Prática 7 - Enzimas II

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Professor Alexandre Soares dos Santos DCB/UFVJM 2007 1
Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri 
Faculdade de Ciências Biológicas e da Saúde 
Departamento de Ciências Básicas 
Disciplina: Bioquímica 
 
AULA PRÁTICA Nº 7 – ENZIMAS II 
 
 
 
As enzimas são responsáveis pela catálise e controle da maioria dos processos metabólicos 
numa célula. Elas são de natureza protéica e aumentam a velocidade de reações químicas, através 
da diminuição da energia de ativação requerida. Possuem como principais características: (i) grande 
especificidade pelo(s) substrato(s); (ii) grande eficiência de catálise e (iii) efeito saturante do 
próprio substrato. Há na estrutura da enzima, uma determinada região diretamente responsável pela 
ação catalítica. Essa região é denominada sítio ativo e a sua conformação correta é fundamental 
para a atividade enzimática. Ali se localizam diversos resíduos de aminoácidos que podem 
desempenhar funções de orientação do substrato e direta interação com este, permitindo que a 
reação ocorra. Assim, quaisquer agentes capazes de promover mudanças conformacionais na 
estrutura protéica, como variação de temperatura, pH e força iônica, por exemplo, podem afetar a 
atividade enzimática. 
A temperatura, por exemplo, altera a velocidade de uma reação enzimática exercendo 
influência sobre a constante de velocidade e sobre a enzima como proteína. A elevação da 
temperatura tende a aumentar a velocidade reacional exponencialmente segundo a equação: 
 
Vm = (F. [E0]). e-A/RT 
 
Onde, F é uma constante, A é a energia de ativação e R é a constante dos gases. 
 
O pH também exerce efeito sobre a velocidade de uma reação enzimática. Os sítios 
ativos nas enzimas são frequentemente compostos por grupos ionizáveis que devem se 
encontrar em uma forma iônica adequada para que mantenham a conformação do sítio ativo, 
liguem-se aos substratos, ou catalisem a reação. 
 
 
OBJETIVOS: Observar as influências da temperatura, pH, concentração de enzima e concentração 
de substrato sobre o progresso reacional catalizado enzimaticamente. 
 
 
PROCEDIMENTOS: 
 
1º ) INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA SOBRE A ATIVIDADE ENZIMÁTICA 
 
1. Colocar 1mL de solução de sacarase em 4 tubos. 
2. Acrescentar em cada tubo, 1mL de solução se sacarose 3% 
3. Numerar os tubos de 1 a 4. 
4. Colocar o tubo 1 em banho de gelo. Deixar o tubo 2 à temperatura ambiente. Colocar 
o tubo 3 em banho-maria a 37ºC. Colocar o tubo 4 em água fervente. Aguardar por 5 
minutos. 
5. Adicionar a cada tubo 2 mL do reativo de Benedict e aqueça até ebulição para que a 
reação aconteça. 
6. Analisar os resultados. 
 
 
 
Professor Alexandre Soares dos Santos DCB/UFVJM 2007 2
2º ) EFEITO DO PH 
 
1. Prepare três tubos de ensaio: 
a. Tubo 1: 1,0 mL de solução de tampão pH 6,0 + 2,0 mL de solução de amido a 1 g%. 
b. Tubo 2: 1,0 mL de solução de tampão pH 2,0 + 2,0 mL de solução de amido a 1 g%. 
c. Tubo 3: 1,0 mL de solução de tampão pH 10,0 + 2,0 mL de solução de amido a 1 
g%. 
2. Adicione 0,5 mL da solução de amilase salivar (saliva) em cada tubo, agitando-os. 
3. Coloqueos em banho-maria a 37ºC por 10 minutos. 
4. Adicione 3 gotas de lugol. 
5. Analise os resultados. 
 
 
3º) INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO DA ENZIMA: 
 
1. Colocar respectivamente em 5 tubos de ensaio numerados: 
a. 0,2mL de sacarase + 0,8mL de H2O destilada + 1,0mL de sacarose 
b. 0,5mL de sacarase + 0,5mL de H2O destilada + 1,0mL de sacarose 
c. 1,0mL de sacarase + 1,0mL de sacarose 
d. 1,0mL de H2O destilada + 1,0mL de sacarose 
e. 1,0mL de sacarase + 0,8mL de H2O destilada 
2. Incubar os 5 tubos em banho maria a 37ºC por 10 minutos.. 
3. Adicionar, em seguida, a cada um dos tubos 1mL de Reagente de Benedict. Aquecê-
los até a ebulição. 
4. Observar os resultados anotando em quais tubos houve atividade enzimática, 
observando pela reação de Benedict. 
5. Ler interpretação. 
 
 
4º) EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE SUBSTRATO 
 
1. Prepare os seguintes tubos de ensaio 
 
Tubos 1 2 3 4 5 6 7 
Amido 1% (mL) 0,0 0,2 0,4 0,6 1,0 2,0 3,2 
H2O (mL) 3,2 3,0 2,8 2,6 2,2 1,2 0,0 
 
2. Adicione 0,5 mL de saliva (amilase salivar) a cada um dos tubos e agite bem. 
3. Coloque os tubos em banho-maria a 37ºC por 10 minutos. 
4. Adicione 2,0 mL do reagente de Benedict e aqueça até ferver. 
5. Observe as diferenças de intensidade de cores nos vários tubos.