Teste de Sensibilidade a Antibióticos

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Bacteriologia 
clínica
Teste de sensibilidade 
a antibióticos 
Profa. Dra. Brunna Robles
Conhecer os principais mecanismos de
resistência antimicrobiana.
Conhecer os procedimentos envolvidos na
realização de um antibiograma pela
técnica de disco difusão em Ágar (Método
de Kirby-Bauer).
Verificar a importância da solicitação de
um antibiograma na prática médica.
Procedimento 
 Local da prática: Laboratório multidisciplinar.
 Conhecer os procedimentos envolvidos na
realização de um antibiograma pela técnica
de disco difusão em Ágar (Método de Kirby-
Bauer).
 Avaliação da resistência aos antibióticos.
Fonte: Google Imagens: https://esquadraodoconhecimento.files.wordpress.com/2013/02/ac3a7c3a3o-de-antibic3b3ticos.png acesso març.2022
Principais mecanismos de ação dos antibacterianos
Mecanismos de Resistência natural
Fonte: Adaptado de Furuya e Lowy (2006)
TRANSFORMAÇÃO: absorção de fragmentos de
DNA presentes no ambiente, originados de
outras bactérias mortas.
TRANSDUÇÃO: transferência horizontal de
genes de uma célula para outra.
CONJUGAÇÃO: contacto direto entre 2 células.
Mecanismos de Resistência adquirido
 Alteração na permeabilidade da membrana
 Alteração do sítio de ação
 Bombas de efluxo
 Ação enzimática (estratégia mais
frequentemente observada em bactérias)
Resistência associada a bactérias Gram –.
As porinas na membrana das Gram - permitem a entrada dos antibióticos
 Modificações genéticas nestas proteínas diminuem a entrada do
fármaco (Gram- Pseudomonas aeruginosa).
Alteração da permeabilidade
Alteração do sítio de ação (PBP)
A alteração genética do alvo (PBP) adquirida por plasmídeo, ou por mutação.
Alteração do alvo original, local de ligação do antibiótico à bactéria,
impossibilitando a ligação do fármaco ao local de ação (Gram + S.aureus, S.
pneumoniae e Gram – N.gonorrhoeae, P.aeruginosa).
Bomba de efluxo
Bombas de efluxo são constituídas por proteínas, que quando mutadas
promove efluxo do antibiótico do meio intracelular para o meio extracelular
(Gram- E. coli, K. pneumoniae, Enterobacter e P. aeruginosa).
Ação enzimática
Bactérias produzem enzimas que inativam os antibióticos por meio de
enzimas β-lactamases como: penicilinase, cefalosporinases ou
carbapenemases (Gram+ E. coli, Gram - H. Influenzae e N. gonorrhaeae).
 Estratégia mais frequentemente observada em bactérias
CLAVULANATO DE 
POTASSIO
COMO AVALIAR A RESISTENCIA 
BACTERIANA? 
Antibiograma
Determina a escolha da terapia antimicrobiana
mais adequada, importante ferramenta no
MONITORAMENTO DA EVOLUÇÃO DA
RESISTÊNCIA BACTERIANA.
TESTE DE SENSIBILIDADE A ANTIMICROBIANOS (TSA): determinar o
perfil de sensibilidade e resistência de bactérias e fungos aos
antibióticos.
Técnicas para avaliação da sensibilidade aos antimicrobianos
Escala de McFarland 10 UFC
Padronizar a diluição da bactéria  [ ] 0,5 da escala de McFarland
https://www.scielo.br/j/bjorl/a/CvQHrFZqpQjNdJZ66gsmg6w/?lang=pt#ModalFigf03
TESTE DISCO DIFUSÃO EM ÁGAR
Discos de papel filtro impregnados com concentração padrão de antibiótico
Discos fixados no ÁGAR MUELLER-HINTON.
Fonte:ttp://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/atm_racional/modulo2/metodos5
.htm. Acesso: 29/01/2018
TESTE DISCO DIFUSÃO EM ÁGAR
Resultados: bactéria resistente, sensível ou sensibilidade
intermediária de acordo com o halo de inibição
Utilizado rotineiramente
Fácil execução
Flexibilidade na escolha dos antibióticos
Baixo custo
https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Antibiograms.jpg
MÉTODO QUALITATIVO
Método de suscetibilidade com fita graduada Etest
Fonte:http://www.anvisa.com.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/boas_praticas/modulo5/etest2.
htm. Acesso: 30/01/2018
MÉTODO QUANTITATIVO
 Eteste é uma tira plástica de gradiente
concentração predefinido, estável e com 15
concentrações de antibióticos.
Desenvolvimento da prática
 INSTRUÇÕES:
 Técnica de disco em difusão em Ágar (Método Kirby-Bauer).
 Inoculação correta.
 Disco impregnados com antibióticos conhecidos (Cefalotina,
Bacitracina, Penicilina, Norfloxacino, Sulfazotrim-
Sulfametoxazol + Trimetropin).
 Avaliação dos resultados: sensibilidade e resistência
microbiana.
Desenvolvimento da prática
 PROCEDIMENTO 1: Teste de sensibilidade a antimicrobianos
• Preparar uma suspensão com as cepas bacterianas de
Staphylococcus aureus ou Escherichia coli utilizando salina
estéril (NaCl 0,85%) comparando com a escala 0,5 de Mac
Farland;
• Inocular através de estrias em Ágar Mueller Hinton- por toda
a placa;
• Adicionar os discos de antibióticos com o auxílio da pinça de
forma equidistante pressionando-os levemente;
• Incubar na estufa à 37ºC por 18-24 horas.
Desenvolvimento da prática
 PROCEDIMENTO 2: Avaliação da resistência aos
antibióticos
• Após a incubação, observar o crescimento das bactérias
nas placas e os possíveis halos de inibição formados;
• Medir o diâmetro da zona de inibição usando uma régua
ou paquímetro;
• De cada antibiótico: anotar o diâmetro (em mm).
• Analisar o perfil de sensibilidade de cada bactéria testada.
Desenvolvimento da prática
 PROCEDIMENTO 2: Avaliação da resistência aos
antibióticos
• Após a incubação, observar o crescimento das bactérias
nas placas e os possíveis halos de inibição formados;
• Medir o diâmetro da zona de inibição usando uma régua
ou paquímetro;
• De cada antibiótico: anotar o diâmetro (em mm).
• Analisar o perfil de sensibilidade de cada bactéria testada.
Teste de sensibilidade aos antibióticos
Leitura e interpretação
https://www.biomedicinapadrao.com.br/2011/05/agar-mueller-hinton.html
Leitura e interpretação
 SENSÍVEL: infecção pode ser tratada com a dosagem do
antibiótico recomendado.
 INTERMEDIÁRIO: permite o uso do antibiótico quando
doses maiores podem ser utilizadas.
 RESISTENTES: bactérias não tem seu crescimento inibido
pelas concentrações padrões.
Maior ou menor halo de ação
Escolha dos antibióticos