Aula 6 - Cultura de Tecidos Vegetais

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CULTURA DE 
TECIDOS VEGETAIS 
Prof. Dr. Lee T. S. G. 
UFSCar – Universidade Federal de São Carlos / CCA – Centro de Ciências Agrárias 
DBV – Departamento de Biotecnologia Vegetal 
Laboratório de Fisiologia e Cultura de Tecidos 
• 1. Preparo das soluções-estoque; 
 
• 2. Conservação da solução-estoque; 
 (Solução estoque, água-de-coco...) 
 
• 3. Preparo do meio final; 
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Preparo do Meio de Cultura 
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Preparo das Soluções-estoque 
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Sais Minerais 
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5 
Vitaminas e Aminoácidos 
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6 
Açúcar, ágar, misturas complexas 
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• Triptona; 
• Peptona; 
• Extratos de banana; 
• Extratos de batata; 
• Extratos de maçã; 
• Extratos de tomate; 
• Extratos de cebola; 
• Extratos de.............. 
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Outras misturas complexas 
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8 
O que tem na água-de-coco? (endosperma líquido) 
9 
PGR - Reguladores de Crescimento 
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11 
A importância do PGR 
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13 
Outros 
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Componentes e sua função 
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16 
Qual tipo de água usar? 
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Frascos Comerciais 
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18 
Containers de Plástico 
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20 
Outro tipos de containers para BIT 
(Rita system) 
21 
Biorreator - SETIS 
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Preparo de Solução-Estoque MS 
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26 
Preparo de Meio-Final MS 
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Preparo de Meio-Final MS 
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Soluções-estoque para Cana-de-Açúcar 
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• Solução 1: KNO3 - 95g/L ........................... usar 20ml para 1 litro 
• Solução 2: NH4NO3 - 165g/L ..................... usar 10ml para 1 litro 
• Solução 3: KH2PO4 + MgSO4.7H2O ......... 10ml 
• Solução 4: CaCl2.2H2O ............................. 10ml 
• Solução 5: Na2EDTA.2H2O + FeSO4.7H2O ...................... 10ml 
• Solução 6: Micro-7 componentes (pode usar 1ml para 1L ou 
10ml da sub-estoque). 
CoCl2-6H2O: 0,025mg/L 
• Solução stock 1: 0,25g/L 0,25mg/ml 
• Solução stock 2: 
• Pegar 10ml solu 12,5mg para 1L(1000ml) 
• Cada ml0,0025mg (0,0025mg/ml) 
• Pegar 10ml0,025mg para meio final de 1L. 
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• Solução estoque: ???mg/ml para decidir 
???ml deve ser usado por 1 litro de meio 
final. 
 
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Solução-estoque 
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• Nome 
• Concentração (mg/ml) 
• Dia do preparo 
• Preparo de PGR: 
 - GA: usar etanol 
 - Adenina: usar 1N HCl 
 - O resto: usar 1N KOH 
 
*1N KOH: 5,6g/100ml H2O 
*1N HCl: mix 8,3ml concentrado de HCL (37%) 
com 91,7ml de H2O. 
 
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PGR 
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• Sais: MS 
• Vitaminas: Tiamina – 1.0mg/L 
 Inositol – 100mg/L 
• PGR: Kinetina – 0,1mg/L 
 BAP – 0,2mg/L 
• Sacarose: 20g/L 
• pH: 5.8 
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Composição final 
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de meio de cultura da cana-de-açúcar 
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Código de Barras e Esterilizador de Bolinha 
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Preparo do Meio de Cultura (1L) 
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Automação 
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Automação 
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Enbiojet 
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Cultura de tecidos de Samambaia 
Preparo de meio final para 
cultura de tecidos de 
Samambaia-Explantes: utiliza-se 
2-3 cm finais dos estolões. 
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Autoclavagem: 121C, 15-30 min. 
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Esfria e pronto para receber “explantes” 
Ler as paginas: 
• Livro de Souza e Junghans: p. 80~98 
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Fim da 
6ª Aula 
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• 1ª prova: dia 9/10 às 8:15 a.m. 
 
 
 
• 2ª prova: dia 11/12 às 8:15 a.m. 
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Provas 2013 
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