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Bacteriologia Clínica Introdução a micro e citologia bacteriana Leticia Maria da Silva Antônio, MSc leticia.antonio@unigranrio.edu.br microbiologia Aplicações dos microrganismos Microbiologia básica e aplicada MICROBIOLOGIA BÁSICA ❖Ambientes acadêmicos ❖ Produção de conhecimento ❖ Teorias científicas ❖ Morfologia, Fisiologia Genética, Taxonomia, Ecologia, etc. MICROBIOLOGIA APLICADA ❖Ambientes comerciais e governamentais ❖ Engenharia e tecnologia ❖ Aplicação prática ❖ Microbiologia veterinária, zootecnia, agrícola, alimentos, industrial Bactérias Fungos Algas Protozoário s Vírus ✓ Podem provocar infecções ✓ Inúmeras formas de diagnóstico ✓ Identificação dos agentes etiológicos ✓ Análise da morfologia, estrutura, reprodução, fisiologia e metabolismo microrganismos TEORIA CELULAR ❖ Fundada no final da década de 1830 ❖ Estabelece que todos os seres vivos são compostos por células ❖ Idealizadores foram o botânico alemão Matthias Jakob Schleiden e o zoólogo alemão Theodor Schwann O VÍRUS É UM SER VIVO? • Organismo acelular ✓“Um organismo é uma unidade elementar de uma linhagem com uma história evolutiva individual (Luria, 1978) ✓“acelular = sem estrutura de célula (protoplasma circundado por membrana)” Ser vivo ✓ Apresenta capacidade de: nutrição, respiração, excreção, irritabilidade, movimento, crescimento e reprodução. ✓Apresenta capacidade de: estocar e replicar informações genéticas e potencial de atividade enzimática. ✓Vida pode ser um fenômeno associado com a replicação de sistemas de informação auto- codificados Taxonomia dos seres Vivos Taxonomia = ciência da classificação Classificação composta por cinco reinos: ❖ Protista (protozoários e algumas algas) ❖ Monera (bactérias procariontes e cianobactérias ou algas azuis) ❖ Fungi ❖ Plantae ❖ Animalia Em 1987, a análise filogenética molecular levou o microbiologista Carl Richard a mudar o rumo da taxonomia de procariontes e a propor em 1990 o domínio Archaea taxonomia dos Seres Vivos Relações evolutivas e a árvore da vida filogenética ❖ Em 1987, a análise filogenética molecular levou o microbiologista Carl Richard a mudar o rumo da taxonomia de procariontes ❖ Propôs em 1990 o domínio Archaea para as arqueobactérias (consideradas representantes das formas mais primitivas de vida na terra) e mais dois outros domínios: as outras bactérias (Bactéria) e os eucariontes (Eucarya) - fungos, protozoários, plantas e animais Carl Richards (1928-2012) taxonomia dos Seres Vivos Relações evolutivas e a árvore da vida filogenética ESCALA DE TAMANHO ❖ O tamanho das bactérias é da ordem de milésimos de milímetro, ou seja, micrômetros (µm), podendo, no entanto, serem observadas em microscopia ❖ O vírus possuidores de dimensões inferiores a 0,2 mm (limite de visibilidade do microscópio ótico), não podem ser observados neste instrumento ❖ A maioria das bactérias estudadas nos laboratórios de Microbiologia mede de 0,5 a 1,0 mm de diâmetro por 2,0 a 5,0 mm de comprimento. ESCALA DE TAMANHO MICRORGANISMOS – ONDE ESTÃO? • No ar, podendo contaminar: microrganismos MICRORGANISMOS – ONDE ESTÃO? No corpo humano: • pulmões saudáveis: 128 espécies de bactérias 2.000 microrganismos por cm2; • boca: 200 espécies de micro- organismos a cada segundo; • mãos: 83% das espécies de microrganismos na mão direita não estão na mão esquerda, e vice- versa. MICRORGANISMOS – ONDE ESTÃO? • No solo: Profundidade (cm) Bactérias aeróbias (106 por grama) 0-8 24 8-20 3,1 20-40 1,9 40-60 0,9 60-80 0,7 80-100 0,15 que marcam a história dos MICROBIOLOGIA - HISTÓRICO: • Dentre os principais fatos microrganismos, destacam-se: Ano Fatos históricos 1665 Robert Hooke foi o primeiro a observar as células Observou microscópio finou cortes de cortiça em um primitivo, visualizando pequenos poros semelhantes a favo de mel, o que chamou de células. histórico que marcam a história dos MICROBIOLOGIA - HISTÓRICO: • Dentre os principais fatos microrganismos, destacam-se: Criador do microscópio Ano Fatos históricos 1674 Antony van Leeuwenhoek observou pela primeira vez os microrganismos “No ano de 1675 descobri seres vivos na água da chuva que tinha ficado alguns dias num pote de barro, vitrificado por dentro. Isto me levou a olhar esta água com grande atenção, especialmente aqueles animaizinhos que me pareciam dez mil vezes menores do que os que podem ser percebidos na água a olho nu”. histórico que marcam a história dos MICROBIOLOGIA - HISTÓRICO: • Dentre os principais fatos microrganismos, destacam-se: Ano Fatos históricos 1859 Pasteur contesta a geração espontânea dos microrganismos A ausência de microrganismos no frascos mantido intacto e a presença no frasco quebrado mostram que o ar contém microrganismos e que estes, ao entrarem em contato com o líquido nutritivo e estéril do balão, desenvolvem-se. histórico MICROBIOLOGIA - HISTÓRICO: Outros fatos importantes Ano Fatos históricos 1796 Jenner cria uma vacina para varíola 1847 Semmelweiss estabelece a causa da febre puerperal 1865 Lister introduz técnicas antissépticas 1876 Koch prova que microrganismos específicos causam doenças específicas 1881 Koch usa ágar para obter uma cultura pura 1892 Iwanowski descobre o vírus 1929 Fleming descobre a penicilina 1983 Luc Montaigner e Robert Gallo anunciam a descoberta do HIV 1995 Anúncio da primeira sequencia completa de um genoma bacteriano Haemophilus influenzae Linha do tempo MICRORGANISMOS NA HISTÓRIA: • PESTE BUBÔNICA ou MORTE NEGRA – varreu a Europa durante a Idade Média, matando 25 milhões de pessoas (1/3 da população); • Transmitida por ratos e pulgas infectadas pela bactéria Yersinia pestis. histórico MICRORGANISMOS NA HISTÓRIA: • GRANDE FOME NA IRLANDA – a requeima da batata por fungo foi responsável pela grande fome na Irlanda no século XIX. Em 1846 cerca de 1,24 milhões de pessoas morreram e 1,2 milhões emigraram; • Transmitida por batatas infectadas por Phytophthora infestans. histórico https://www.google.com.br/imgres?imgurl=http%3A//www.invivo.fiocruz.br/media/requeima.jpg&imgrefurl=http%3A//www.invivo.fiocruz.br/cgi/cgilua.exe/sys/start.htm%3Finfoid%3D1140%26sid%3D2%26tpl%3Dprinterview&docid=oqMm1T7eau3RRM&tbnid=-k_DajO8PRo2gM%3A&w=300&h=280&ei=i77oU67dIezjsASC-IDQBg&ved=0CAIQxiAwAA&iact=c https://www.google.com.br/imgres?imgurl=http%3A//bioweb.uwlax.edu/bio203/s2007/benrud_jaco/index_files/image4901.jpg&imgrefurl=http%3A//bioweb.uwlax.edu/bio203/s2007/benrud_jaco/&docid=Gl1ZBYf91UkQ7M&tbnid=mdqv8_3z4JUqTM%3A&w=372&h=255&ei=077oU-fWJY_MsQS2n4DABQ&ved=0CAIQxiAwAA&iact=c MICRORGANISMOS HOJE: O desenvolvimento da MICROBIOLOGIA permitiu: • CONTROLE E TRATAMENTO DE DOENÇAS • VACINAS • MEDICAMENTOS • TRATAMENTO DE ÁGUAS E ESGOTOS Aplicações MICRORGANISMOS HOJE: microrganismos afetam o planeta e a Importância ambiental: • Estuda como os atmosfera ambiental MICRORGANISMOS HOJE: no preparo e Importância industrial: • Primeira utilização de microrganismos foi conservação de alimentos: pão, vinho, queijos; • Produção de medicamentos: antibióticos, vitaminas. • Controle de qualidade: análises microbiológicas desde a obtenção da matéria-prima até a entrega para consumo do produto acabado. industrial MICRORGANISMOS HOJE: Importância industrial: PRODUTO Contribuição dos Microrganismos Queijo Crescimento contribui para maturação, sabor e aparência. Bebidas Alcoólicas Levedura é utilizada para converter açúcar, suco de uva ou grão de malte tratado em álcool. Vinagre Determinadas bactérias convertem álcool em ácido acético. Insulina Hormônio sintético feito a partir de bactérias criadas por engenharia genética. Ácido Cítrico Alguns fungos são utilizados na produção. industrial MICRORGANISMOS HOJE: e plantas contra proliferação de Importância agrícola: • Proteção de animais microrganismos. • Microrganismos que matam insetossão utilizados como pesticidas naturais. • São também utilizados para manter a fertilidade de um solo. • Mais recente: criação de suplementos alimentares. agrícola ❖ São microscópicas, geralmente < 8μm. Só as colônias são vistas a olho nu ou bactérias gigantes ❖ Devido a sua estrutura simples, as bactérias sobreviver em todos ambientes da terra; ❖ Podem ser encontradas no ar, solo, água, vulcão, mar profundo, fontes quentes, gelo, sal, pele dos homens, etc; bactérias Comparação entre dois tipos celulares Um núcleo celular cercado por uma membrana e várias organelas Comparação estrutural entre dois tipos celulares Estrutura da célula bacteriana Citologia das bactérias As bactérias são seres procarióticos, ou seja, desprovidos de membrana nuclear (também chamada de carioteca). Elas não possuem todas as estruturas internas das células eucarióticas, sendo mais simples em todos os níveis, menos no seu envoltório celular. Conjunto de membranas e estruturas macromoleculares que delimitam a fronteira entre o meio intracelular e o ambiente Envoltório bacteriano Membrana citoplasmática Parede Celular Envoltório bacteriano ❖ Também chamada de membrana plasmática, constituída de fosfolipídios e proteínas, sua estrutura é semelhante a dos organismos não procarióticos, todavia, com exceção dos grupo bacteriano dos micoplasmas, não possuem esteróis. ❖ Trata-se de uma membrana semipermeável, seletiva, sede de várias enzimas, que limita o citoplasma. ❖ Importante, não só para o transporte de íons e metabólitos (ex.: enzimas permeases e porinas), ela também atua em numerosos processos biossintéticos membrana plasmática membrana plasmática Parede celular Responsável pela forma, rigidez bacteriana, divisão celular e muitas vezes manutenção osmótica, com uma espessura de aproximadamente 10 a 20 mm é formada, entre outras substâncias, por um complexo macromolecular, conhecido como mucocomplexo (também chamado de peptidoglicano, mureína, mucopeptídio ou glicopeptídio), de importância prática na taxonomia bacteriana. Nas bactérias chamadas Gram-negativas (Figura 1), este complexo representa uma fração menor do total da parede em relação às Gram-positivas (Figura 2). Parede celular GRAM + • Parede composta de até 90% peptideoglicano; • Pode chegar a 50% do peso da bactéria; • Contém Ácidos teicóicos e Ácidos Lipoteicóicos: ➢ Facilitar a entrada e saída de cátions ➢ Sítios receptores de bacteriófagos ➢ Adesinas ao epitélio do hospedeiro ➢ São antígenos celulares – permitem a identificação sorológica GRAM - • Composta de uma ou poucas camadas de peptideoglicano; • Espaço periplasmático; • E uma membrana externa que contem LPS (lipopolissacarídeo). Parede celular Gram + . As bactérias Gram positivas possuem como porção característica os ácidos teicóicos e camada espessa de peptidoglicano Gram - A parede celular nas bactérias Gram-negativas é quimicamente mais complexa, possuindo maior quantidade de aminoácidos e de lipídeos. Sua fração de LPS (lipopolissacarídio) externa determina sua toxigenicidade e antigenicidade Gram + OU - ? Algumas bactérias com paredes estruturalmente Gram-positivas possuem uma modificação importante que pode ser utilizada na taxonomia Os lipídios estão em maior quantidade e fortemente ligados (cerca de 60% do peso seco da parede), além disso, elas possuem também em sua composição ácidos micólicos. Caráter hidrofóbico da parede Coloração de gram é dificultada Álcool- ácido resistentes Gram + OU - ? Existe um grupo de bactérias que não possui parede celular nem peptidoglicano, apesar de estudos moleculares os colocarem próximos das bactérias Gram negativas ❖ Micoplasmas e arqueobactérias ❖ Resistência a antibióticos Citoplasma ❖ Solução aquosa ❖ Membrana citoplasmática ❖ Partículas insolúveis: - Ribossomos - Nucleóide ❖ Reações químicas Água Sais e íons orgânicos Açúcares Aminoácidos nucleotídicos Vitaminas Coenzimas Enzimas Outros compostos solúveis Citoplasma Material genético da bactéria Dna Dna ou nucleóide bacteriano ❖ Uma única molécula ❖ Circular ❖ Fita dupla – Superenovelado ❖ Não é delimitado por membrana ❖ Características genotípicas e fenotípicas essenciais às bactérias Ribossomos ❖ Síntese de proteínas ❖ Aspecto granular no citoplasma Alguns elementos podem estar presentes, ou não, em determinados gêneros bacterianos. Podendo, muitas vezes, além de sua função para a própria célula, nos auxiliar na taxonomia: ❖ Grânulos e inclusões citoplasmáticas ❖ Plasmídeo ❖ Glicocálice ❖ Flagelos ❖ Pili ou Fímbrias ❖ Esporos Outras estruturas das bactérias Grânulos e inclusões citoplasmáticas ❖ Podem ser visualizados através de colorações especiais, pois geralmente são refringentes. ❖ Existe vários tipos de grânulos e inclusões ❖ Sua natureza varia de acordo com o organismo, porém sua função é sempre de armazenamento. ❖ Encontrando-se reservas de glicogênio, amido, fosfatos, enxofre, etc. ❖ Alguns destes grânulos podem auxiliar na identificação presuntiva da presença de determinadas bactérias Grânulos metacromáticos A reserva de fosfato inorgânico (polifosfatos) – Visualização de grânulos de volutina Grânulos polissacarídicos ❖ Glicogênio e amido ❖ Na presença de iodo, os grânulos de glicogênio ficam de cor marrom-avermelhada, e os grânulos de amido ficam azuis. Inclusões lipídicas ❖ Armazenamento de carbono ❖ Polímero ácido poli-β-hidroxibutírico (PHB) ❖ Nome mais genérico poli-β-hidroxialcanoato (PHB) ❖Mycobacterium, Bacillus, Azotobacter, Spirillum e outros gêneros. Grânulos de enxofre ❖ Armazenamento de enxofre ❖ Bacterias sulforosas ❖ Oxidação de enxofre e compostos contendo enxofre ❖ Ex: gênero Thiobacillus Plasmídeos Elemento genético extracromossomal Fita dupla* pequeno Replicação independente do nucleóide • Número variável Contêm genes que conferem propriedades especiais às células: - Resistência a antimicrobianos - Proteínas efetoras - Síntese de nutrientes - Tolerância a metais tóxicos •Não é essencial à vida bacteriana -> VANTAGENS!!! •Biotecnologia Glicocálice ou capsula Camada externa viscosa que cerca a parede celular e pode ser observada em muitas bactérias Cápsula, camada limosa ou slime significa a mesma coisa ❖ Polissacarídica - Compacta - Espessura variável - Rigidez ❖ Função: - Resistencia a dessecação - Anti-fagocítica - Adesão Glicocálice ou cápsula Flagelos São estruturas de locomoção formadas por apêndices muito finos, compostos de flagelina (proteína), e se encontram presentes em algumas bactérias. Função: Motilidade Propulsiona a bactéria por meio de movimentos rotatórios Os movimentos são denominados quimiotaxia ou fototaxia Quimiotaxia Íons H+ Fototaxia Luz Flagelos São estruturas de locomoção formadas por apêndices muito finos, compostos de flagelina (proteína), e se encontram presentes em algumas bactérias. O flagelo apresenta três componentes: - Corpo basal - Gancho - Filamento O seu comprimento geralmente é várias vezes o da célula, contudo, seu diâmetro é uma pequena fração do diâmetro celular (10 a 20 nm). Morfologia dos flagelos Os flagelos podem apresentar diversas morfologias que também servem para classificar as espécies de bactérias, a saber: (A) Monotríquio: o flagelo se localiza em uma das extremidades da célula. (B) Anfitríquio: a célula possui o flagelo em ambas as extremidades. (C) Lofotríquio: vários flagelos localizados em uma das extremidades da célula. (D) Peritríquio: vários flagelos localizados ao redor de toda a célula. Morfologia dos flagelos PILI OU FÍMBRIAS São apêndices filamentosos compostos de pilina (proteína) encontrados em algumas bactérias Gram-negativas, mais finos, mais curtos e geralmente mais numerosos que os flagelos. Duas funções de grande importância: ❖ Aderência asuperfícies (através das adesinas localizadas em suas ❖ extremidades) – antígenos de colonização ❖ Pili sexuais, permitindo a fixação de células doadoras e receptoras, servindo como porta de entrada para material genético na conjugação bacteriana PILI OU FÍMBRIAS Biofilme ❖ São comunidades biológicas com um elevado grau de organização, onde os microrganismos formam comunidades estruturadas, coordenadas e funcionais. ❖ Estas comunidades biológicas encontram-se embebidas em matrizes poliméricas produzidas por elas própria ❖ Bactérias presentes em biofilmes encontram-se protegidas do sistema imunológico e da exposição à antimicrobianos, potencializando a dificuldade de seu tratamento ❖ A velocidade de formação desse complexo pode ser aumentada, pela presença de flagelos e fímbrias Biofilme Esporos (endósporos) Estrutura de repouso e resistência das bactérias. Em situações de: - Radiação - Dessecação - Químicos - Escassez de nutrientes Gram + como: gênero Bacillus e Clostridium. Bactérias de solo Formam-se quando o meio se torna inadequado para a sobrevivência da bactéria em sua forma vegetativa. Cada célula forma um único esporo, que é liberado quando a bactéria morre. Sua composição se caracteriza por alto teor de cálcio associado ao ácido dipicolínico, relacionado à desidratação e à alta resistência, inclusive térmica. • Um esporo resulta da perda de água da célula e da formação de uma parede grossa e resistente em todo o citoplasma desidratado; • O esporo consegue suspender atividadecompletamente a sua metabólica, sobrevivendo a como calorsituações adversas intenso e falta de água; • O processo de formação do esporo chama-se esporulação ou esporogênese. esporulação Endosporo Clostridium, Bacillus, Sporosarcina, Coxiella Desidratada Estrutura rígida (multi camadas) Localização dos esporos Os esporos bacterianos são muito importantes para medicina e indústria alimentícia, pois são resistentes ao calor e à esterilização química, podendo contaminar alimentos e provocar doenças. Principais doenças causadas por esporos bacterianos 1. Antraz: Bacillus anthracis Esporos bacterianos CARACTERÍSTICAS: 2. Tétano: Clostridium tetani 3. Botulismo: Clostridium botulinum Esporos bacterianos • Uma das formas de eliminar definitivamente os esporos é a esterilização em autoclave, que consiste no uso de temperaturas de 120°C. Célula vegetativa x esporo Esporos bacterianos Estrutura bacteriana Bactérias Externas Essenciais Parede bacteriana, membrana plasmática Não Essenciais Cápsula, Flagelo, Fímbria, pili Internas Essenciais Nucleóide, ribossomo Não Essenciais Plasmídeos, esporo, grânulos de reserva Slide 1: Bacteriologia Clínica Introdução a micro e citologia bacteriana Slide 2: microbiologia Slide 3 Slide 4 Slide 5 Slide 6: TEORIA CELULAR Slide 7: O VÍRUS É UM SER VIVO? Slide 8 Slide 9 Slide 10 Slide 11 Slide 12 Slide 13 Slide 14 Slide 15 Slide 16 Slide 17 Slide 18 Slide 19 Slide 20 Slide 21 Slide 22 Slide 23 Slide 24 Slide 25 Slide 26 Slide 27 Slide 28 Slide 29 Slide 30 Slide 31 Slide 32 Slide 33 Slide 34 Slide 35 Slide 36 Slide 37 Slide 38 Slide 39 Slide 40 Slide 41 Slide 42 Slide 43 Slide 44 Slide 45 Slide 46 Slide 47 Slide 48 Slide 49 Slide 50 Slide 51 Slide 52 Slide 53 Slide 54 Slide 55 Slide 56 Slide 57 Slide 58 Slide 59 Slide 60 Slide 61 Slide 62 Slide 63 Slide 64 Slide 65 Slide 66 Slide 67 Slide 68 Slide 69 Slide 70 Slide 71 Slide 72