Técnicas de Biologia Molecular

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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:955519)
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Prova 82893710
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 10/0
Nota 10,00
As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo 
com essas enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar o DNA em regiões específicas, permitindo 
a manipulação do DNA.
( ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e purificada a 
partir de colônias dessas bactérias.
( ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões de 
clivagem aleatórias de 4 a 8 nucleotídeos.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A V - V - F.
B F - V - F.
C V - F - F.
D F - F - V.
A escolha do gel para a técnica de eletroforese deve-se dar através do tamanho da molécula a ser 
isolada e do objetivo do isolamento. Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida para a técnica 
de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir:
I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base nitrogenada de 
diferença. 
II- A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um 
agrupamento de moléculas de tamanho semelhantes. 
III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar, 
enquanto fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose.
 
Assinale a alternativa CORRETA:
A As sentenças I, II e III estão corretas.
B Somente a sentença I está correta.
C Somente a sentença III está correta.
 VOLTAR
A+ Alterar modo de visualização
1
2
D Somente a sentença II está correta.
O mais recente avanço no campo de sequenciamento de DNA foi o desenvolvimento de 
plataformas portáteis capazes de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos. 
Um exemplo dessas plataformas é a MinION. Sobre a plataforma MinION, avalie as asserções a 
seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para que seja realizado o sequenciamento por meio da plataforma MinION, as amostras a serem 
sequenciadas são ligadas a enzimas de processamento. Essas enzimas induzem o fragmento de DNA a 
passar pelo nano poro, onde as variações da corrente elétrica são detectadas.
PORQUE
II- Sendo conhecidas as variações características de cada nucleotídeo, a sequência de nucleotídeos é 
formada rapidamente.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições falsas.
B As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
C As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
D A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
Através da técnica de eletroforese, ocorre a separação de moléculas em populações de tamanhos 
semelhantes, as quais são visualizadas como bandas no gel através de marcadores específicos. Sobre 
os marcadores para técnica de eletroforese em gel, assinale a alternativa CORRETA:
A O corante ideal para eletroforese de DNA e RNA é aquele que não se liga ao DNA ou ao RNA,
ficando somente na solução tampão da técnica.
B O marcador ideal para a técnica de eletroforese em gel será aquele capaz de separar as bandas de
DNA em diferentes tons de cores.
C O corante mais utilizado para marcação de DNA é o azul de brometo.
D O marcador ideal é o brometo de etídio, um corante fluorescente, que se liga ao DNA ou RNA e
possibilita a sua visualização através de luz ultravioleta (UV).
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as 
amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e 
armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse 
– nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos 
devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de 
nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o processo de extração de DNA e RNA 
identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Etapa de Lise.
3
4
5
II- Etapa de Ligação.
III- Etapa de Lavagem.
IV- Etapa de Eluição.
( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue 
no mesmo tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e 
homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, 
pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto. 
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue 
novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do 
tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo 
de coleta e centrifugue novamente.
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo 
tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e 
centrifugue a amostra.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - II - IV - III.
B IV - III - II - I.
C I - II - III - IV.
D II - III - IV - I.
Existem diferentes formas de sequenciar um genoma, sendo que cada uma se aplica dependendo 
da realidade do pesquisador em questão, podendo ser técnicas recentes, que são mais robustas e 
sofisticadas, ou então, técnicas mais antigas, que, ainda assim, demonstram um excelente resultado, 
apesar de serem mais complicadas e menos automatizadas. Sobre essas técnicas, associe os itens, 
utilizando o código a seguir:
I- Sequenciamento de Sanger. 
II- Next Generation Sequencing. 
III- Sequenciamento de terceira geração.
( ) Método de primeira geração, mais conhecido por utilizar nucleotídeos terminados de cadeia 
(ddNTP).
( ) Método que permite a análise da sequência de nucleotídeos em uma única molécula de DNA, 
sem a necessidade de amplificação dessa molécula, em tempo real.
( ) São métodos de nova geração, que não utilizam nucleotídeos terminadores de cadeia para o 
processamento das amostras.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A I - II - III.
B III - II - I.
C II - I - III.
D I - III - II.
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A hibridização in situ foi elaborada com o objetivo de isolar e identificar fragmentos, através do 
anelamento entre duas fitas simples de origens distintas, sejam elas DNA ou RNA. Sobre essa técnica, 
associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Northen-blotting.
II- Southern-blotting.
III- Hibridização in situ.
( ) Técnica que utiliza sondas de ácidos nucleicos, com marcação química, no local em que a 
molécula de interesse deve ser encontrada (RNA dentro da célula, DNA específico em cromossomos). 
( ) Técnica que avalia padrões de sequências de nucleotídeos de genes do DNA e utiliza sondas de 
DNA molde, os quais são marcados com radiação ou quimicamente. 
( ) Nesta técnica, o RNA mensageiro (mRNA) é utilizado a fim de buscar comparar situações 
distintas, como, por exemplo, utilizar amostras controle como padrão para expressão do gene de 
interesse e, assim, comparar com a amostra de interesse. 
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A II - I - III.
B I - III - II.
C I - II - III.
D III - II - I.
O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material 
genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico 
de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções 
a seguir e a relação proposta entre elas:
I- A bactéria E. coli éa principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, 
inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas 
um vetor.
 
PORQUE
II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas 
horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em 
uma colônia diferente de crescimento bacteriano.
Assinale a alternativa CORRETA:
A A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
B As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
C As asserções I e II são proposições falsas.
D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
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[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o roteiro de hibridização, o sucesso dessa prática 
depende da capacidade do DNA de se anelar às sequências complementares após a desnaturação 
(período em que a fita de DNA é simples). Dessa forma, o ponto de fusão do DNA, ou seja, o 
momento em que ocorre a ruptura das pontes de hidrogênio e a abertura da dupla fita de DNA, varia 
de um organismo para outro. O ponto de fusão do DNA também depende da quantidade de pares de 
base G-C e A-T, sendo que, quanto mais pares G-C, maior o ponto de fusão do genoma. Isso ocorre 
porque o par G-C é mais estável, apresentando três pontes de hidrogênio, enquanto o par A-T conta 
apenas com duas. Após o anelamento da sonda com sua sequência-alvo complementar, o padrão de 
hibridização é visto em microscópio de fluorescência. Além do ponto de fusão, outros fatores podem 
interferir na hibridização da sonda de DNA. Sobre esses fatores, analise as opções a seguir:
I- Temperatura de fusão.
II- pH alto para produzir condições de hibridização.
III- Concentração de cátions monovalentes.
IV- Presença de solventes orgânicos.Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a opção I está correta.
B As opções I, II, III e IV estão corretas.
C Somente a opção II está correta.
D Somente a opção III está correta.
O sequenciamento de um gene de um organismo é umas das técnicas mais importante na biologia 
molecular, pois detecta mutações, cadeias de transmissão e origem da chegada do vírus a uma região 
específica. . De acordo com as técnicas empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V 
para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de Sanger, 
em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese.
( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de 
sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA. 
( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo 
adicionado à nova fita.
 Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A V - F - V.
B F - F - V.
C V - F - F.
D V - V - F.
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