Prática 4 - Identificação de Aminoácidos

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Professor Alexandre Soares dos Santos DCB/UFVJM 2007 
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Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri 
Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde 
Departamento de Ciências Básicas 
Disciplina: Bioquímica 
 
AULA PRÁTICA Nº 4 – REAÇÕES DE CARACTERIZAÇÃO DE AMINOÁCIDOS 
 
 
 
 Nesta aula serão empregadas diversas reações que permitem identificar algumas 
cadeias laterais de resíduos de aminoácidos componentes das proteínas da gelatina e da 
clara de ovo. 
 
 
REAGENTES 
 
• Clara de ovo 
• Gelatina (sem sabor) a 2 % 
• Solução de NaOH a 2,5 mol/L; 6,0 
mol/L e a 4 % 
• Solução de acetato de chumbo a 10 % 
• Reativo de Millon 
• Reativo de Hopkins Cole 
• Solução alcoólica de alfa-naftol a 0,4 % 
• Solução de hipoclorito de sódio a 6,0-7,0 
% 
• Reativo de biureto 
• Solução de ninhidrina a 0,1 % 
• Ácido nítrico concentrado 
• Ácido sulfúrico concentrado 
• Ácido acético concentrado 
• Tubos de ensaio 
• Pipetas de 1,0; 2,0; 5,0 mL 
 
 
PROCEDIMENTOS 
 
1) Reação de aminoácidos sulfurados 
 
• Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da 
solução de gelatina. 
• Adicione 1,0 mL de solução de NaOH a 6,0 mol/L. Aqueça os tubos em chama direta. 
• Adicione gotas de ácido acético concentrado e de acetato de chumbo a 10%. 
• O que ocorreu? 
 
2) Reação de Millon 
 
• Coloque 1,0 mL de solução de clara de ovo em um tubo de ensaio e 1,0 mL da solução 
de gelatina em outro. 
• Adicione 1,0 mL do reativo de Millon a cada um deles e aqueça em chama direta por 
30 s. 
• Observe o aparecimento de uma coloração vermelho tijolo. 
• Os fenóis, quando aquecidos com sais mercuriais, formam derivados mercuriais que, 
em presença de HNO3, sofrem nitração, formando compostos de coloração vermelho 
tijolo. A tirosina é o único aminoácido encontrado em proteínas que contém grupo 
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fenólico. Portanto, somente as proteínas que contém tirosina dão a reação de Millon 
positiva. 
 
3) Reação de Hopkins-Cole 
 
• Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da 
solução de gelatina. 
• Acrescente 3,0 mL do reativo de Hopkins-Cole a cada um deles. 
• Incline os tubos e adicione 2,0 mL de ácido sulfúrico concentrado (20 gotas = 1,0 mL), 
deixando escorrer pela parede dos tubos. (fazer na presença do professor) 
• Aguardar alguns minutos e observar a formação de um anel violeta se houver a 
presença de triptofano na proteína. 
• Na presença de ácidos, muitos aldeídos se condensam com o anel indólico do 
triptofano, formando compostos coloridos. Na reação de Hopkins-Cole, as proteínas que 
contém triptofano reagem com o ácido glioxílico (que contém um grupamento aldeídico 
ligado a uma carboxila) e, pela ação do H2SO4 concentrado, formam composto de cor 
violeta, na interface. 
 
4) Reação de Sakagushi 
 
• Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da 
solução de gelatina. 
• Adicione 1,0 mL de NaOH 2,5 mol/L. 
• Acrescente 0,5 mL de alfa-naftol a 0,4% e 1,0 mL da solução de hipoclorito de sódio. 
• Os aminoácidos que contém produtos de substituição das guanidinas dão coloração 
vermelha quando tratadas com alfa-naftol e hipoclorito de sódio. É o caso das proteínas 
que contém arginina. 
 
5) Reação do biureto 
 
• Separe três tubos de ensaio. No primeiro coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo; 
no segundo, 1,0 mL da solução de gelatina e, o terceiro tubo (branco), adicione 1,0 mL de 
água destilada. 
• Adicione 1,0 mL do reativo de biureto em cada tubo e, em seguida, aqueça em chama 
direta. 
• A reação do biureto é característica para identificação de proteínas. Ela ocorre quando 
há no mínimo 3 ligações peptídicas. Em meio fortemente alcalino, observa-se a formação 
de uma cor violeta, devido à formação de complexos de coordenação entre o íon cúprico e 
quatro aminas de duas cadeias protéicas adjacentes. 
 
6) Reação da ninhidrina 
 
• Separe três tubos de ensaio. No primeiro coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo; 
no segundo, 1,0 mL da solução de gelatina e, o terceiro tubo (branco), adicione 1,0 mL de 
água destilada. 
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• Acrescente 3,0 mL da solução de ninhidrina a 0,1 %, a cada um deles. 
• Coloque os tubos em banho-maria fervente por dois minutos. 
• Esta reação ocorre pela presença do amino grupo livre e possibilita, inclusive, a 
determinação quantitativa do aminoácido. 
 
 
7) Reação xantoprotéica 
 
• Em tubos de ensaio distintos, coloque 1,0 mL da solução de clara de ovo e 1,0 mL da 
solução de gelatina. 
• Adicione 0,5 mL de HNO3 concentrado (na capela!!) e leve ao banho-maria fervente 
por dois minutos. (fazer na presença do professor) 
• Resfrie e observe a coloração. 
• A seguir, acrescente 4,0 mL de NaOH a 20% a cada um dos tubos e observe novamente 
a coloração. 
• Discuta a especificidade desta reação. 
 
 
Tabela com síntese das reação para identificação de aminoácidos 
 
Reativos Resultado Positivo Significado 
Ninhidrina Azul a roxo Presença de aminoácidos 
Acetato de chumbo Precipitado pardo Presença de aminoácidos sulfurados 
Millon Vermelho tijolo Presenta de aminoácidos fenólicos 
Hopkins-Cole Anel violeta (interfacial) Presença de triptofano 
Sakagushi Vermelho Presença de arginina 
Biureto Violeta Presença de ligações peptídcas 
p/ xantoproteínas Mudanza de coloração Presença de tirosina