosas que orientam a escolha da abordagem terapêutica mais 
eficaz no combate às bactérias. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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RERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS 
 
SANTOS, A. L., et al. Staphylococcus aureus: visitando uma cepa de importância hospitalar • 
J Bras Patol Med Lab • v. 43 • n. 6 • p. 413-423 • dezembro 2007. 
Disponível em: https://doi.org/10.1590/S1676-24442007000600005. Acesso em: 26 de agosto 
de 2023. 
 
FREITAS, Valdionir da Rosa; PICOLI, Simone Ulrich. A coloração de Gram e as variações na 
sua execução. NewsLab, São Paulo, SP, v. 14, n. 82, p. 124-128, out. 2006. [190773]. 
Disponível em: < https://docs.ufpr.br/~microgeral/arquivos/pdf/pdf/Gram.pdf>. Acesso em: 26 
de agosto de 2023. 
https://doi.org/10.1590/S1676-24442007000600005
https://docs.ufpr.br/~microgeral/arquivos/pdf/pdf/Gram.pdf