Aula Prática - Alterações fenotípicas e genotípicas-2023 (7)

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<p>10/3/2023</p><p>1</p><p>Alterações Genotípicas e Fenotípicas</p><p>em Microrganismos</p><p>2</p><p>Comparação</p><p>Alterações genotípicas relacionadas à</p><p>ocorrência de mutação</p><p>Alterações fenotípicas relacionadas</p><p>a modificações ambientais</p><p>Evento raro (espontâneo 1 célula/106 a 107) Ocorre na maioria da população</p><p>Reversão rara Facilmente reversível</p><p>Genes mutados (herdados pelas gerações</p><p>subsequentes)</p><p>Genes normais (expressos em resposta</p><p>ao ambiente)</p><p>Ex: resistência a antibióticos, resistência a</p><p>bacteriófagos, etc.</p><p>Ex: morfologia da célula, produção de</p><p>pigmentos, toxinas, etc.</p><p>Alterações Genotípicas e Fenotípicas</p><p>10/3/2023</p><p>2</p><p>PARTE 1: Alteração Fenotípica</p><p>Produção de pigmento pela bactéria</p><p>Serratia marcescens</p><p>4</p><p>Alterações fenotípicas</p><p>Produção de pigmento pela bactéria Serratia marcescens</p><p>Alteração fenotípica é resultante de modificação ambiental</p><p>Cultivo a 25°C – produz o</p><p>pigmento vermelho</p><p>Cultivo a 37°C – não produz</p><p>o pigmento vermelho</p><p>10/3/2023</p><p>3</p><p>PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL</p><p>6</p><p>Alterações fenotípicas</p><p>Inocular Serratia marcescens em placa e cultivar a 25 ou 37°C</p><p>25 °C</p><p>P NP</p><p>37 °C</p><p>P NP</p><p>Cultura de Serratia</p><p>pigmentada</p><p>(crescida a 25°C)</p><p>Cultura de Serratia</p><p>não pigmentada</p><p>(crescida a 37°C)</p><p>10/3/2023</p><p>4</p><p>RESULTADOS ESPERADOS</p><p>8</p><p>Alterações fenotípicas</p><p>Resultados Esperados</p><p>Crescimento após 48 horas de incubação</p><p>25 °C</p><p>P NP</p><p>37 °C</p><p>P NP</p><p>10/3/2023</p><p>5</p><p>PARTE 2: Alteração Genotípica</p><p>Isolamento de mutantes morfológicos do</p><p>fungo Penicillium griseoroseum</p><p>10</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Introdução</p><p>• Mutação Espontânea – Ocorre naturalmente sem a adição de</p><p>um agente mutagênico específico.</p><p>Mutação é um evento raro, hereditário e dificilmente reversível</p><p>• Mutação Induzida – Resultado da exposição do microrganismo</p><p>a um agente mutagênico (físico, químico ou biológico).</p><p>Alterações Genotípicas ocorrem por mutações ou</p><p>eventos de recombinação gênica</p><p>10/3/2023</p><p>6</p><p>11</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Introdução</p><p>Mutação Pontual:</p><p>• Mutação de sentido trocado</p><p>• Mutação silenciosa</p><p>• Mutação sem sentido</p><p>PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL</p><p>(Demonstrativo)</p><p>10/3/2023</p><p>7</p><p>13</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Procedimento Experimental</p><p>Características do fungo Penicillium griseoroseum</p><p>Conídios</p><p>uninucleados e</p><p>haploides</p><p>Estrutura de reprodução assexuada</p><p>– conidióforo com conídios</p><p>Aparência das</p><p>colônias do tipo</p><p>selvagem</p><p>Conidióforo</p><p>14</p><p>Procedimento Experimental</p><p>Suspensão</p><p>de conídios</p><p>Contagem</p><p>dos conídios</p><p>Câmara de</p><p>Neubauer</p><p>Diluições</p><p>200 conídios/ 0,1 mL</p><p>To</p><p>Luz UV</p><p>2000 conídios/ 0,1 mL</p><p>T5</p><p>10/3/2023</p><p>8</p><p>15</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Procedimento Experimental</p><p>Preparo da suspensão de conídios</p><p>16</p><p>Utilização da câmara de Neubauer para a</p><p>contagem de microrganismos</p><p>Suspensão</p><p>de conídios</p><p>N x 104 x FD = Nº de conídios/mL</p><p>Obs: caso a suspensão de conídios esteja</p><p>muito concentrada, realizar diluições</p><p>seriadas e fazer a contagem novamente</p><p>N: conídios nos 25 quadrados centrais</p><p>FD: Fator de diluição</p><p>Espaço entre a câmara e a lamínula = 0,1 mm</p><p>0,1 mm x 1 mm x 1mm = 0,01 cm x 0,1 cm x 0,1 cm = 0,0001 cm3</p><p>0,0001 cm3 = 0,0001 ml</p><p>1 mm</p><p>Conídios</p><p>10/3/2023</p><p>9</p><p>17</p><p>Procedimento Experimental</p><p>Suspensão</p><p>de conídios</p><p>Contagem</p><p>dos conídios</p><p>Câmara de</p><p>Neubauer</p><p>Diluições</p><p>200 conídios/ 0,1 mL</p><p>To</p><p>Luz UV</p><p>2000 conídios/ 0,1 mL</p><p>T5</p><p>18</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Procedimento Experimental</p><p>Tratamento de conídios com luz UV</p><p>Lâmpada UV</p><p>Agitador magnético</p><p>Placa com suspensão de conídios</p><p>10/3/2023</p><p>10</p><p>19</p><p>Exemplo de cálculo da porcentagem de sobrevivência</p><p>ao tratamento com luz ultravioleta:</p><p>20</p><p>Exemplo de cálculo da porcentagem de sobrevivência</p><p>ao tratamento com luz ultravioleta:</p><p>10/3/2023</p><p>11</p><p>RESULTADOS EXPERIMENTAIS</p><p>22</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Resultados Experimentais</p><p>To T5</p><p>200 conídios 2000 conídios</p><p>(5’, UV)</p><p>Mutantes</p><p>morfológicos</p><p>10/3/2023</p><p>12</p><p>23</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Resultados Experimentais</p><p>A- Tipo selvagem B, C, D, E e F – Mutantes morfológicos</p><p>24</p><p>Isolamento de mutantes morfológicos de</p><p>Penicillium griseoroseum</p><p>Controle Tratamento Mutantes morfológicos</p><p>Selvagem Mutante 1 Mutante 2</p><p>Mutante 3 Mutante 4</p><p>Mutante 5</p><p>Como podemos empregar os mutantes morfológicos?</p><p>10/3/2023</p><p>13</p><p>25</p><p>Alterações genotípicas</p><p>Introdução</p><p>• Por que isolamos mutantes?</p><p>• Quais as vantagens do emprego da luz ultravioleta em</p><p>relação aos outros agentes mutagênicos?</p><p>• Por que é mais fácil o isolamento de mutantes de um</p><p>organismo haploide?</p><p>26</p><p>Alteração fenotípica</p><p>Qual seria o resultado do experimento realizado com Serratia</p><p>marcescens se ocorresse uma mutação de perda de função em um</p><p>gene importante para a produção de pigmento?</p><p>Para refletir ...</p><p>10/3/2023</p><p>14</p><p>Obrigado(a)</p><p>Slide 1: Alterações Genotípicas e Fenotípicas em Microrganismos</p><p>Slide 2</p><p>Slide 3: PARTE 1: Alteração Fenotípica Produção de pigmento pela bactéria Serratia marcescens</p><p>Slide 4</p><p>Slide 5: PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL</p><p>Slide 6</p><p>Slide 7: RESULTADOS ESPERADOS</p><p>Slide 8</p><p>Slide 9: PARTE 2: Alteração Genotípica Isolamento de mutantes morfológicos do fungo Penicillium griseoroseum</p><p>Slide 10</p><p>Slide 11</p><p>Slide 12: PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL (Demonstrativo)</p><p>Slide 13</p><p>Slide 14</p><p>Slide 15</p><p>Slide 16</p><p>Slide 17</p><p>Slide 18</p><p>Slide 19</p><p>Slide 20</p><p>Slide 21: RESULTADOS EXPERIMENTAIS</p><p>Slide 22</p><p>Slide 23</p><p>Slide 24</p><p>Slide 25</p><p>Slide 26</p><p>Slide 27</p>