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UNIVERSIDADE PAULISTA
	Tipo do
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	PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
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	PREPARO DO ESFREGAÇO SANGUÍNEO
	Emissão:18/10/2024
	Próxima revisão:
18/10/2026
	
	
	Versão: 1.0
	
 
1-OBJETIVO(S)
 Realizar a padronização de esfregaço sanguíneo em amostras de sangue ou distensão sanguínea em pacientes, confeccionadas pelo técnico de análises clínicas. O objetivo deste procedimento é criar uma fina camada de sangue uniformemente distribuída na lâmina para análise microscópica posterior. Com o esfregaço sanguíneo preparado, você pode observar a morfologia e os diferentes tipos de células sanguíneas presentes, como os eritrócitos, leucócitos e plaquetas, além de possíveis alterações, como anormalidades nas células vermelhas ou a presença de células imaturas. É importante ressaltar que esse procedimento deve ser realizado por profissionais devidamente capacitados, seguindo as boas práticas de laboratório e as normas de segurança.
2-MATERIAL
 • Lâmina de vidro limpa e desengordurada;
 • Luvas;
 • Amostra de sangue total;
 • Pipetas de 0,5-10uL;
 • Ponteiras;
 • Papel toalha;
 • Corantes hematológicos (May-Grünwald e Giemsa ou Panótico rápido);
 • Microscópio óptico.
3-DESCRIÇÃO DOS PROCEDIMENTOS 
3.1 Identificação da amostra
· Etiquetar o frasco de coleta com a amostra do sangue periférico em tubo de ácido etilenodiamino tetra-acético – EDTA com a identificação do paciente(nome completo, data de nascimento, tipo de amostra e data de coleta). 
· A etiqueta da amostra de sangue periférico de pacientes internos e ambulatoriais deve ser posicionada nos frascos de colheita a partir da tampa para o fundo em linha reta de forma que o código de barras fique visível e alinhado, sem enrugamentos.
3.2 Coleta de amostra
· A coleta da amostra pode ser realizada a qualquer hora, observando as recomendações médicas.
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· Utilizar uma das veias da fossa cubital (basílica, cubital média, cefálica ou cefálica acessória).
· Usar seringa de 10 ml ou tubo a vácuo para coletar a amostra de sangue periférico. Tubos a vácuo contendo EDTA (frascos de tampa roxa) com volume de aspiração padronizado no tubo de coleta com a amostra de sangue periférico.
3.3 Procedimentos
 Bancada:
 • Organize a bancada de trabalho;
 • Forrar a bancada com papel toalha.
 Preparação das lâminas:
 • Limpe cuidadosamente as lâminas de microscopia;
 • Escolher uma lâmina para utilizar de extensora;
 • Faça a identificação na lâmina que será confeccionado o esfregaço;
 • Pipete 10uL de sangue na extremidade da lâmina;
 • Posicione a lâmina extensora a 45ºC sobre a face da lâmina que está com a gota de sangue;
 • Faz-se um ligeiro movimento da extensora para trás, até encostar-se no sangue, deixando que este material se difunda uniformemente, ao longo de toda a borda;
 • Fazer movimento de deslizar a extensora para frente. É essencial escorregar a extensora em um movimento único e uniforme.
 • Deixar secar ao ar livre;
 • Fazer a coloração.
3.3.1 Procedimentos
Coloração com May-Grünwald e Giemsa:
• Cobrir a lâmina com o corante de May Grunwald e deixar atuar por 2 minutos. 
• Acrescentar 20 gotas (1 mL) de água destilada tamponada pH 7,0-7,2, deixar atuar por 1 minuto e homogeneizar.
• Escorrer sem lavar.
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• Cobrir com a solução de Giemsa diluída (1 gota de corante Giemsa para cada 1 mL de água destilada) e deixar atuar por 13-15 minutos (o laboratório deve avaliar o tempo em função da espessura dos esfregaços ou da sua preferência).
• Lavar com água destilada e deixar secar em posição vertical.
3.3.2 Procedimentos
Coloração com Panótico rápido:
• Preparar as extensões sanguíneas e deixar secar em temperatura ambiente; 
• Submergir as lâminas na solução nº 1, mantendo um movimento contínuo de cima para baixo ou para os lados durante 5 segundos (5 imersões de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem;
• Submergir as lâminas na solução nº 2, mantendo um movimento contínuo de cima para baixo ou para os lados durante 5 segundos (5 imersões de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem;
• Submergir as lâminas na solução nº 3, mantendo um movimento contínuo de cima para baixo ou para os lados durante 5 segundos (5 imersões de 1 segundo cada) e deixar escorrer bem;
• Lavar com água deionizada ( de preferência tamponada a pH 7), secar ao ar na posição vertical e com o final da extensão voltado para cima.
4-RESULTADO
Após a conclusão do procedimento, com a lâmina seca colocar uma gota de óleo de imersão e observar no microscópio na objetiva de 100x.
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5-REFERÊNCIAS
SOCIEDADE BRASILEIRA DE PATOLOGIA CLÍNICA. Recomendações da Sociedade Brasileira de Patologia Clínica/Medicina Laboratorial para coleta de sangue venoso. 2 ed. Barueri: Minha Editora, 2010. Disponível em: http://www.sbpc.org.br/upload/conteúdo/320090814145042.pdf. Acesso em 13/10/2024.
 EMPRESA BRASILEIRA DE SERVIÇOS HOSPITALARES. POP.ULAC.035 – Confecção do Esfregaço Sanguíneo. v.01, 13 de outubro de 2021. João Pessoa, 2021. 3p.
https://repositorio.pgsscogna.com.br/bitstream/123456789/55719/1/Confec%C3%A7%C3%A3o%20de%20Esfrega%C3%A7o%20Sangu%C3%ADneo.pdf
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