Esfregaço e Coloração de Gram Microbiologia

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CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD
RELATÓRIO DE PRÁTICA - ACADÊMICO 
	IDENTIFICAÇÃO
	1. Acadêmico: Eva Lorena Pereira Primo Moraes
	2. Matrícula: 5080190
	3. Curso: Biomedicina
	4. Turma: FLC10096BBI
	5. Disciplina: Microbiologia Clínica	Comment by User: 
	6. Tutor(a) Externo(a): Ângela Medeiros 
	DADOS DA PRÁTICA
	1. Título: Preparo de Esfregaço e Coloração de Gram
	2. Local: Laboratório Virtual (AVA)
	3. Período: FLEX
	4. Semestre: 6º
	5. Data: 10/05/2024
	INTRODUÇÃO
	O procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor dos corantes com base nas diferenças das propriedades químicas e físicas da parede celular. Em geral, bactérias Gram-positivas apresentam carga positiva e têm parede celular espessa (50-90%), na qual retêm o corante primário chamado violeta de cristal (CV), que é negativamente carregado, e, então, coram em roxo/violeta (exemplo: Staphylococcus aureus). Já as bactérias Gram-negativas (apresentam carga negativa) coram de vermelho/rosa devido à retenção do corante de contracoloração chamado de safranina, que apresenta carga positiva (exemplo: Escherichia coli).  As bactérias Gram-negativas têm uma camada mais fina de peptideoglicano (10% da parede celular) e perdem a primeira coloração com CV durante a descoloração com o enxágue com álcool, mas retêm a contracoloração safranina, ficando vermelha/rosa. Elas também têm uma membrana externa adicional que contém lipídios, que é separada da parede celular por meio do espaço periplasmático (MADIGAN et al., 2016; TORTORA et al., 2016).
	OBJETIVOS
	Realizar os procedimentos da coloração de Gram de forma consistente e precisa;
	Diferenciar as bactérias entre as duas categorias principais: Gram-positiva ou Gram-negativa.
	Vizualizar diferentes morfologias, cores, brilhos e bordas das bactérias presentes no ágar manitol e MacConkey.
	
	MATERIAIS
	• Alça de platina bacteriológica;
· Bico de Bunsen;
· Kit de coloração de Gram;
· Lâmina de microscopia;
· Microscópio óptico;
· Óleo de imersão;
· Placa de ágar sangue de carneiro;
· Soro fisiológico 0,9%.
 
	METODOLOGIA
	O procedimento foi iniciado com a lavagem das mãos. Coloquei o equipamento de proteção individual localizado no “Armário de EPIs”. Para esse experimento será necessário a utilização do jaleco, luvas, óculos e máscara. 
COLORAÇÃO PELO MÉTODO DE GRAM 
Levei a lâmina com o esfregaço para a área de coloração e coloquei no suporte. Inicialmente coloquei o Cristal Violeta sobre o esfregaço e deixei agir por 1 minuto, depois lavei gentilmente em água corrente para remover o excesso de corante, em seguida, coloquei o Lugol e deixei agir por 1 minuto. Repeti a lavagem. Depois coloquei o álcool e deixei agir por apenas 5 segundos e repeti a lavagem, por fim, coloquei a Fucsina, deixei agir por 1 minuto, em seguida, repeti a lavagem. 
 VIZUALIZANDO A LÂMINA ia lâmina para o microscópio, executei todos os ajustes necessários para visualização. Gotejei o óleo de imersão sobre a lâmina, para uma melhor análise, e selecionei a objetiva de 100x, observei o resultado através da lente ocular e anotei suas impressões. Atentei-me à instrução que, para movimentação do revólver ou para efetuar as configurações de posicionamento dos parafusos, condensador ou diafragma, devo clicar com o botão esquerdo do mouse sobre a área desejada e movimentar o cursor do mouse para direita ou esquerda.
	FOTOS
	
	Legenda
	Bico de Bulsen pronto para fixar amostra na lâmina.
	
	Legenda
	Processo de coloração de Gram e lavagem
	
	Legenda
	Visualização da lamina 1, com bactérias gram positivas
AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 
1. Qual é o objetivo da coloração de Gram?
R= É importante para caracterizar e classificar inicialmente as bactérias, permitindo que elas sejam visualizadas em microscópio óptico, uma vez que sem ela seria impossível observá-las ou identificar suas estruturas.
2. Por que é necessário a etapa com álcool-acetona na coloração de Gram?
R= Essa etapa extrai os lipídeos, que resulta em uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas.
3. Por que devemos utilizar o óleo de imersão para a visualização das colônias?
R= O óleo de imersão permite que os raios de luzes não dispersem, atravessando a lâmina-óleo, permitindo a visualização das bactérias 
	REFERÊNCIAS
	Biblioteca Uniasselvi; 
Livro Imunologia AVA;
 
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