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Unidade 1 - Tópico 4 R.: Os métodos de sequenciamento de primeira geração dependem da utilização dos didesoxinucleotideos (ddNTPs), ou nucleotídeos terminadores de cadeia, ao passo que os de segunda e terceira geração não mais necessitam dessa ferramenta. Ainda, os métodos de segunda e terceira geração, embora tenham em comum a não utilização de ddNTPs, apresentam uma substancial diferença, que se encontra no preparo do material a ser sequenciado. Nos métodos de segunda geração, o material a ser sequenciado deve ser submetido a uma amplificação por PCR, enquanto nos de terceira geração, essa etapa não é mais necessária, sendo possível o sequenciamento direto de uma única molécula de DNA. UNIASSELVI