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LAC – setor de Parasitologia Objetivo: diagnóstico das principais parasitoses intestinais e sanguíneas Tipos de exames laboratoriais Exames diretos: 1) Exames macroscópicos: visualização de vermes adultos ou proglótides de Taenia sp expulsos nas fezes ou vômitos Ascaris lumbricóides Taenia sp Schistosoma mansoni - esquistossomose 2) Exames microscópicos: O exame de esfregaço a fresco pelos métodos diretos é o método mais fácil e, talvez, o mais usado na rotina do laboratório, permitindo visualizar os estágios de diagnóstico dos protozoários (trofozoítas e cistos) e dos helmintos (ovos, larvas e pequenos adultos). Para uma diagnose absoluta é necessário observar o parasita em um de seus estágios de evolução. O simples exame microscópico é, em muitos casos, suficientemente para o diagnóstico. Giardia lamblia: trofozoíta e cisto Cisto de Ascaris Entamoeba sp Plasmodium falciparum - malária Tripomastigota de Trypanosoma cruzi Trichomonas vaginalis Exames indiretos: 1) Pesquisa de anticorpos 2) Biologia Molecular COMO ESCOLHER O EXAME ? Custo/risco X Benefício Desempenho (sensibilidade, especificidade) é a probabilidade de um teste dar positivo na presença da doença, isto é, avalia a capacidade do teste detectar a doença quando ela está presente. -> Necessário para o diagnóstico de doença potencialmente gravE -> Afastar doenças em fase inicial do diagnóstico é probabilidade de um teste dar negativo na ausência da doença, isto é, avalia a capacidade do teste afastar a doença quando ela está ausente. -> Confirmar um diagnóstico sugerido por outros dados Existem muitos erros no diagnóstico, devido a: o Mau treinamento o Escolha do método (baixa sensibilidade) o Inadequação do método o Leitura parcial da lâmina o Sobrecarga de trabalho o característica do parasita (por ex: baixa carga parasitária) 1) Padronização dos procedimentos de coleta, 2) Orientação correta do paciente, 3) Padronização da análise do material, 4) Leitura de mais lâminas, 5) Evitar erro humano (no de lâminas por profissional compatível com a qualidade, aprimoramento profissional, supervisão) correção Exame parasitológico de fezes - Coleta Instruções impressas Frasco: limpo, seco, boca larga, com capacidade adequada, tampa de rosca ∗ obs: A tampa é particularmente importante (abrir, fechar e vedar) Amostra não pode ser contaminada com água ou urina ∗ obs: A água pode conter microorganismos de vida livre e a urina destrói a mobilidade e os trofozoitas; Após coleta, o frasco deve ser transportado dentro de um saco plástico Transporte: cuidado, produto representa risco potencial de infecção (bactéria, vírus, parasitas) -Trofozoitas – amostras líquidas, recentes- 30min -Trofozoitas e cistos – amostras pastosas - 60min -Ovos, larvas, cistos – amostras fecais formadas (24h) ∗ não se recomenda guardar amostras recentes em estufas e geladeiras ∗ rejeitar amostras coletadas sem as especificações solicitadas -Amostras com conservador - 4 semanas ou mais. Estabilidade da amostra coletada Entregar de preferência imediatamente - Fezes – riscos de ingestão (ovos e cistos) , penetração na pele (larvas infectivas) - Lab Nível 2, uso de óculos de segurança, luvas e avental durante o processamento da amostra - Uso de capelas - Não comer, beber, fumar, usar cosméticos ou manipular lente de contato na área de trabalho - Descontaminar superfície de trabalho – 1 vez ao dia - Cobrir ferimentos - Remoção das luvas e lavagem das mãos – após manipulação das fezes Biossegurança Exame direto qualitativo - Técnica de Concentração por Sedimentação (por gravidade) Espontânea (Método de Hoffmann, Pons e Janer) : Indicada para o diagnóstico de ovos, oocistos e cistos em fezes, principalmente para nematóides cujos ovos são pesados Materiais e reagentes Métodos qualitativos: • Centrífugo - sedimentação pela formalina-éter, (Ritchie, 1948); • Centrífugo-flutuação: Indicada para o diagnóstico de ovos de helmintos e oocistos de coccídeos. Métodos quantitativos: • Método modificado de Kato-Katz (Kato,1960; Katz, Chaves e Pellegrino, 1972); • Método de Baermann (1917) e Moraes (1948): Indicada para diagnóstico de larvas de estágio 1. • Método de Rugai, Mattos & Brisola (1954). • Método de McMaster: Constitu-se também uma técnica de OPG, empregada no diagnóstico de nematóides gastrintestinais Outros Métodos soro Lugol fezes Esfregaço de sangue + giemsa Cisto de Entamoeba Artefatos - microscopia Trofozoíto de E. hystolitica Célula epitelial Alga x cistos de helminto Esporo de fungo x cistos de helminto Pêlo ou larva ? Planta ou proglótide ? Automação no setor de Parasitologia DIFÍCIL => poucos laboratórios são automatizados Este equipamento reduz o custo da análise microscópica dos sedimentos concentrados das fezes, aumenta a segurança dos funcionários, reduz o tempo da análise, aumenta a clareza e os detalhes morfológicos. Existem aparelhos semi – automáticos que auxiliam no preparo do material e da lâmina para observação microscópica (que ainda depende do olho humano), diminuindo assim o tempo de preparo e o contato manual com a amostra. FE2 Series Workstation & Parasepâ Intestinal Parasite Concentrators/Maxifilter (DiaSys Corporation) Funcionamento do equipamento: com apenas um toque em um botão, em 5 segundos, o equipamento aspira, ressuspende o sedimento, cora e deixa a amostra pronta para análise. Como acessório, ele possui um Lâmina óptica para leitura das amostras preparadas, que é colocada no microscópico. Existem problemas na automação deste setor ???? ARTEFATOS FALSOS POSITIVOS (ALTA SENSIBILIDADE E POUCA ESPECIFICIDADE)
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