Técnicas de Hibridização

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1. 
A técnica de hibridização compreende diversas etapas, como desnaturação e anelamento entre a sonda e o DNA-alvo. 
Conforme o experimento de hibridização, assinale a alternativa que representa a sequência correta de etapas dessa técnica em cromossomos.
Resposta incorreta.
A. 
1 – Hibridização. 2 – Marcação da sonda com fluorocromo. 3 – Detecção. 4 – Desnaturação. 5 – Visualização em microscopia fluorescente;
A hibridização não pode ser realizada com a dupla fita de DNA ainda unida.
Resposta incorreta.
B. 
1 – Desnaturação. 2 – Detecção. 3 – Marcação da sonda com fluorocromo. 4 – Hibridização. 5 – Visualização em microscopia fluorescente;
Embora a desnaturação seja essencial no início do experimento de hibridização, a detecção não pode ocorrer diretamente sobre o DNA de fita simples que ainda não recebeu a sonda marcada.
Você acertou!
C. 
1 – Desnaturação. 2 – Marcação da sonda com fluorocromo. 3 – Hibridização. 4 – Detecção. 5 – Visualização em microscopia fluorescente.
A desnaturação (1) é uma etapa inicial do experimento de hibridização, fazendo com que o DNA se prepare para receber a sonda, que, após ser marcada com fluorocromo (2), é hibridizada ao DNA-alvo (3) e detectada, no caso de marcação indireta (4), para então ser visualizada em microscopia de fluorescência (5).
2. 
As técnicas de hibridização genômica comparativa (CGH) e hibridização genômica comparativa de array (CGH array) são amplamente usadas na detecção de tumores e possibilitam a detecção de outras doenças, como as que ocorrem em embriões durante a gestação. 
Assinale a alternativa que indica a principal diferença entre as técnicas de CGH e CGH array.
Resposta correta.
A. 
A CGH é realizada sobre o conjunto cromossômico total e a CGH array usa sequências genômicas conhecidas e fixas em uma lâmina;
A CGH usa o genoma do indivíduo como sonda ou uma sequência tumoral que é hibridizada ao seu cariótipo completo, e a CGH array hibridiza sondas rastreadoras de doenças às sequências de genes conhecidos dispostos diretamente sobre a lâmina.
Você não acertou!
B. 
A CGH usa sequências genômicas conhecidas e fixas em uma lâmina e a CGH array é realizada no conjunto cromossômico total;
A CGH usa o genoma do indivíduo como sonda ou uma sequência tumoral que é hibridizada ao seu cariótipo completo, e a CGH array hibridiza sondas rastreadoras de doenças às sequências de genes conhecidos dispostos diretamente sobre a lâmina.
Resposta incorreta.
C. 
A CGH é realizada em um cromossomo por vez, e a CGH array usa sequências genômicas conhecidas e fixas em uma lâmina.
A CGH usa o genoma do indivíduo como sonda ou uma sequência tumoral que é hibridizada ao seu cariótipo completo.
3. 
A técnica de hibridização usa o princípio básico da complementariedade de bases nitrogenadas como norteador. 
Assinale a alternativa que representa a sequência de pares de bases de DNA complementar da sonda TTAGGCTCCCTAAGGCC.
Resposta incorreta.
A. 
TTAGGCTCCCTAAGGCC;
Segundo o princípio da complementariedade de bases, T é complementar a A e G é complementar a C.
Você acertou!
B. 
AATCCGAGGGATTCCGG;
Segundo o princípio da complementariedade de bases, T é complementar a A e G é complementar a C.
Resposta incorreta.
C. 
AATCCTATTTATTGGCC.
Segundo o princípio da complementariedade de bases, T é complementar a A e G é complementar a C.
4. 
A temperatura é um fator-chave, que faz com que o ponto de fusão, ou seja, a temperatura em que a dupla fita de DNA se mantém aberta para se hibridizar à sonda, possa se alterar, dependendo da composição de pares de bases desse DNA. 
Assinale a alternativa que apresenta os outros fatores que interferem no anelamento da fita de DNA à sonda e no processo de hibridização.
Resposta incorreta.
A. 
pH, solventes inorgânicos e cátions monovalentes;
O pH alto produz condições de hibridização rigorosas. Os solventes inorgânicos não são usados na reação de hibridização. Os cátions monovalentes interagem eletrostaticamente com os ácidos nucleicos.
Resposta incorreta.
B. 
Acidez, solventes orgânicos e ânions monovalentes;
A acidez produz condições de hibridização ruins. Os solventes orgânicos diminuem a temperatura necessária para a reação de hibridização. Os ânions monovalentes não são usados na reação de hibridização.
Você acertou!
C. 
pH, solventes orgânicos e cátions monovalentes.
O pH alto produz condições de hibridização rigorosas. Os solventes orgânicos diminuem a temperatura necessária para a reação de hibridização. Os cátions monovalentes interagem eletrostaticamente com os ácidos nucleicos.
5. 
O ponto de fusão, ou seja, a temperatura em que a dupla fita de DNA se mantém aberta para se hibridizar à sonda, se altera conforme a composição de pares de bases desse DNA. 
Assinale a alternativa que apresenta o fragmento de DNA mais estável e com maior ponto de fusão, conforme sua composição.
Resposta incorreta.
A. 
AATTGCGATA;
O fragmento AATTGCGATA é rico em pares de base A e T, que apresentam apenas duas pontes de hidrogênio em sua composição.
Resposta incorreta.
B. 
TTAATTATAT;
O fragmento TTAATTATAT é composto apenas de pares de base A e T, que apresentam apenas duas pontes de hidrogênio em sua composição.
Você acertou!
C. 
GCGTGCGACA.
O fragmento GCGTGCGACA é rico em pares de base G e C, que apresentam três pontes de hidrogênio em sua composição, tornando-o mais estável e fazendo com que necessite de maior temperatura para atingir seu ponto de fusão.
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