PRINCIPIOS E TECNICAS DE DIAGNOSTICO

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Profª: Helene Lucena
Esp: Imunologista Clínica e Microbiologista
Qualitativo: + ou –
 Semi-quantitativo: amostra testada foi 
diluída – a maior diluição que apresentar 
reação é o seu título (ex. + ate a diluição 
1:320)
Quantitativo: informa quantidade absoluta 
do material detectado. 
 Afinidade
 Avidez
 Taxas Ag-Ac
 Reações Cruzadas
• Monoclonais
• Policlonais
Técnicas sem uso de marcadores
 Reações de Precipitação
 Reações de Aglutinação
Técnicas com uso de marcadores
 ELISA
 Citometria de fluxo
 Imunofluorescência
 Radioimunoensaio
• PRECIPITAÇÃO 
- Imunodifusão dupla
- Imunodifusão radial
- Imunoeletroforese
• AGLUTINAÇÃO
- Aglutinação direta e indireta
- Inibição da aglutinação
- Teste de Coombs
• IMUNOENSAIOS
- Radioimunoensaio
- ELISA 
- Imunofluorescência
- Citometria de Fluxo
REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO
ZONA DE EQUIVALÊNCIA
EFEITO PRÓ - ZONA
EFEITO PÓS -
ZONA
 Caracteriza pela formação de agreagados
visíveis com resultado da interação de AC
específicos e partículas insolúveis que
contenham determinantes antigênicos
dispostos em sua membrana.
 Partículas que apresentam os epítopos de 
interesse em sua superfície.
Hemácias
 Bactérias
 Protozoários
Quando é necessário sensibilizar uma
partícula inerte ou uma célula de suporte
para que a reação seja visualizada.
 Latéx
 Cristais de colesterol
Ligação AG x AC
 Princípio: baseado na agregação de
partículas antigênicas ou na sua forma
íntegra, decorrente da formação de
imunocomplexos
 AG x AC
 Pesqisa de AG
 LÁTEX SENSIBILIZADO COM AC
 Analíses qualitativas e semi- qualitativas / 
quantitativas
 Tipagem fenotípicas v(ABO e sistemas)
 Pesquisa e identificação de anticorpos 
irregulares
 Teste de widal (salmonelose)
 Testes de Wright (brucelose)
 Cristal de colesterol + lecitina e cardiolipina 
X
Ac lipídicos
VDRL: TESTE NÃO TREPONÊMICO PARA 
DETECÇÃO DA SÍFILIS
• O teste identifica e quantifica Ag ou Ac, utilizando um dos
dois conjugados com enzimas.
• O produto final  ação da enzima sobre o substrato = COR
• Produto final corado leitura em fotocolorímetro.
• Principais tipos de ELISA: indireto, direto e competitivo.
Vantagens do ELISA:
-Utiliza reagentes estáveis
-Teste de alta sensibilidade
-Seguros e de baixo custo
-Não trabalha com radioisótopos
-pode ser adaptado tanto a testes simples quanto à automação
-Não depende de formação de precipitado, aglutinado, etc.
 Direto = Ag
 Indireto = Ac
Princípio da técnica:
• Anticorpos ou antígenos são conjugados a um fluorocromo, que,
quando excitado por radiações UV, emite luz no espectro visível.
• A reação é feita em lâminas de microscopia e a observação em um
microscópio de fluorescência
• Principais fluorocromos: fluoresceína (isotiocianato de fluoresceína –
FITC) e rodamina (isotiocianato de tetrametil rodamina – TRICT).
IFA direta:
• Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas fezes,
em cortes de tecidos etc. Também é utilizada na fenotipagem de células
tumorais, e doenças imunológicas renais e de pele.
IFA indireta: 
• pesquisa de antígenos ( plasmódio em hemácia) e de anticorpos ( sífilis,
toxoplasmose, rubéola, citomegalovírus, vírus herpes simples, doença de 
chagas, malária, etc)
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA
• Separação de células marcadas por fluorescência;
• Anticorpos dirigidos contra moléculas de membrana ou
Antígenos do Conjunto de Diferenciação (CD)
• Cada anticorpo pode ser marcado com um fluorocromo
diferente.
• É um teste qualitativo e quantitativo.
• Ferramenta que detecta e quantifica células individuais
passando em uma corrente através de um feixe de Laser.
CD 4
CD 18
CD 125
CD 147
• SISTEMA FLUIDO: INTRODUZ E ALINHA AS 
PARTÍCULAS EM UM FLUXO CONTÍNUO
• SISTEMA ÓPTICO: GERA E COLETA OS 
SINAIS DE LUZ.
• SISTEMA ELETRÔNICO: CONVERTE OS 
SINAIS ÓPTICOS EM SINAIS ELETRÔNICOS, 
DISPONIBILIZANDO-OS PARA ANÁLISE NO 
COMPUTADOR. 
 Moléculas marcadas com isótopo ( I 125 ,I 131 )
 Marcações:
 I125: emite raios gama
 H3: raios beta 
 Desvantagem  manipulação de isótopo radioativo.
• Aplicações: Triagem vírus da hepatite B em doadores de 
sangue, Hormônios, proteínas séricas, drogas (urina ou 
soro de atletas), etc.
• Vantagens:
– Alta sensibilidade
– Permite medidas rápidas e precisas
– Limiar de detecção em nanogramas e picogramas.
• Desvantagens:
– Custo
– Vida média dos reagentes
– Risco operacional (radiação)
RADIOIMUNOENSAIO