aula 04 - BGN fermentadores e na_o-fermentadores de glicose

Prévia do material em texto

<p>Bacilos Gram-negativos:</p><p>Fermentadores e não-fermentadores de glicose</p><p>10.08.23</p><p>Profa. Tatiana Bender Schmeling</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>• Ordem: Enterobacterales</p><p>• Famílias: 7, sendo a Enterobacteriaceae a mais relevante</p><p>• Gêneros: 44 gêneros(15 importância clínica), 176 espécies</p><p>• Morfologia: Bacilos (cocobacilo)</p><p>• Coloração: Gram-negativo</p><p>• Metabolismo: anaeróbico facultativo</p><p>• Motilidade: Móveis e imóveis</p><p>• Não são esporulados</p><p>• Principais componentes da microbiota intestinal</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>• Oxidase negativos – os diferencia de outros bacilos</p><p>Gram-negativos (NF)</p><p>• Fermentadores de GLICOSE</p><p>• Algumas espécies possuem cápsula</p><p>• Prova de diferenciação de espécies de bacilos</p><p>entéricos: característica da colônia, odor, provas</p><p>bioquímicas</p><p>- Associados à infecções intestinais e extra-</p><p>intestinais: respiratórias, urinárias,</p><p>hospitalares</p><p>- Choque endotóxico – LPS</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>FAMÍLIAS IMPORTANTES CLINICAMENTE:</p><p>- Enterobacteriaceae: Salmonella, Shigella, Escherichia, Klebsiella,</p><p>Enterobacter, Citrobacter</p><p>- Yersiniaceae: Yersinia e Serratia</p><p>- Morganellaceae: Morganella, Proteus e Providencia</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Diferença entre</p><p>grupos</p><p>Citocromo oxidase:</p><p>É a última proteína da cadeia</p><p>transportadora de elétrons (H)</p><p>ao O2 formando água</p><p>Coloração de Gram BGN</p><p>Oxidase</p><p>Negativa:</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Positiva:</p><p>Não-Fermentadores</p><p>de Glicose</p><p>Corante: tetrametil p-fenilenodiamina</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Características gerais:</p><p>• Crescem em meios comuns e não seletivos – MH, PCA,</p><p>AS, ACH</p><p>• Crescem em meios seletivos para BGN – MC, XLD, HE, SS</p><p>• Tempo e temp. de crescimento: 18-24 horas (35ºC)</p><p>• TODAS AS ENTEROBACTÉRIAS FERMENTAM GLICOSE</p><p>• ALGUMAS ENTEROBACTÉRIAS FERMENTAM LACTOSE:</p><p>Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, K.oxytoca,</p><p>K.aerogenes, Enterobacter clacae, Citrobacter freudii</p><p>• Distinção entre gêneros e espécies: provas de identificação</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Lac +</p><p>Lac -</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>PROVAS BIOQUÍMICAS</p><p>- Metabolismo de carboidratos: KIA (Kligler Iron Agar), TSI, Rugai</p><p>- Formação de substâncias nitrogenadas: aminoácidos, indol, uréia, fenilalanina</p><p>- Sais e ácidos orgânicos: citrato, malonato</p><p>- Motilidade: SIM, MIO</p><p>Colônias médias a</p><p>grandes (1mm)</p><p>a) Secas</p><p>b) Mucóides</p><p>a</p><p>b</p><p>Produção de SulfetoSwarming = dispersão =</p><p>MOTILIDADE</p><p>Fermentação de lactose</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Escherichia coli</p><p>Lac +</p><p>• Kligler (KIA): fermentação de glicose, gás de glicose, H2S negativo, fermentação de lactose positiva</p><p>• Lisina (LIA): desaminação da lisina negativa, descarboxilação da lisina positiva</p><p>• Fenilalanina: negativa</p><p>• SIM: H2S negativa, indol positivo, móvel</p><p>• Uréia: negativa</p><p>• Citrato: negativo</p><p>Provas bioquímicas – imagens no final dos slides</p><p>Cepas(exceções) podem ser: Lac -, H2S+, imóvel</p><p>Shigella sp.</p><p>Lac -</p><p>• Kligler (KIA): fermentação de glicose, sem gás de glicose, H2S negativo, fermentação de lactose negativa</p><p>• Lisina (LIA): desaminação da lisina negativa, descarboxilação da lisina negativa</p><p>• Fenilalanina: negativa</p><p>• SIM: H2S negativa, indol positivo ou negativo (variado), imóvel</p><p>• Uréia: negativa</p><p>• Citrato: negativo</p><p>Provas bioquímicas – imagens no final dos slides</p><p>Shigella sonnei, S.flexneri, S.dysenteriae, S.boyndii</p><p>Salmonella sp.</p><p>Lac -</p><p>• Kligler (KIA): fermentação de glicose, gás de glicose, H2S positivo, fermentação de lactose negativa</p><p>• Lisina (LIA): desaminação da lisina negativa, descarboxilação da lisina positiva</p><p>• Fenilalanina: negativa</p><p>• SIM: H2S positiva, indol negativo, móvel</p><p>• Uréia: negativa</p><p>• Citrato: positivo</p><p>Provas bioquímicas – imagens no final dos slides</p><p>H2S +</p><p>Salmonella enterica sorovar Typhi, S. enterica sorovar Paratyphi, S.choleraesus e S.enteritidis</p><p>Klebsiella pneumoniae</p><p>Klebsiella oxytoca, K.ozanae, K.rinoscleromatis, K.aerogenes</p><p>Lac +</p><p>Provas bioquímicas – imagens no final dos slides</p><p>• Kligler (KIA): fermentação de glicose, gás de glicose, H2S negativo, fermentação de lactose positiva</p><p>• Lisina (LIA): desaminação da lisina negativa, descarboxilação da lisina positiva</p><p>• Fenilalanina: negativa</p><p>• SIM: H2S negativo, indol negativo, maioria imóvel (sendo a K.aerogenes móvel)</p><p>• Uréia: positivo</p><p>• Citrato: positivo</p><p>Proteus mirabilis</p><p>Lac -</p><p>• Kligler (KIA): fermentação de glicose, gás de glicose, H2S positivo, fermentação de lactose negativa</p><p>• Lisina (LIA): desaminação da lisina positiva, descarboxilação da lisina negativa</p><p>• Fenilalanina: positiva</p><p>• SIM: H2S positiva, indol negativo, móvel</p><p>• Uréia: positiva</p><p>• Citrato: positivo</p><p>Provas bioquímicas – imagens no final dos slides</p><p>H2S +</p><p>Proteus vulgaris (indol positivo)</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Provas Bioquímicas de Identificação</p><p>Kligler - Kia</p><p>1 – Controle</p><p>2 – Escherichia coli / Klebsiella pneumoniae</p><p>3 – Salmonella sp.</p><p>4 – Proteus sp.</p><p>5 – Citrobacter freudii</p><p>6 – Salmonella sp.</p><p>7 - Shigella sp.</p><p>Lisina Ferro Agar – LIA</p><p>1 – Controle</p><p>2 – Shigella sp.</p><p>3 – Salmonella sp.</p><p>4 – Proteus sp.</p><p>5 – Escherichia coli / K.pneumoniae</p><p>1 2 3 4 5</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Provas Bioquímicas de Identificação</p><p>Oxidase</p><p>Negativa Positiva</p><p>Enterobacterales BGN não-fermentador</p><p>Fermentação da Glicose</p><p>Redução de Nitrato a Nitrito</p><p>- Proteus vulgaris</p><p>- Proteus mirabilis</p><p>- Citrobacter freudii</p><p>- Citrobacter diversus</p><p>- Enterobacter cloaceae</p><p>- Morganella morganii</p><p>- Providencia stuartii</p><p>- Providencia rettgeri</p><p>- Serratia marcescens</p><p>Algumas espécies:</p><p>- Escherichia coli</p><p>- Klebsiella oxytoca</p><p>- Klebsiella pneumoniae</p><p>- Klebsiella aerogenes</p><p>- Salmonella typhi</p><p>- Salmonella spp.</p><p>- Shigella sonnei</p><p>- Shigella flexneri</p><p>Algumas espécies:</p><p>- Pseudomonas aeruginosa</p><p>- Burkolderia cepaceae</p><p>- Stenotrophomonas maltophilia</p><p>- Acinetobacter baumanii</p><p>Principais provas de identificação:</p><p>❖ Oxidase</p><p>❖ Fermentação da Glicose</p><p>❖ Fermentação da Lactose</p><p>❖ Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S)</p><p>❖ Produção de gás de glicose</p><p>❖ Descarboxilação da lisina</p><p>❖ Desaminação da lisina</p><p>❖ Fenilalanina desaminase ou triptofanase</p><p>❖ Hidrólise da Uréia</p><p>❖ Utilização de Citrato como fonte de C</p><p>❖ Motilidade</p><p>❖ Produção de Indol</p><p>Meios utilizados para inoculação:</p><p>❖ Secreções: Ágar Sangue e Ágar MacConkey</p><p>❖ Líquidos nobres e biópsias: Ágar Chocolate e Ágar MacConkey</p><p>❖ Fezes: Ágar MacConkey e Ágar SS – XLD - HE</p><p>❖ Urina: Ágar MacConkey e Ágar Sangue ou Ágar Cled e Ágar MacConkey</p><p>Sorologias (falaremos sobre na aula de coprocultura):</p><p>❖ Realizada somente para as bactérias comprovadamente patogênicas:</p><p>Salmonella spp., Shigella spp. e Escherichia coli</p><p>- Salmonella: Anti-Salmonella Polivalente / Anti-Salmonella Somático (S.typhi)</p><p>- Shigella: Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei e Shigella boydii</p><p>- Escherichia coli: EPEC (E.coli enteropatogênica), ETEC (E.coli enterotoxigênica), EIEC (E.coli</p><p>enteroinvasora), EHEC (E.coli enterohemorrágica) e EAEC (E.coli enteroagregativa)</p><p>(O 157:H7)</p><p>Ágar MacConkey: Fermentação da Lactose</p><p>Positiva, produção de ácido forte, colônia</p><p>seca. A coloração rosa das colônias é</p><p>devido ao indicador de pH vermelho de</p><p>fenol.</p><p>Escherichia coli</p><p>Klebsiella sp.</p><p>Ágar MacConkey: Fermentação da Lactose</p><p>Positiva, produção de ácido fraco, colônia</p><p>mucóide. A coloração rosa das colônias é</p><p>devido ao indicador de pH vermelho de</p><p>fenol.</p><p>Ágar MacConkey: Fermentação da Lactose</p><p>Negativa, colônia seca.</p><p>Salmonella sp.</p><p>Salmonella sp.</p><p>Ágar SS: Produção de sulfeto de hidrogênio</p><p>(H2S)</p><p>BGN - Enterobacterales</p><p>Oxidase</p><p>MC e SS</p><p>LAC + H2S +</p><p>LAC - H2S -</p><p>Oxidase</p><p>MC e SS</p><p>Identificação Presuntiva</p><p>KIA - Kligler LIA – Lisina Iron Ágar</p><p>BGN - Enterobacterales</p><p>Identificação Bioquímica</p><p>Fenilalanina</p><p>Positivo: Coloração verde</p><p>(Grupo PPM)</p><p>SIM</p><p>S: Sulfeto de hidrogênio – H2S (positivo: Preto)</p><p>I: Indol (positivo:</p><p>anel vermelho / negativo: anel amarelo)</p><p>M: Motilidade (móvel: tubo turvo / imóvel: crescimento somente</p><p>na linha da picada)</p><p>Negativo: Coloração amarela</p><p>BGN - Enterobacterales</p><p>Indol: degradação do triptofanoFenilalanina: Atividade da desaminase formando ácido fenilpirúvico</p><p>Identificação Bioquímica</p><p>Uréia</p><p>Positivo: Coloração rosa</p><p>Citrato</p><p>Positivo: Coloração azul ou crescimento</p><p>Negativo: Cor original - verdeNegativo: Cor original - amarelo</p><p>BGN - Enterobacterales</p><p>Tabela de Identificação</p><p>• Morfologia: Bacilos (cocobacilo)</p><p>• Metabolismo: aeróbios</p><p>• Possuem metabolismo oxidativo (dependente de O2), o que define a sua inclusão</p><p>no grupo dos micro-organismos não fermentadores</p><p>• Motilidade: Móveis e imóveis</p><p>• Não são esporulados</p><p>• Microbiota (comensal - oportunistas)</p><p>• Grande importância clínica = relacionados à assistência à saúde (IRAS) – Utis</p><p>• Menos frequente que bactérias fermentadores</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Não-Fermentadores de Glicose</p><p>Associados à infecções oportunistas,</p><p>urinárias, nosocomiais, feridas,</p><p>respiratórias</p><p>• Oxidase positivos (Acinetobacter baumannii é negativo)</p><p>• Incapazes de utilizar carboidratos como fonte de energia através de fermentação, degradando-os por</p><p>via oxidativa</p><p>• Identificação de importância nos casos de infecção hospitalar (nosocomiais - iras)</p><p>• Prova de diferenciação de espécies de bacilos NF: característica da colônia, odor, provas bioquímicas</p><p>• Gêneros clinicamente importantes que conheceremos em aula:</p><p>• Pseudomonas</p><p>• Acinetobacter</p><p>• Stenotrophomonas</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Não-Fermentadores de Glicose</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Não-Fermentadores de Glicose</p><p>Diferença entre</p><p>grupos</p><p>Citocromo oxidase:</p><p>É a última proteína da cadeia</p><p>transportadora de elétrons (H)</p><p>ao O2 formando água</p><p>Coloração de Gram BGN</p><p>Oxidase</p><p>Negativa:</p><p>Fermentadores de Glicose</p><p>Positiva:</p><p>Não-Fermentadores</p><p>de Glicose</p><p>Corante: tetrametil p-fenilenodiamina</p><p>Bacilos Gram-negativos</p><p>Não-Fermentadores de Glicose</p><p>COMO DESCONFIAR DE UM BGN-NF NA AMOSTRA?</p><p>Crescimento em MC / AS...</p><p>Oxidase positivo (pensar nas exceções)</p><p>Fermentação de glicose negativa no KIA</p><p>A</p><p>B</p><p>Pseudomonas aeruginosa</p><p>P.putida, P.fluorescens, P.stutzeri</p><p>• Família: Pseudomonadaceae</p><p>• Móveis por flagelo monotríquio</p><p>• Célula coberta de fimbrias: importante fator de virulência</p><p>• Responsável por infecções crônicas, feridas (pé-diabético), queimaduras, respiratórias -</p><p>fibrose cística, otite, foliculite, conjuntivite</p><p>• Ambientes com umidade: traqueostomias, cateteres, sondas urinárias (ITU)</p><p>• Associados à contaminação de utensílios hospitalares e odontológicos – ÁGUA</p><p>• Pode ser encontrada como parte da microbiota (transitória) do ouvido em nadadores</p><p>• Odor característico: Adocicado / uva verde</p><p>• Produzem pigmentos em meios de cultura (MH, PCA)</p><p>• fluorescentes: pioverdina e piocianina (danos no tecido endotelial)</p><p>• pigmento vermelho: piorrubina</p><p>• pigmento marrom: piomelanina</p><p>Pseudomonas aeruginosa</p><p>P.putida, P.fluorescens, P.stutzeri</p><p>http://www.medscape.com/content/2003/00/46/07/460749/art-aho460749.fig1.jpg</p><p>Pseudomonas aeruginosa</p><p>• Kligler (KIA): não fermenta a glicose, H2S</p><p>negativo, fermentação de lactose</p><p>negativa</p><p>• Crescimento a 42ºC em BHI: positivo</p><p>• Móvel</p><p>• Crescimento em cetrimide: positivo</p><p>• Crescimento em MC: positivo</p><p>Provas bioquímicas</p><p>• Pigmentos (MH)</p><p>• Catalase: positiva</p><p>• OF açúcares:</p><p>• Glicose: oxidativa - positiva</p><p>• Maltose: negativa</p><p>• Xilose: positiva</p><p>• Lactose: negativa</p><p>Lac -</p><p>OF glicose</p><p>Acinetobacter baumannii</p><p>A.lwoffi, A.calcoaceticus, A.faecalis</p><p>• Família: Moraxellaceae</p><p>• Cocobacilos Gram-negativos</p><p>• Oxidase negativa</p><p>• Importante em hospitais = infecções em pacientes hospitalizados</p><p>• Infecções associadas a dispositivos (catéteres intravenosos, tubos orotraqueal, comuns em UTIs)</p><p>• Resistência aos antibióticos, desinfetantes e antissépticos hospitalares</p><p>• Ubíquos – ambiente - vegetais, água, solo e animais (comensais e oportunistas – patogênicas)</p><p>• Microbiota da pele e orofaringe de indivíduos saudáveis</p><p>• Imóveis</p><p>• Colônias circulares, convexas e opacas (mucóides) - 1 a 2mm de diâmetro</p><p>• Colônias MC: não fermentador de lactose</p><p>• Colônias AS: gama-hemolíticos</p><p>Acinetobacter baumannii</p><p>A.lwoffi, A.calcoaceticus, A.faecalis</p><p>• Kligler (KIA): não fermenta a glicose, H2S</p><p>negativo, fermentação de lactose</p><p>negativa</p><p>• Crescimento a 42ºC em BHI: positivo</p><p>• Imóvel</p><p>• Crescimento em cetrimide: negativo</p><p>• Crescimento em MC: positivo</p><p>Provas bioquímicas</p><p>• OF açúcares:</p><p>• Glicose: oxidativa - positiva</p><p>• Maltose: positiva (69%)</p><p>• Xilose: positiva</p><p>• Lactose: positiva</p><p>Lac -</p><p>OF glicose</p><p>Stenotrophomonas maltophilia</p><p>• Família: Xantamonadaceae</p><p>• Bacilos Gram-negativos</p><p>• Oxidase positiva</p><p>• Colonizam e infectam indivíduos internados</p><p>• Agente causador de infecções no trato urinário(ITU) - diálise, feridas cirúrgicas</p><p>e feridas de pele, sepse, meningite, pneumonias - óbito</p><p>• Ubíquos – ambiente - vegetais, água, solo e animais (comensais e oportunistas</p><p>– patogênicas)</p><p>• Contaminação de fontes de água, incluindo rios, poços, lagos, e água</p><p>engarrafada</p><p>• Fontes hospitalares: monitor de pressão arterial, recipiente de água</p><p>deionizada, solução desinfetante, máquinas de diálise, máquinas</p><p>produtoras de gelo, nebulizadores, escovas de banho</p><p>• Móveis</p><p>OF glicose</p><p>Stenotrophomonas maltophilia</p><p>• Kligler (KIA): não fermenta a glicose, H2S</p><p>negativo, fermentação de lactose</p><p>negativa</p><p>• Crescimento a 42ºC em BHI: negativo</p><p>• Móvel</p><p>• Crescimento em cetrimide*: negativo</p><p>• Crescimento em MC: positivo</p><p>• Crescimento em AS: gama-hemólise</p><p>Provas bioquímicas</p><p>• Pigmentos (MH)</p><p>• OF açúcares:</p><p>• Glicose: oxidativa - positiva</p><p>• Maltose: negativa</p><p>• Xilose: positiva/negativa</p><p>• Lactose: positiva (oxidativa)</p><p>Lac -</p><p>Moraxella catarrhalis</p><p>• Família: Moraxellaceae</p><p>• Cocos Gram-negativos</p><p>• Oxidase: positiva</p><p>• Causam pneumonia, endocardite, meningite, otite</p><p>• Imóveis</p><p>Burkholderia cepacia</p><p>• Família: Burkholderiaceae</p><p>• Bacilos Gram-negativos</p><p>• Oxidase: fracamente positiva</p><p>• Causam pneumonia, endocardite, meningite, otite</p><p>• Móveis</p><p>• Crescimento a 42ºC</p><p>• Associada a infecções oportunistas – Fibrose Cística</p><p>• Infecções nosocomiais</p><p>• Fatores pré-disponentes: câncer, antibioticoterapia</p><p>prévia, imunocomprometimento</p><p>REFERÊNCIAS</p><p>Biblioteca física:</p><p>1. BLACK, J. G.; BLACK, L.J. Microbiologia: Fundamentos e perspectivas. 10.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,</p><p>2021.</p><p>2. KONEMAN, E. W.; ALLEN, S. D.; JANDA, W. M.; SCHRECKENBERGER, D. C.; WINN JR., W. C. Diagnóstico</p><p>microbiológico: texto e atlas colorido. 6.ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2008.</p><p>3. TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM, F. Microbiologia. 6. ed. São Paulo: Atheneu, 2015.</p><p>Biblioteca digital:</p><p>1. BROOKS, GEO. F.; CARROLL, KAREN C.; BUTEL, JANET S.; MORSE, STEPHEN A. Microbiologia Médica de Jawetz,</p><p>Melnick & Adelberg 26.ed. Porto Alegre: McGraw-Hill, Artmed, 2014. 872 p.</p><p>2. LEVINSON, W. Microbiologia e imunologia médicas. 13. ed. Porto Alegre: McGraw-Hill, Artmed, 2016.</p><p>3. TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 12. ed. Porto Alegre: McGraw-Hill, Artmed, 2017.</p><p>Slide 1: Bacilos Gram-negativos: Fermentadores e não-fermentadores de glicose</p><p>Slide 2</p><p>Slide 3</p><p>Slide 4</p><p>Slide 5</p><p>Slide 6</p><p>Slide 7: Bacilos Gram-negativos Fermentadores de Glicose</p><p>Slide 8: Bacilos Gram-negativos Fermentadores de Glicose</p><p>Slide 9</p><p>Slide 10: Escherichia coli</p><p>Slide 11: Shigella sp.</p><p>Slide 12: Salmonella sp.</p><p>Slide 13: Klebsiella pneumoniae</p><p>Slide 14: Proteus mirabilis</p><p>Slide 15: Bacilos Gram-negativos Fermentadores de Glicose Provas Bioquímicas de Identificação</p><p>Slide 16</p><p>Slide 18</p><p>Slide 19</p><p>Slide 20</p><p>Slide 21</p><p>Slide 22</p><p>Slide 23</p><p>Slide 24</p><p>Slide 25</p><p>Slide 26</p><p>Slide 27</p><p>Slide 28: Tabela de Identificação</p><p>Slide 29</p><p>Slide 30</p><p>Slide 31</p><p>Slide 32</p><p>Slide 33</p><p>Slide 34</p><p>Slide 35</p><p>Slide 36</p><p>Slide 37</p><p>Slide 38</p><p>Slide 39</p><p>Slide 40</p><p>Slide 41: REFERÊNCIAS</p>