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DISCIPLINA: Imunologia DOCENTE: M.V. DSc ISIS DE FREITAS ESPESCHIT BRAGA Imunologia I - EMENTA Sistema imune inato e especifico - propriedades, funções, células, órgãos e células do sistema imune; Ontogenia do sistema imune; mecanismos de reconhecimento e processamento antigênico; indução e regulação da Resposta Imune; Mecanismos efetores da resposta imune ; inflamação e sistema complemento; hipersensibilidade, doenças auto imunes e problemas clínicos relacionados à imunologia; Imunoprofilaxia e imunoterapias Imunologia II – OBJETIVOS DA DISCIPLINA -Compreensão dos mecanismos básicos que regem o funcionamento do sistema imune -Estudo da organização anatômica e funcional dos componentes do sistema imune e dos mecanismos celulares e moleculares que medeiam a imunidade inata e a imunidade adquirida. - Mecanismos imunológicos envolvidos nas hipersensibilidades. - Métodos laboratoriais que envolvem reações entre antígenos e anticorpos. Imunologia Conteúdo programático • Introdução à Imunologia • Propriedades Gerais das Respostas Imunes • Imunidades Inata e Adaptativa • Células e Tecidos do Sistema Imune -Organização Anatômica e Funcional Imunologia • Receptores antigênicos: Imunoglobulinas e o Receptor do Linfócito T • O Complexo Principal de Histocompatibilidade • Processamento e Apresentação de Antígenos • Maturação de Linfócitos T e B - Geração da Diversidade do Repertório Imune. • Ativação dos Linfócitos T e B – Moléculas Acessórias e Citocinas • Regulação da Resposta Imune e Tolerância Imunológica Imunologia • Mecanismos Efetores Imunidade Humoral – o Sistema do Complemento • Mecanismos Efetores Imunidade Celular • Resposta Imune contra Patógenos • Hipersensibilidades, doenças autoimunes e problemas clínicos relacionados à imunologia; • Métodos Imunológicos utilizados em laboratórios. • Imunoprofilaxia e imunoterapias Bibliografia básica ROITT, fundamentos de imunologia. 13. Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2018 1 recurso online ISBN 9788527733885. ABBAS, Abul K. Imunologia celular e molecular. Rio de Janeiro GEN Guanabara Koogan 2019 1 recurso online ISBN 9788595150355. ABBAS, Abul K. Imunologia básica funções e distúrbios do sistema imunológico. Rio de Janeiro GEN Guanabara Koogan 2017 1 recurso online ISBN 9788595151369. Bibliografia complementar SCUTTI, Jorge Augusto Borin (Org.). Fundamentos da imunologia. São Paulo: Rideel, 2016. 472 p. ISBN 9788533935150 CIÊNCIAS farmacêuticas imunoensaios, fundamentos e aplicações. 2. Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2018 1 recurso online ISBN 9788527734042. IMUNOLOGIA clínica. Porto Alegre SAGAH 2019 1 recurso online ISBN 9788533500716. Vamos começar? Introdução à Imunologia AULA 1- Imunologia DOCENTE: M.V. DSc ISIS DE FREITAS ESPESCHIT BRAGA Introdução à Imunologia • JUSTIFICATIVA: • O entendimento do sistema imune e seu funcionamento é importante para a compreensão dos processos de adoecimento, possibilitando a intervenção sobre esses. • Doenças autoimunes • Hipersensibilidade (alergias) • Transplantes • Imunização • Métodos diagnósticos (imunodiagnóstico) • Imunoterapias Introdução à Imunologia • OBJETIVO GERAL: Conhecer os principais termos e conceitos da imunologia e os principais tópicos a serem estudados ao longo do período. • Para essa disciplina você precisará usar sua bagagem: • Microbiologia • Biologia Celular • Bioquímica Ao final dessa aula você deverá ser capaz de: • Compreender o que é imunologia e sua importância • Conhecer os principais conceitos sobre imunologia, à serem aplicados ao longo de todo o período • Construir um panorama geral sobre os mecanismos de defesa envolvidos na resposta imune Sumário 1. Introdução à imunologia 1. Conceituação, histórico e importância 2. Interação hospedeiro x Agente estranho 3. Mecanismos passivos de proteção 1. Mecanismos mecânicos 2. Mecanismos químicos 3. Mecanismos biológicos 4. Resposta imune 1. Resposta imune inata 2. Resposta imune adiquirida Conceituação, histórico e importância Introdução à imunologia Introdução à Imunologia Imunidade do latim significa “isento” ou “livre”, Neste sentido refere-se aos mecanismos utilizados pelo organismo como proteção contra agentes estranho ao corpo. Você já pensou como era o mundo sem a imunologia? Doenças autoimunes Hipersensibilidade (alergias) Transplantes Imunização Métodos diagnósticos (imunodiagnóstico) Imunoterapias Você já pensou como era o mundo sem a imunologia? - A noção de que os micro-organismos são causadores de doenças era vaga e mencionada nos trabalhos mais antigos que procuravam esclarecer a natureza do contágio; - Contagium era uma substância derivada do corpo doente e que, passando de um indivíduo para o outro, transmitia a enfermidade (organismo vivo doente); - Miasma era uma substância gerada fora do corpo e que, espalhando- se por intermédio do ar, produzia a doença (matéria morta); De onde veio a Imunologia? • Edward Jenner (1796) • Descoberta da imunidade • Cock • Descoberta dos microorganismos • Louis Pasteur (década de 1880) • Perda de virulência permite que as vacinas funcionem • Behring & Kitasato • Imunidade transferida por substâncias do soro a que chamaram anticorpos Portanto, imunologia é.... IMUNOLOGIA é a disciplina que estuda os processos de reconhecimento de substâncias não-próprias ao organismo ou próprias modificadas (antígenos), que incluem microrganismos ou macromoléculas e o conjunto de respostas geradas consiste na: RESPOSTA IMUNOLÓGICA Antígeno? É denominado antígeno: Qualquer estrutura química que possa induzir uma resposta imune. Moléculas estranhas ao organismo (não próprias; ex. microrganismos), e também em moléculas do próprio organismo. Epítopo- menor porção de antígeno com potencial de gerar a resposta imune Interação hospedeiro x agente estranho Interação hospedeiro x agente estranho .. Mecanismos passivos de proteção Mecanismos mecânicos Mecanismos químicos Mecanismos biológicos Mecanismos protetores passivos • Fatores mecânicos • Fatores químicos • Fatores biológicos Mas e se isso não funcionar? • Caso essas barreiras não tenham sido suficientes, entram em ação os componentes da resposta imune • Células, moléculas...etc Atenção! Resposta imune Resposta imune inata Inespecífica Resposta Imune inespecífica • Respostas imunes inatas -Também conhecida como resposta imune celular - Reação de fase aguda - Proporcionam respostas locais rápidas: primeira proteção/linha de defesa - Resposta inflamatória local- Migração de células brancas • Componentes celulares: • Fagócitos (Macrófagos e Neutrófilos) e Linfócitos NK, Sistema complemento, células natural killer Resposta Imune inespecífica • Características gerais: • Alguma especificidade: - O Sistema Inato possui habilidade de reconhecer padrões moleculares importantes (PAMP`s). - Capaz de reconhecer microorganismos que expressam determinado padrão molecular, mas não diferenciando- os entre si. Características resumidas: -Diversidade: Limitada a certos padrões -Tempo de resposta: Imediato -Ausência de memória -Tolerância a si próprio Padrões moleculares associados a patógenos PAMP’s Receptores TLR Resposta imune adaptativa Específica, adquirida Resposta imune específica/adquirida • Respostas imunes adaptativas • Específica - Células T e B -Imunoglobulinas/anticorpos Resposta imune específica/adquirida • Características resumidas: -Especificidade elevada: Os linfócitos expressam receptores que são apropriados para detectar diferenças discretas entre antígenos distintos. -Diversidade muito grande. -Tempo de resposta: dias -Presença de memória -Tolerância a si próprio Primeira exposição/contato Resposta secundária Contato reincidente Mais rápido Células de memória Pode ser iniciada por substancias semelhantes (vacina) Respostaimune adaptativa Agora que conhecemos os mecanismos da resposta imune Vamos ver alguns conceitos: Imunização ativa, Imunização passiva e Imunização Adotiva Imunização Ativa, Passiva e adotiva 1. Imunização ativa: Refere-se a imunização de um individuo por meio da administração de um antígeno. a. Ativa natural: adquirida através de doença clínica ou subclínica; b. Ativa artificial: adquirida por meio de vacinas. Imunização Ativa, Passiva e adotiva 2. Imunização passiva: Refere-se a imunização por meio da transferência de anticorpos específicos de um individuo imunizado para um não imunizado. a. Passiva natural: passagem de IgG por meio da placenta (congênita); b. Passiva artificial: passagem de anticorpos prontos (Ex. soro antitetânico). Imunização Ativa, Passiva e adotiva 3. Transferência adotiva: Refere-se a transferência de imunidade por meio da transferência de células do sistema imune (transfusão sanguínea). Atividades de fixação (Instituto Lauro de Souza Lima – Bauru/SP) A menor porção da molécula antigênica responsável pela interação com anticorpo ou linfócito T denomina-se: a) Epítopo b) Antigenicidade c) Imunogenicidade d) Proteína C Atividades de fixação • Proteção dependente de mecanismos que existem antes da ocorrência de infecção, são capazes de uma resposta rápida e reagem essencialmente do mesmo modo A- Resposta imune inata B- Resposta imune adquirida C- Imunidade adotiva D- Imunidade passiva Atividades de fixação ( ) Os mecanismos efetores da imunidade inata são sempre usados para eliminar agentes estranhos mesmo durante a resposta imune adaptativa; ( ) A resposta imune inata estimula a resposta imune adaptativa e pode influenciar sua natureza tornando-a mais efetiva contra diferentes tipos de agentes patogênicos ( ) Mecanismos de proteção passivos estão funcionais continuamente, enquanto mecanismos da resposta imune dependem da presença de um estímulo (antígeno) ATENÇÃO! Leitura complementar! classroom Agora você já é capaz de: • Compreender o que é imunologia e sua importância • Conhecer os principais conceitos sobre imunologia, à serem aplicados ao longo de todo o período • Construir um panorama geral sobre os mecanismos de defesa envolvidos na resposta imune Bibliografia » Imunologia celular e molecular / 2019 ABBAS, Abul K. Imunologia celular e molecular. Rio de Janeiro GEN Guanabara Koogan 2019 1 recurso online ISBN 9788595150355. Bibliografia complementar Apostilas enviadas Até a próxima Na aula anterior discutimos: 1. Introdução à imunologia 1. Conceituação, histórico e importância 2. Interação hospedeiro x Agente estranho 3. Mecanismos passivos de proteção 1. Mecanismos mecânicos 2. Mecanismos químicos 3. Mecanismos biológicos 4. Resposta imune 1. Resposta imune inata 2. Resposta imune adquirida Órgãos, tecidos e células envolvidos na resposta imune AULA 2- Imunologia DOCENTE: M.V. DSc ISIS DE FREITAS ESPESCHIT BRAGA Órgãos, tecidos e células envolvidos na resposta imune • OBJETIVO: Conhecer as principais células, órgãos e tecidos envolvidos na resposta imune e suas respectivas funções Sumário • Órgãos linfoides • Primários • Secundários • Células do sistema imune • Células envolvidas na resposta imune inata • Células envolvidas na resposta imune adaptativa Órgãos, tecidos e células envolvidos na resposta imune • O sistema imunológico é constituído por uma intrincada rede de órgãos, células e moléculas, e tem por finalidade manter a homeostase do organismo, combatendo as agressões em geral. Órgãos linfóides Órgãos linfóides • Primários • Medula óssea • Timo • Bursa de Fabricius (Aves) • Secundários • linfonodos, • placas de Peyer, • baço e • vasos linfáticos Órgãos linfóides primários • Medula óssea • Timo • Bursa de Fabricius (Aves)- Linfócitos B Produção e maturação celular Medula óssea • Hematopoiese, incluindo hemácias, monócitos, leucócitos polimorfonucleares (granulócitos), linfócitos B e plaquetas. Medula óssea • desenvolvimento das células B, • fonte de células-tronco que dão origem aos linfócitos T. • Esses migram para o timo, órgão localizado na porção superior do tórax, no qual se multiplicam Timo • Maturação de linfócitos T • lóbulos de células epiteliais fracamente agrupadas, • cobertas individualmente por uma cápsula de tecido conjuntivo • Córtex parte externa de cada lóbulo, • infiltrado com linfócitos, • Medula: parte interna, existem poucas dessas células Órgãos linfóides secundários • Nos órgãos secundários ou periféricos, os linfócitos encontram os estímulos antigênicos, iniciando as respostas adaptativas • linfonodos, • placas de Peyer, • baço e • vasos linfáticos Linfonodos • Regiões de convergência de vasos linfáticos • Coletam o fluido extracelular dos tecidos, fazendo-o retornar para o sangue: linfa • Estruturas redondas ou em forma de feijão • Posicionados nos canais linfáticos • Ducto torácico • Linfa, já filtrada, volta ao sangue, • Ducto se conecta a duas veias, a subclávia e a jugular. Linfonodos • Importantes na captura do antígeno e inicio da resposta imune adaptativa • Capturar os antígenos que estão sendo transportados pela linfa. • Córtex periférico: células B • Medula central e paracórtex: células T Placas de Peyer • Linfonodos especializados • contendo células imunológicas destinadas a proteção do sistema gastrointestinal Baço • Maior órgão linfóide secundário • filtra o sangue, sendo o único órgão linfóide entreposto na corrente sanguínea: • remove do sangue células sanguíneas e microrganismos, bem como células cobertas por anticorpos, em condições fisiológicas ou patológicas Células T e B, Macrófagos especiais, outras APC Células envolvidas na resposta imune Células envolvidas na resposta imune • As células envolvidas na resposta imune são produzidas a partir de células tronco na medula óssea e podem ser classificadas como: • Células da linhagem mieloide: precursoras dos granulócitos (eosinófilos, neutrófilos e basófilos), fagócitos mononucleares (monócitos e macrófagos), células dendríticas e mastócitos • Células da linhagem linfoide: dão origem aos linfócitos B e T (Th- helper (ou Ta-auxiliar) e Tc-citotóxico e às células natural killer Células envolvidas na resposta imune - células circulantes no sangue e na linfa; - aglomeradas anatomicamente definidos nos órgãos linfóides; - distribuídas praticamente em todos os tecidos Células envolvidas na resposta imune INATA • As principais células efetoras da imunidade inata são: • macrófagos, • neutrófilos, • Eosinófilos • basófilos • células dendríticas e • células Natural Killer – NK Células envolvidas na resposta imune INATA • Fagocitose, liberação de mediadores • Ativação de proteínas do sistema complemento, • Síntese de proteínas de fase aguda: citocinas e quimiocinas Células envolvidas na resposta imune INATA • Mecanismos ativados por estímulos específicos • estruturas moleculares de ocorrência ubíqua em micro- organismos • lipopolissacarídeos, resíduos de manose e ácidos teicoicos, • Padrões Moleculares Associados a Patógenos (PAMPs) Células envolvidas na resposta imune INATA • ativam a resposta imune • interação com Receptores de Reconhecimento de Padrões (RRP), • Toll-like (TLRs). • semelhante à complementaridade entre antígeno e anticorpo • não há diversidade nem capacidade adaptativa para a geração de novos receptores Células envolvidas na resposta imune INATA • ligação a patógenos e iniciação da resposta inflamatória. • macrófagos, neutrófilos e células dendríticas (DCs). • Outros receptores presentes em fagócitos • Receptores para • fraçõesdo complemento, • citocinas, • interleucinas e • imunoglobulinas Macrófagos • 3% a 8 % dos leucócitos circulantes • no tecido conjuntivo ou parênquima de órgãos, •engolfando patógenos e debris celulares. • processam e apresentam antígenos: MHC, • estimulando, assim, a resposta mediada por LT • Secretam citocinas e mediadores pro- inflamatórios, • reparo tecidual estimulando fibroblastos • produzem RL Macrófagos • Alguns micro-organismos, como o Mycobacterium tuberculosis, são resistentes à ação microbicida e permanecem viáveis nos fagossomos de macrófagos • Esses macrófagos se tornam grandes e multinucleados (células gigantes) e, juntamente com linfócitos e fibroblastos que se acumulam a seu redor, formam os granulomas, que constituem a tentativa do organismo de impedir a disseminação do patógeno. • Nomes especiais: micróglia (SNC), cels. Kupffer (fígado), macrófagos alveolares (vias aéreas), osteoclastos (tecido ósseo) Células dendríticas • Captura e apresentação de antígenos para os linfócitos • Ponte entre a imunidade inata e a adaptativa • Residem em tecidos periféricos, como pele, fígado e intestino • capturam antígenos e se tornam ativadas, migrando para os linfonodos regionais, nos quais processam e apresentam antígenos proteicos ou lipídicos aos LTs. • Os antígenos capturados são processados dentro da célula e apresentados em sua superfície, inseridos em moléculas do MHC. • primeiras células a chegar a um sítio infeccioso Células dendríticas • Após o contato com o antígeno, as DCs se tornam ativadas e migram pelos vasos linfáticos até os órgãos linfoides secundários • Podem receber sinais de maturação a partir de células NK, NK/T e LT, de moléculas proinflamatórias como citocinas, prostaglandinas e interferons e dos PAMPs Células dendríticas • Retêm o antígeno nos órgãos linfoides memóriaimunológica • Orquestram a migração de outros tipos de células • via secreção de quimiocinas • regulam a diferenciação, a maturação e a função de LT Neutrófilos • Leucócitos mais abundantes no sangue periférico, • fases precoces • Sensíveis a agentes quimiotáxicos, produtos bacterianos, proteínas do complemento, imunocomplexos (IC), quimiocinas e citocinas. • recrutamento • Fagocitária Neutrófilos- Doenças autoimunes Em condições normais, os neutrófilos são eliminados da circulação e dos tecidos inflamados por apoptose. Distúrbios na apoptose dessas células têm sido associados a diversas condições autoimunes Células Natural Killer • progenitor comum aos LTs, • 5% a 20% das células mononucleares do sangue. • Reconhecendo e lisando células infectadas por vírus, bactérias e protozoários, bem como células tumorais. • Secretam citocinas pro-inflamatórias • Recrutam neutrófilos e macrófagos, ativam DCs e linfócitos T e B Células Natural Killer • Citólise • enzimas perforinas, que criam poros na membrana das células-alvo, e granzimas, que penetram nas células, desencadeando morte celular por apoptose. • Os receptores de inibição reconhecem moléculas próprias, expressas na superfície de todas as células nucleadas. • Células infectadas, especialmente por vírus, e células tumorais frequentemente apresentam baixa expressão dessas proteínas de (MHC classe I), tornando-se vulneráveis à ação das NK • destruição de células revestidas por anticorpos IgG: citotoxicidade celular dependente de anticorpos Natural Killer Interação da célula NK com uma célula normal do organismo que expressa MHC de classe I, com consequente inibição da indução de citólise NK dependente. Natural Killer • Interação de célula NK com célula infectada por vírus, com consequente perda de expressão de MHC de classe I, o que resulta na ativação da célula NK, com concomitante liberação dos produtos letais Mastócitos • Não são encontrados na circulação. • Migram para os tecidos periféricos: diferenciam in situ • abundantes em áreas de contato com o meio ambiente • sob o epitélio da pele e mucosas • Reações inflamatórias agudas. • Receptores ligados a moléculas de IgE, e são ativados pelo reconhecimento de antígenos multivalentes pelas IgEs. Mastócitos- ativação • Produtos da ativação do complemento • alguns venenos de animais • trauma mecânico, calor e frio • Componentes bacterianos • reações alérgicas Mastócitos- ativação • degranulação • aminas vasoativas proteases, heparina, IL-4, TNF-α e GM-CSF (Granulocyte- Macrophage Colony-Stimulating Factor fator ativador de plaquetas (PAF), derivados do ácido araquidônico e uma série de citocinas • induz a migração de células inflamatórias • aumento da permeabilidade vascular, • secreção de muco, • aumento da motilidade gastrintestinal • broncoconstrição Mastócitos- doenças • A urticária idiopática crônica é causada principalmente por degranulação de mastócitos • autoanticorpos causam liberação de histamina • urticária crônica autoimune • Há evidências experimentais da participação de mastócitos também em doenças cardiovasculares, processos neoplásicos, infecções parasitárias e bacterianas, enfermidades fibrosantes e doenças autoimunes Basófilos • Granulócitos • menos de 1% dos leucócitos do sangue periférico. • grânulos apresentam mediadores similares aos dos mastócitos. • ativados por complexos IgE- antígeno, • contribui hipersensibilidade imediata Eosinófilos • Granulócitos • Ação antiparasitária (helmintos), • Grânulos proteolíticos secundários • Encontrados em maior número nas regiões de mucosas • Recrutados para sítios de infecções parasitárias e reações alérgicas por moléculas de adesão e quimiocinas. • Combatem infecções parasitárias por citotoxicidade • aderem aos patógenos revestidos com anticorpos ige (ou iga), liberam seu conteúdo Eosinófilos • induz a degranulação de mastócitos e basófilos, e ativa a síntese de fatores de remodelação por células epiteliais. • cria poros na membrana da célula- alvo • Promove estresse oxidativo na célula- alvo • produção de citocinas Recrutamento Células da resposta imune adaptativa • Linfócitos • duas populações principais, dependendo do órgão linfóide primário onde ocorreu o amadurecimento. • T: amadurecem no timo • B: amadurecem em vários órgãos diferentes, como a medula óssea nos primatas e roedores e a bursa de Fabricius nas aves. Células da resposta imune adaptativa Consistem em subtipos que diferem nas suas funções - Morfologicamente similares - Linfócitos B: produção de anticorpos - Linfócitos T: mediadores da imunidade (TCD4+ auxiliar e TCD8+ citotóxico) Atividades de fixação Qual a principal diferença entre órgãos linfoides primários e secundários? Atividades de fixação Em relação à anatomia e à fisiologia dos órgãos linfóides, analise as seguintes afirmativas. I. A medula óssea e o timo são considerados órgãos linfóides primários, onde ocorre a geração e maturação dos linfócitos. Já o baço e os linfonodos são órgãos linfóides secundários, onde é iniciada a resposta adaptativa. II. O timo, o baço e os linfonodos são órgãos linfóides primários, onde ocorre a maturação dos linfócitos e a iniciação da resposta adaptativa. III. A geração e diferenciação de linfócitos B e T ocorre na medula óssea e no timo. Uma vez completada a maturação, ambos os tipos celulares entram na circulação e migram para órgãos linfóides secundários. Assinale: A- se todas as afirmativas estiverem corretas. B- se apenas as afirmativas II e III estiverem corretas. C- se apenas a afirmativa II estiver correta. D- se apenas as afirmativas I e II estiverem corretas. E- se apenas as afirmativas I e III estiverem corretas. Atividades de fixação O sistema linfático humano consiste em uma extensa rede de capilares e amplos vasos coletores, linfonodos e órgãos linfoides, representando uma via auxiliar de drenagem do sistema venoso. Sobre os órgãos desse sistema, é INCORRETO afirmar que: A- O timo é o órgão responsável pela maturação de linfócitos T, que depois entram no sangue e nos tecidos linfoides periféricos. B- O timo é uma glândula que involui durante a puberdade,sendo substituído, em grande parte, por tecido adiposo na vida adulta. C- O baço é um órgão linfoide primário que tem como função a maturação dos linfócitos B, responsáveis pela resposta imune humoral. D- Os gânglios linfáticos são órgãos linfoides secundários vascularizados e encapsulados, eles estão localizados por todo corpo ao longo dos vasos linfáticos. E- Órgãos linfoides secundários ou periféricos são aqueles em que se iniciam e desenvolvem as respostas a antígenos estranhos. Atividades de fixação A alergia é uma reação exacerbada do sistema imune a um antígeno específico, que nesse caso é denominado alérgeno. As alergias mais frequentes caracterizam-se por um aumento da síntese de uma classe de anticorpos (imunoglobulina IgE) por células específicas que são A células NK. B- macrófagos. C- mastócitos. D- linfócitos B. E- linfócitos T. ATENÇÃO! Leitura complementar! CRUVINEL, Wilson de Melo et al. Sistema imunitário: Parte I. Fundamentos da imunidade inata com ênfase nos mecanismos moleculares e celulares da resposta inflamatória. Revista Brasileira de Reumatologia, v. 50, n. 4, p. 434-447, 2010. Agora você já é capaz de: • Explicar a anatomia do sistema imune, seus órgãos e respectivas participações na resposta imune • Enumerar os elementos figurados que participam da resposta imune e suas respectivas funções; Bibliografia » Imunologia celular e molecular / 2019 ABBAS, Abul K. Imunologia celular e molecular. Rio de Janeiro GEN Guanabara Koogan 2019 1 recurso online ISBN 9788595150355. Até a próxima