MÉTODOS PARA O ESTUDO DAS CÉLULAS

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MÉTODOS PARA
O ESTUDO DAS
CÉLULAS
PROFA. DRA. MARINA LOBO
BIOLOGIA DA CÉLULA
É POSSÍVEL VER UMA CÉLULA A OLHO NU?
QUAL O LIMITE DE RESOLUÇÃO DO OLHO HUMANO?
COMO ESTUDAR UMA CÉLULA?
Limite de resolução
do olho humano: 
0,2 a 0,1 mm > 200 a
100 μm
Limite de resolução
do Microscópio
Óptico (1000 X): 
0,2 a 0,1 μm > 200 a
100 nm
LIMITES DE RESOLUÇÃO
Poder 
versus 
Limite
HISTÓRIA DA BIOLOGIA CELULAR
•MICROSCÓPIOS ÓPTICOS >> LUZ VISÍVEL >> LIMITE PARA A NITIDEZ DE
DETALHES >> TEORIA CELULAR
•MICROSCÓPIOS ELETRÔNICOS >> INVENTADOS NA DÉCADA DE 1930 >>
UTILIZAÇÃO DE FEIXES DE ELÉTRONS >> POSSIBILITA VISUALIZAÇÃO DE
DETALHES DA ESTRUTURA CELULAR
As células não eram
visíveis até o século XVII,
quando o microscópio
foi inventado. 
1 6 7 0 1674 1874 1930 1932/1933
Robert Hooke
utilizou um
microscópio
primitivo para
examinar um pedaço
de cortiça.
Matthias Schleiden e
Theodore Schwann
observaram que
células individuais
constituem a unidade
fundamental da vida.
 Ernst Ruska e Max Knoll
desenvolvem o microscópio
eletrônico. 
Antonie van
Leeuwenhook
descreveu os
microrganismos que
visualizou em seu
microscópio simples:
a primeira descrição
de células vivas.
Carl Zeiss vem sendo
um respeitável nome
na tecnologia óptica
por mais de 150 anos e
muitos de seus
microscópios estão
entre os mais refinados
já construídos.
A invenção do
microscópio é
creditada ao holandês
Zacharias Janssen
que, ainda menino, o
construiu com a ajuda
de seu pai Hans.
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ESTUDO CELULAR EM 
MICROSCOPIA ÓPTICA
Parte Óptica: 
sistemas 
de lentes
Objetiva 
 recebe o cone de
luz, projeta uma
imagem
aumentada
Condensador 
projeta a luz sobre
as células
Ocular recebe
imagem da
objetiva e amplia
CONSTITUÍDO DA PARTE MECÂNICA + PARTE ÓPTICA
 Para melhoria significativa da resolução, tornou-
se necessária a utilização de outra forma de
radiação, com comprimento de onda inferior ao
da luz
Possibilita conhecer a ultraestrutura das células
e da matriz extracelular
Propriedade dos feixes de elétrons de serem
desviados por um campo eletrostático ou
eletromagnético, do mesmo modo que um raio
de luz é refratado ao atravessar uma lente
ESTUDO CELULAR EM 
MICROSCOPIA ELETRÔNICA
Intervalo de aumento à 1.000x a 200.000x
Poder de resolução = 1nm (200x maior que o MO)
O espécime é colocado no vácuo e deve ser muito fino
Uso de metais pesados para contraste 
Não é possível
observar
material vivo
neste tipo de
microscópio!
Com o microscópio eletrônico de varredura
podem ser obtidas imagens topográficas
tridimensionais 
Espécime coberto com um filme fino de metal
pesado
Utiliza-se um feixe de elétrons que age sobre a
superfície do material. Nela, os elétrons
excitam as moléculas da amostra, que emitem
um fino feixe de elétrons secundários que
adquirem um movimento. Como esses elétrons
são dirigidos a um tubo fotomultiplicador,
formam imagens em uma tela
Resolve detalhes entes 3 e 20 nm
Imagens da Galeria do
Centro de Microscopia
Eletrônica (CME) da
Universidade Federal do
Paraná (UFPR):
 http://www.cme.ufpr.br
DIMENSÕES DAS
ESTRUTURAS
CELULARES E
SUBCELULARES
Célula animal: ± 10-20μm
Célula vegetal: ± 50μm
Bactérias: ± 1-5μm
Vírus: ± 0,05μm
Núcleo: ± 3-6μm
Mitocôndrias: ± 0,5μm
Ribossomos: ± 25nm
Membrana: ± 10nm
E AGORA, SE VOCÊ PRECISASSE
PREPARAR UM MATERIAL PARA
VISUALIZAÇÃO DAS CÉLULAS? 
COMO VOCÊ FARIA?
SÃO EXTREMAMENTE VARIADOS OS
MÉTODOS PARA SE LEVANTAR
INFORMAÇÕES SOBRE A CÉLULA.
 NOVAS TÉCNICAS SÃO CRIADAS A
CADA DIA E A TENTATIVA DE SE
MANTER ATUALIZADO SERIA
FRUSTRADA E/OU TOMARIA TODA A
ATENÇÃO DE QUALQUER
PROFISSIONAL.
Consiste em coletar o material, que
deverá ser fino ou transparente o
suficiente para que possa ser
colocado diretamente sobre uma
lâmina e se proceder com as
técnicas subsequentes de fixação e
coloração. 
MONTAGEM TOTAL ESFREGAÇO
Células livres presentes nos
fluidos corpóreos, como sangue,
sêmen, podem ser dispostas
sobre lâmina em fina camada, de
maneira que possam ser
observadas em microscópio de
luz. 
ESPALHAMENTO ESMAGAMENTO
Esse método consiste em
esmagar, entre lâmina e
lamínula, o material a ser
analisado. 
O espalhamento consiste em
promover uma raspagem das
camadas superficiais de membranas
mucosas com uma pequena espátula
ou palitos e, posteriormente, deslizar
esse material raspado sobre a
superfície limpa de uma lâmina. 
DECALQUE CORTE HISTOLÓGICO
A técnica histológica consiste
na obtenção de cortes
extremamente finos (na casa
dos micrômetros de espessura)
e na sua colocação sobre a
lâmina. 
O objetivo dessa técnica de coleta é
colocar sobre uma lâmina,
devidamente limpa, núcleos inteiros
de órgãos com consistência mole,
como o fígado, o baço, os rins e o
timo. Os núcleos ficarão impressos
na lâmina, podendo ser feitos os
passos seguintes de fixação e
coloração. 
ATENÇÃO: EXISTEM DIFERENÇAS FUNDAMENTAIS ENTRE O
PROCESSAMENTO DE FRAGMENTOS DE ÓRGÃOS PARA A
MICROSCOPIA DE LUZ E PARA A ELETRÔNICA >> PROCESSO DE
FIXAÇÃO, INCLUSÃO, CORTE E COLORAÇÃO.
COLORIR PARA QUÊ?
citoquímica
A citoquímica dedica-se aos estudos dos
métodos de coloração dos tecidos e
constituintes celulares ou subcelulares
DISCUTIREMOS
ISSO NA 
AULA PRÁTICA!
Corantes básicos ou catiônicos (+)
 >> Liga-se a moléculas com carga (-)
Ex. Hematoxilina, azul de metileno
Corantes ácidos ou aniônicos (-)
>> Liga-se a moléculas com carga (+)
Ex. Eosina
NEUTROS - Efeito tintorial sobre as
estruturas que não revelam acidofilia
nem basofilia. 
Ex:Vermelho neutro.
NÃO 
PRECISADECORAR!
E AGORA, SE VOCÊ PRECISASSE
ESTUDAR UMA ORGANELA
ESPECÍFICA DA CÉLULA?
COMO VOCÊ FARIA?
 O conjunto de procedimentos
que levam à separação das
organelas celulares chama-se
fracionamento celular.
FRACIONAMENTO CELULAR
 acordo com sua massa, sua
superfície e seu peso específico
Romper a membrana por choque osmótico,
ultrassom ou passando à suspensão de
organelas através de pequenos orifícios. 
No caso do núcleo, pode ser usado um
detergente, que, ao solubilizar os lipídios da
membrana, permite a saída do conteúdo
nuclear, constituído de nucléolo, ácidos
nucleicos e proteínas. 
O tratamento com ultrassom, além de ser
utilizado para romper o envelope nuclear, é
empregado para romper mitocôndrias.
ULTRACENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL/
CITOMETRIA DE FLUXO / MICROPIPETAGEM 
Experimentos Single Cell
ATIVIDADE
ATIVIDADE
Compare o microscópio óptico ao microscópio
eletrônico citando 3 diferenças entre eles. 
IDENTIFIQUE O TIPO DE MICROSCÓPIO UTILIZADO
PARA OBTENÇÃO DAS IMAGENS ACIMA.
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IDENTIFIQUE O TIPO
DE MICROSCÓPIO
UTILIZADO PARA
OBTENÇÃO DA
IMAGEM AO LADO E
OS COMPONENETES
CELULARES
APONTADOS.
Esta secção fina pertence a uma célula de levedura que foi
rapidamente congelada e teve seu gelo vítreo substituído por solventes
orgânicos e então por resina plástica. Núcleo, mitocôndrias, parede
celular, aparelho de Golgi e ribossomos podem ser todos prontamente
visualizados em um estado que provavelmente seja o mais parecido
possível com o real.
ATIVIDADE
De acordo com a preparação de cortes histológicos, quais das alternativas abaixo
está na ordem CORRETA dos passos necessários para a preparação das lâminas:
A) Fixação, desidratação, diafanização, impregnação com parafina, corte com uso do
micrótomo, coloração e montagem. 
B) Fixação, diafanização, desidratação, impregnação com parafina, corte com uso do
micrótomo, coloração e montagem.
C) Desidratação, fixação, diafanização, impregnação com parafina, corte com uso do
micrótomo, coloração e montagem.
D) Fixação, desidratação, impregnação com parafina, diafanização, corte com uso do
micrótomo, coloração e montagem.
E) Fixação, desidratação, diafanização, coloração, impregnação com parafina, corte
com uso do micrótomo e montagem. 
MÉTODOS PARA
O ESTUDO DAS
CÉLULAS
PROFA. DRA. MARINA LOBO
BIOLOGIA DA CÉLULA