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Micologia e Virologia Identificação das características macroscópicas e microscópicas de fungos e Realizar a coloração com lactofenol azul-algodão Pedro Mareti Maçaira Fígaro Aprender a identificar as características macroscópicas e microscópicas de fungos Um pouco de teoria... Os fungos, foram classificados como pertencentes ao Reino Vegetalia Não possuem clorofila nem pigmentos fotossintéticos, obtendo sua energia por absorção de nutrientes. Os fungos têm, ainda, algumas semelhanças com o Reino Animalia, ou seja, armazenam glicogênio e possuem quitina na parede celular Apresentam características conflitantes com as típicas desse Reino Não armazenam o amido e não apresentam, com exceção de alguns fungos aquáticos, celulose na parede celular. Os fungos são heterotróficos e eucarióticos Essas características resumidas é que justificaram, a partir de 1969, a criação de um Reino separado Com um só núcleo, como as leveduras, ou multinucleados, como os fungos filamentosos ou bolores e os cogumelos (fungos macroscópicos). com um só núcleo, como as leveduras, ou multinucleados, como os fungos filamentosos ou bolores e os cogumelos (fungos macroscópicos). Reino Fungi A célula fúngica é constituída pelos principais componentes encontrados nos organismos eucarióticos. Todas as células fúngicas são eucarióticas, isto é, possuem núcleo com membrana nuclear Os fungos podem ser unicelulares ou multicelulares quando as células são tubulares e denominada de hifas cujo conjunto constitui o micélio. IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Fungos Comestíveis: Agaricum bisporus Cogumelo shimeji cogumelo champignon Shitake Hiratake Himematsutake IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Fungos Comestíveis: A. muscaria IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Fungos Venenosos: Creative Commons- Freepik: 14561214 Amanita Phalloides – Chapéu da morte Psilocibe Semilanceata - Chapéu da Liberdade Penicillium notatum IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Produção de Substâncias Químicas: Creative commons IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Produção de Alimentos: Produção de Pão Produção de Vinho Onicomicose Tinea captis Candidíase Inframamária IMPORTÂNCIA DOS FUNGOS: Doenças no Homem: Micoses Superficiais LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009 CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS FUNGOS Características Gerais: Unicelulares Ovoides Estruturas Vegetativas: Leveduras Longos filamentos Ramificações verdadeiras Estruturas de frutificação Filamentosos Dimórficos Supra-Reino: Eukarya Heterotróficos Parede celular rígida com quitina Reprodução: Gemulação LEVEDURAS: CARACTERÍSTICAS GERAIS DOS FUNGOS Unicelulares Ovoides LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009 As leveduras apresentam colônias pastosas, de cor creme, branca, preta, rosa, dependendo da espécie, sendo que a maioria varia de branca a creme As células têm formas: Arredondadas Ovoides Alongadas As leveduras são unicelulares não apresentando diferenciação morfológica entre parte vegetativa e reprodutiva. Reprodução Micélio Estrutura de Frutificação Hifa Ramificação LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009 Hifas Aéreas Micélio Aéreo Esporos Dente de Leão Estrutura de Frutificação Reprodução: Esporulação Micélio Vegetativo FUNGOS FILAMENTOSOS: LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009 TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, CL. Microbiologia. 10. ed., Porto Alegre: Artmed, 2010 FUNGOS FILAMENTOSOS: MACROSCÓPICAMENTE: Colônias “Grandes”; Micélios aéreos; Pigmentação; LUIZ B. TRABULSI e FLÁVIO ALTERTHUM. Microbiologia. 5 ed. Atheneu, 2009 TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, CL. Microbiologia. 10. ed., Porto Alegre: Artmed, 2010 Dimorfismo Fúngicas: 23ºC = Micélio 37ºC = Levedura Paracoccidioides brasiliensis LEVEDURAS FUNGOS FILAMENTOSOS Eucariotas Eucariotas Parede Celular contendo polissacarídeo e/ou proteína e/ou glicosamina e/ou lipideo Parede Celular contendo quitina e/ou celulose Unicelulares Pluricelulares Facultativos Aeróbios Estritos ph preferencial: 4,0 a 4,5 ph preferencial: 5,5 a 6,0 Temperatura preferencial: “ambiente” Temperatura preferencial: “ambiente” Tolerância à alta osmolaridade Tolerância à alta osmolaridade Vamos para a prática! Identificação de fungos e coloração Proposta da Aula Prática: 1. Observar as colônias de fungos pré-cultivadas e anotar as suas características 2. Coloração com lactofenol azul-algodão Materiais para a Aula Prática Meios de cultura de fungos (Ágar Saboraud) Corante Azul de Algodão (Lactofenol) Lamínula Lâmina Fio de platina ou alça Microscópio óptico Procedimento 1: Observar as colônias de fungos pré-cultivadas e anotar as seguintes características: Micélio (leveduriforme, filamentoso, rastreio, aéreo) Cor da colônia Bordos (inteiro, franjado, liso, ondulado) Superfície (lisa, rugosa, cerebriforme, coriácea, algodonosa, mucoide, cremosa, concêntrica, opaca, aveludada, brilhante e pulverulenta) Tipo (seca, úmida) Protuberância central (presente ou ausente) Elevação (achatada, levantada, amontoada) Meio de cultura de fungos - Ágar Saboraud Seletividade e facilidade no cultivo de fungos pH Levemente ácido Favorece o crescimento de dermatófitos e inibe algumas espécies bacterianas de interesse clínico Cloranfenicol - antibiótico de amplo espectro Elevada concentração de dextrose Proporciona uma vantagem para o desenvolvimento dos fungos estáveis por osmose Incubação do Ágar Sabouraud Vantagens: Fonte: encurtador.com.br/agzR3 ; encurtador.com.br/krxy0 Mínimo 3 dias em temperatura de 25°C. Caldo presente no método serve para controlar a esterilidade e realizar procedimentos baseados na utilização de membranas filtrantes Fornecido em placas prontas para o uso eliminando o complicado trabalho de preparar o meio no laboratório. Exemplos de colônias Observação das colônias Na bancada do laboratório Procedimento 2: Colocar uma gota de lactofenol azul-algodão sobre a lâmina. Retirar pequeno fragmento da cultura de bolor ou uma alíquota da cultura de levedura, utilizando alça ou fio de platina. Colocar o fragmento da cultura ou a alíquota de levedura sobre a gota de lactofenol e homogeneizar. Cobrir com lamínula e examinar ao microscópio nas objetivas de 10 e 40 vezes. Corante Azul de Algodão (Lactofenol) Usado para tornar mais distintas as estruturas hialinas dos fungos - corante citoplasmático Fonte: http://www.abq.org.br/cbq/2017/trabalhos/13/11610-24707.html O lactofenol azul de algodão é composto de lactofenol, que atua como fluido de montagem, e de azul de algodão, um corante. Os organismos suspensos no fluido de montagem são rapidamente mortos pela presença do fenol que age como citotóxico Precipitando proteínas celulares e inativando sistemas enzimáticos essenciais O ácido lático preserva as estruturas fúngicas O azul de algodão é incorporado à fórmula como corante diferencial A visualização e preservação de fungos através deste sistema são excelentes Não ocorre plasmólise ao matar os organismos. Para quitina e celulose Composição parede celular TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, CL. Microbiologia. 10. ed., Porto Alegre: Artmed, 2010 Observar fungos do tipo levedura no microscópio
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