Células Eucarióticas e Procarióticas

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Aula Prática 1:
Células Eucarióticas e Procarióticas e coloração de Gram
Biologia geral e aplicada i / 2017 (shs 0377)
Professora: Dra. Maria Bernadete A. Varesche
Técnica: Juliana Gonçalves
Monitoras: Alejandra c. villa Montoya
Raissa C. da silva mazareli
Células Procarióticas X Células Eucarióticas
Cianobactérias
Bactérias
Fungos
Archaea
Plantas
Protozoários e Plâncton
Animais
Procariótica  pobreza de membrana, única membrana é a membrana plasmática.
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Procariótica  pobreza de membrana, única membrana é a membrana plasmática.
Parede celular  função de proteção mecânica e dá forma à célula (forma simples), já que não tem citoesqueleto (eucariontes tem formas mais complexas).
Eucariótica  O núcleo e o citoplasma são partes mofologicamente bem distintas. Compartimentos que separam diversos processos metabólicos  Extenso sistema de membrana cria, no citoplasma, microrregiões que contem moléculas diferentes e executam funções especializadas.
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PROCARIÓTICAS
Células pequenas;
EUCARIÓTICAS
Células grandes;
Ausência de envoltório nuclear;
Presença de parede celular.
Presença de envoltório nuclear;
Ausência de parede celular.
Ausência de organelas e citoesqueleto;
Presença de organelas e citoesqueleto;
Microscopia ótica
Aumento: 1000 x
Micrografia eletrônica de varredura
Aumento: 400.000 x
Micrografia eletrônica de transmissão
Aumento: 100.000 x
Células Procarióticas
Células Eucarióticas
DIFERENÇAS ENTRE OS TIPOS CELULARES OBSERVÁVEIS AO MICROSCÓPIO ÓPTICO: 
Tamanho e Presença/ Ausência de Núcleo
Fotos: E. coli, célula da mucosa da boca, hemácia, plaqueta e leucócito
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Ocular
Objetivas e revolver
Mesa ou platina
Condensador
Macrométrico e micrométrico
Fonte de luz 
Lâmina
Imagem observada 
Olho
Ocular
Fonte de luz
Imagem intermediaria (invertida) 
Lente do condensador
Organismo
Lente da objetiva
Por que as lâminas precisam ser coradas?
As células não são coloridas?
Células da mucosa da boca sem corante
Célula da mucosa da boca corada com azul de metileno
AZUL DE METILENO
Corante Catiônico (Básico)
Substrato Aniônico (ácido)
- Ácidos nucléicos: DNA e RNA;
- Parece celular das bactérias.
Acidófilo  Afinidade com estruturas ácidas
PROCEDIMENTOS:
1° Células eucarióticas – Mucosa bucal
1. Faça uma suave raspagem da bochecha (mucosa bucal) com um suabe estéril.
2. Espalhar bem o material coletado sobre uma lâmina limpa apenas uma única vez e direção.
3. Pingar uma gota de azul de metileno 0,5% sobre o material e cobrir com uma lamínula.
4. Retirar o excesso de corante com o auxílio de um papel higiênico.
5. Levar ao microscópio para focalizar e observar com as objetivas de 4x, 10x e 40x.
6. Fazer um desenho esquemático.
2° Células Procarióticas – cultura de Escherichia coli
FIXAÇÃO DA AMOSTRA POR CALOR
Aderência da parece celular bacteriana (peptideoglicanos e outros compostos orgânicos) na lâmina de vidro.
FIXAÇÃO POR ÁLCOOL 70%
Mantêm de forma definitiva as estruturas da célula.
AMOSTRAGEM
1. Com uma alça de platina estéril retirar amostra de cultura, esfregar na lâmina de vidro até espalhar bem a amostra coletada;
2. Fixar as células pelo calor;
3. Gotejar sobre o esfregaço álcool 70% 
4. Corar com azul de metileno;
5. Visualizar ao microscópio com objetivas de 4, 10, 40 e 100x (utilizar óleo de imersão).
A coloração de Gram é uma coloração diferencial através da qual as bactérias são classificadas em 
gram-positivas ou gram-negativas; 
Agromyces sp
Escherichia coli
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 Gram-positivas 
Camada de peptideoglicano mais espessa
Diferença na parede celular:
Gram-negativas: 
Camada fina de peptideoglicano e uma membrana externa composta por lipopolissacarídeos. 
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Corante Violeta Cristal
Cora igualmente todas as células
Solução de Iodo
Fixador do corante - Complexo insolúvel
Descoloração n-Propanol
a) Desidrata parede espessa  corante é retido  gram+ 
b) Dissolve membrana lipídica  corante é removido gram-
Corante Safranina
Células descoloridas ficam vermelhas
Fixação
Metanol - previne a lise e evita que o esfregaço desprenda no momento da coloração
N-Propanol dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descolorindo as células, Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias gram positivas e provoca a contração dos poros do peptideoglicano, tornando-os impermeáveis ao solvente; o corante primário é retido e as células permanecem coradas.
A retenção ou não do corente primário é, portanto, dependente das propriedades físicas e químicas das paredes celulares bacterianas tais como esspessura, densidade, porosidade e integridade.
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Violeta de cristal
1 minuto
H2O
Lugol (iodo)
1 minuto
H2O
H2O
N-Propanol
30-60 segundos
Safranina
30-60 segundos
 Observação ao microscópio óptico com 
aumento de 1000x 
Objetiva de 100x  utilizar óleo de imersão
PROCEDIMENTOS:
Depois de fixar com metanol....
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