Introdução a histologia

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Histologia 
Introdução a histologia 
ETIMOLOGIA 
hystos ￫ tecido logos ￫ estudo 
 ↳ células com determinado tipo de 
especialização organizadas em grupos 
 ex: epitelial, conjuntivo, muscular, nervoso 
PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS 
● COLETA: durante uma cirurgia, biópsia, autópsia 
 ↪ Clivagem: cortes em pedaços pequenos para 
facilitar a penetração do fixador (0,5 cm). 
Posteriormente, esses são guardados em uma caixinha, 
chamada cassete, que mantem o formato. 
● FIXAÇÃO: permite manter a conformação/ 
arquitetura celular o mais próximo possível do normal. 
Os fixadores (formol 10%) insolubilizam as proteínas, 
formando pontes que endurecem os fragmentos. ↓ 
principais componentes responsáveis pela 
estrutura das células e dos tecidos. 
 ↪ O tempo pode variar entre 4 a 72 horas. 
● DESIDRATAÇÃO: remoção de água dos tecidos com 
uma série gradual em banhos de álcoois de 50% até 
100%. 
● CLARIFICAÇÃO OU DIAFANIZAÇÃO: substituição 
dos álcoois pelo xilol (subst.. miscível com álcool e 
parafina). 
 ↪ Os fragmentos ficam transparentes. 
● INCLUSÃO: os fragmentos são colocados em 
parafina derretida (56 a 60°C). 
O calor evapora o xilol e o espaço é preenchido com 
parafina, que solidifica e forma um bloco. 
● CORTE (Microtomia): cortam-se em delgadas fatias 
de 5 a 10 μm (1 μm = 0,001 mm = 0,0001 cm) 
● MONTAGEM: coloca-se o corte em uma lâmina de 
vidro. 
● COLORAÇÃO: adição de corante, facilitando a 
identificação dos componentes do tecido. 
 ↪ Os corantes são agrupados em 3 classes: 
1) Distinção entre componentes ácidos e básicos da 
célula. 
 ￫ Corantes básicos coram de roxo/azulado 
componentes ácidos (estruturas basófilas) da célula 
(DNA - núcleo). 
 ex: hematoxilina, azul de toluidina e azul de 
metileno 
 Obs: azul de toluidina é um corante básico que cora, 
geralmente, em azul, entretanto quando há muito ácido 
na célula analisada ele cora em púrpura (metacromasia). 
 Obs2: Metacromasia: mudança de coloração em 
determinadas substâncias na presença de outras 
substâncias ou de elementos orgânicos. 
 ex: ao utilizar o azul de toluidina para corar 
mastócitos, a coloração fica púrpura em virtude da 
heparina (muito ácida) nos seus grânulos 
citoplasmáticos. 
 Obs3: azul de metileno é um corante básico usado 
como indicador, pois as células vivas (ex: leveduras) 
metabolizam esse corante e ficam incolor, desse modo, 
somente as células mortas irão se corar. 
 ￫ Corantes ácidos coram de rosa os componentes 
básicos (estruturas acidófilas/eosinófilas) da célula 
(proteínas citoplasmáticas) 
 ex: eosina, orange G e fucsina ácida 
 → Células cromófilas – Acidófilas e Basófilas: são 
células que apresentam afinidade pelo corante 
 →Células cromófobas: são células que apresentam 
pouca afinidade por corante. 
2) Distinção entre componentes fibrosos da matriz 
extracelular. 
 ￫ Fibras de colágeno (tec. conjuntivo): têm caráter 
básico é corada de azul ou verde por tricômico. 
 Obs: tricômico: combinação de 3 corantes usados 
para corar fibras colágenas em uma coloração 
diferente, geralmente azul, a fim de que ela possa ser 
distinguida do músculo liso. 
 ex: tricômico de Mallory, de Masson e de Gomori 
 ￫ Fibras musculares: coradas em vermelho 
 ￫ Fibras elásticas (presentes nas artérias): coradas 
em marrom ou preta por corantes de Weirgert e de 
Verhoeff. 
3) Sais metálicos que precipitam sobre os tecidos 
 ￫ Impregnação por sais de prata: identifica fibras 
reticulares – colágeno III (encontrado no fígado e no 
baço) que não são visíveis em preparações coradas 
com HE. São coradas na cor preta com impregnação 
com sais de prata (Ag), por isso são chamadas de 
argirófilas. 
4) Ácido periódico reativo de Schiff (PAS) 
● Identifica polissacarídeos na cor púrpura/magenta 
● Glicogênio 
 
Microscopia 
ETIMOLOGIA 
mycro ￫ pequeno skopein ￫ ver 
1 μm = 0,001mm = 0,0001cm 
TIPOS DE MICROSCOPIA 
Microscopia de Luz 
1- Condensador: concentra a luz da lâmpada e 
projeta um feixe luminoso sobre a amostra 
2- Objetiva: recebe a luz e projeta uma imagem 
aumentada para a ocular. 
3- Lente ocular: novamente amplia a imagem e 
projeta na retina. 
Microscopia de contraste de fase 
● Cortes não corados 
● Células vivas 
Microscopia de fluorescencia 
● Compostos fluorescentes excitados por um 
determinado comprimento de onda – vários planos 
em foco 
Microscopia confocal 
● Compostos fluorescentes excitados por um 
determinado comprimento de onda – um plano em 
foco 
Microscopia eletronica de transmissao 
● Ampliação de cerca de 400 mil vezes 
● Feixes de elétrons atravessam a amostra 
● A imagem final é projetada em chapa fotográfica em preto e 
branco 
Microscopia eletronica de varredura 
● Feixes de elétrons não atravessam a amostra 
● Varrem uma camada de metal (ouro) previamente aplicada 
na amostra 
● Fornece uma ideia de três dimensões 
Imunocitoquimica 
● Identifica por meio de anticorpos, proteínas específicas 
● Importante na prática clínica 
● Anticorpo marcou a proteína de marrom (antígeno 
carcinoembriônico) encontrada em tumores – corante: 
hematoxilina. 
● Proteína (c-Erb-B2 ou Her2 ou Her2-neu) encontrada 
aumentada nos casos