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Exames de Parasitoses Relação de Parasitoses e Pobreza As doenças parasitárias são relacionadas à pobreza, uma vez que elas geralmente ocorrem em países cujas condições de saneamento, acesso à boas condições de moradia e trabalho e promoção de saúde são ineficazes ou inexistentes. Além de serem deixadas de lado pelas grandes empresas de pesquisa e tratamento médico, devido à falta de retorno financeiro. Doenças Tropicais Negligenciadas (Parasitoses) Diagnósticos para Parasitoses - Métodos Parasitológicos: exames que demonstram a presença o parasita. - Métodos Imunológicos: exames que pesquisam antígenos do parasita. ou anticorpos produzidos frente à infecção. - Métodos Moleculares: Muito caro e pouco aplicado. Tipos de Parasitos - Helmintos - Protozoários - Doença de Chagas - Leishmaniose - Esquistossomose - Ascaridíase - Ancilostomose - Tricuríase - Teníase e Cisticercose - Filariose Linfática e Etc. Formas Encontradas Helmintos: Ovos e Larvas Protozoários: Oocistos, Cistos e Trofozoítos. Principais Parasitoses Intestinais do Brasil Protozoários: amebíase (Entamoeba hystolitica), giardíase (Giardia duodenalis), Criptosporidíase (Cryptosporidium spp.), ciclosporíase (Cyclospora spp.), isosporíase (Isospora spp.) Helmintos:esquistossomose (Schistossoma mansoni), fasciolíase (Fasciola hepática), teníase/cisticercose (Taenia spp.), ascaridíase (Ascaris lumbricoides), ancilostomose, enterobíase. (crianças são mais expostas às fontes de exposição, e, depois disso, provavelmente não vai se infectar novamente, devido à presença de resposta imune eficaz). Casos Particulares: - Enterobius vermiculares: Preferível o Swab Anal - Isospora belli - Cryptosporidium parvum - Cyclospora cayetanensis - Entamoeba coli - Endolimax nana Se junto com diarreia crônica em imunossuprimidos, pedir Pesquisa por Oportunistas. São comuns de encontrar e não apresentam riscos. Observação dos parasitas em suas formas encontradas nas fezes. Fatores que podem alterar o resultado A positividade do exame vai depender de diferentes fatores: Estágio da infecção (muitas vezes o teste dá negativo pois a infecção é muito primária, levando a um falso negativo); Eliminação intermitente de formas de resistência (não haverá liberação de formas parasitárias o tempo todo, o que pode causar um falso negativo); Intensidade do parasitismo (quanto maior for a carga parasitária, maior será a taxa no exame); Porção da amostra fecal analisada (muitas vezes os ovos/cistos não se distribuem de forma homogênea no material fecal, podendo levar a um falso negativo). Coleta do Material - Frasco limpo, seco e hermeticamente fechado após coleta. - Coleta em penico ou recipiente adequado e seco, qualquer horário do dia. - Evitar contaminação por urina, terra e água. - Quantidade de 10mL (colher de sopa). Conservação do Material - Encaminhar em até duas horas para laboratório. - Caso não seja possível, refrigerar as fezes líquidas por até 1 hora e as sólidas por até 24 horas. - Pode-se utilizar conservantes, como o formol. Sendo a proporção de 1:3. Processamento e Análise Exame Macroscópico - Feito com fezes frescas - Observação de cor e odor - Presença de sangue ou muco - Presença de proglotes ou vermes adultos - Observar consistência das fezes Exame Microscópico Direto - Lâmina + solução salina + fezes + lamínula (três vezes) - Baixa sensibilidade - Usado para procura de trofozoítos (Ameba e Giárdia) Se encontrado algo, pode-se corar para diferenciar parasitos! Coloração: útil para diferenciação de cistos, trofozoítos e larvas; ovos podem ser identificados sem corantes. Métodos de Concentração 1 – Flutuação (Willis-Mollay) - Empregam reagentes de densidade mais alta que ovos, oocistos e cistos, que por sua vez flutuam na superfície das soluções. - Observação de cistos, ovos leves e larvas. 2 – Sedimentação (Hoffman, Pons e Janer) - Sedimentação por gravidade ou por centrifugação, o que favorece a deposição das formas parasitárias - Observação de ovos pesados (Ascaris e Schistosoma) 3 – Termo-Hidrotropismo (Baermann-Moraes) e (Rugai) - Larvas tem tendência a ir para regiões mais quentes - As fezes precisam estar frescas - Observações de larvas na área aquecida 4 – Quantitativo (Kato-Katz) - Permite saber a quantidade - Recomendado pela OMS para diagnóstico da Esquistossomose e de Parasitoses transmitidas pelo solo 5 – Fita Gomada (Graham) - Feito com uma fita adesiva transparente - Coleta ao amanhecer, antes da higiene pessoal - Para diagnóstico da enterobíase (Enterobius vermicularis) Resultado Final O laudo deve apresentar: - Métodos executados - Observação sobre o número de amostras colhidas - Aspecto macroscópico das fezes - Achados patogênicos e não-patogênicos - Formas evolutivas encontradas - Nome científico dos parasitos encontrados Realizado quando não há perda de sangue evidente para o médico e há suspeita de doenças ligadas a isto. Doenças Relacionadas - Esofagite, - Úlceras pépticas, - Gastrite, - Doença intestinal inflamatória, - Ectasias vasculares, - Gastropatia hipertensiva porta, - Ectasias vasculares antrais gástricas, - Câncer colorretal, - Pólipos do sistema digestório, - Diverticulite e colite, - Doença de Crohn, - Traumatismos e diáteses hemorrágicas, - Amiloidose, - Hérnia de hiato, - Neurofibromatose, - Sarcoma de Kaposi - Hematobilia. Métodos de Análise Baseado em Guáiaco (PSOFg) precisa ser feita com três amostras colhidas em casa. - Necessário fazer dieta, evitando carne e alimentos que podem ser corados - Pode ser realizado com fezes conservadas Imunoensaios (FIT) - Não necessita de dietas restritivas - Precisa ser realizado logo após coleta - Não pode ser realizado com fezes conservadas - Mais específico para o sangue humano Orientações Comuns Evitar fármacos como corticoesteroides e AINEs Colher 3 amostras em horários alternados Observação dos parasitas presentes no sangue. Método a Fresco (Direto) - Sangue coletado no nódulo da orelha, punção da polpa digital ou punção venosa - Uso de Lâmina e Lamínula - Pesquisa de tripanossomos e microfilárias - Detecta forma e movimento - Alta sensibilidade em altas cargas parasitárias - Requer rápido processamento - Não permite detalhamento morfológico - Sensibilidade reduzida em baixas cargas parasitárias - Necessita de repetições por ser em pequenas amostras Esfregaço Delgado - Sangue coletado e gotejado na lâmina - Uso de corantes: Giemsa e Leishman - Usado em diagnósticos morfológicos - Alta especificidade - Baixa sensibilidade Esfregaço Espesso - Sangue coletado no nódulo da orelha, punção da polpa digital ou punção venosa - De 3 a 4 gotas na lâmina e unidas - Realização de desemoglobinização - Corantes: Giemsa ou Leishman - Padrão ouro para descoberta de Malária - Alta sensibilidade - Requer experiência do analista - Pouco tempo até a fixação de hemoglobinas Métodos de Concentração - Aumentam a sensibilidade - Principalmente para achar e tripanossomos e microfilárias quando ocultos nos métodos diretos Método de Strout - Mistura de sangue venoso, água destilada e solução salina - Centrifugação com hemólise - Sobrenadante de parasitas de hemácias Exame do Creme Leucocitário - Uso de 10mL de sangue venoso em tubo com anticoagulante - Centrifugações múltiplas para separação do plasma, creme leucocitário e eritrócitos Teste do Microhematócrito - Uso de tubo capilar - Centrifugação deste tubo - Usado para diagnóstico de Chagas Teste da Membrana Filtrante - Uso de membranasemipermeável - Ideal para encontrar microfilárias Métodos Indiretos Métodos mais usados em centro de pesquisas e de referência - Possuem alta especificidade - Maior sensibilidade - Permite identificar e isolar espécie - Alto custo - Alto risco de acidentes laboratoriais - Resultados são mais demorados Xenodiagnóstico Direto - Os triatomíneos são colocados em contato direto com a pele do paciente, e pode causar irritação local com máculas ou pápulas pruriginosas e, raramente, choque anafilático Xenodiagnóstico Indireto - O sangue venoso é colhido do paciente e colocado num artefato de látex - Em uma máquina com água quente e os triatomíneos - Triatomíneos entram em contato com o sangue no preservativo Hemocultura - De difícil aplicabilidade - Bom para detecção do T. cruzi e Leishmania Inoculação em Animais - Inocula o sangue em animais para pesquisa - Bom para detecção do T. cruzi e Leishmania Outros Exames Hemograma - Sinais sugestivos, como Eosinofilia, Pancitopenia e Anemias Imunoensaios - Verificação de parasitos e resposta imunológica - ELISA e Imunofluorecência Exames Moleculares (PCR) - Detecção dos Ácidos Nucleicos dos parasitas - Pouco usados por serem caros e de difícil manejo Doenças de Chagas Agente etiológico: Trypanosoma (Schizotrypanum) cruzi Fase Aguda - Até 30 Dias: Exame a fresco (também pode se utilizar os esfregaços, porém com menor sensibilidade) - Após 30 Dias: Métodos de concentração (Strout, Microhematócrito ou Creme leucocitário) Fase Crônica - Padrão-Ouro (Combinação de dois): Hemaglutinação Indireta (HAI) Reação de Imunofluorecência Indireta (RIFI) Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) - Pode-se usar também: Xenodiagnóstico (sens. 55%) Hemocultura (sens. 69%) Inoculação em camundongos Malária Agentes etiológicos: Plasmodium falciparum (BR), Plasmodium malariae, Plasmodium vivax (BR) e Plasmodium ovale Identificação - Padrão-Ouro: Esfregaço Espesso - Pode-se usar junto o Esfregaço Delgado Critérios para Diferenciação - Formas amebóides encontradas no interior das hemácias; - Características do núcleo, do protoplasma e pigmento constituem elementos essenciais nesse processo; - Tamanho e quantidade desses elementos; - Alterações produzidas no glóbulo parasitado. Método tradicional de avaliação semiquantitativa (em cruzes) Teste Rápido - Detectam antígenos específicos dos parasitos de malária humana, que estão presentes no sangue - Identifica a espécie de plasmódio Leishmaniose Visceral Agente etiológico no Brasil: Leishmania (Leishmania) infantum Diagnóstico Parasitológico Tipos de punção para esfregaço delgado corado pela técnica de Giemsa: - Punção aspirativa esplênica: 93-99% - Punção aspirativa de medula óssea: 53- 83% (Espécime clínico) - Biópsia hepática: 80% - Punção aspirativa de linfonodos: 53-65% Diagnóstico Sorológico - Anticorpos anti- Leishmania por reação de imunofluorescência indireta - Anticorpos anti-Leishmania por teste imunocromatográfico rápido (It-Leish ou OnSite Leishmania) Leishmaniose tegumentar americana Agente etiológico: Leishmania amazonenses Diagnóstico Parasitológico - Observação Direta a partir de escarificação, biópsia com impressão por aposição e punção aspirativa - Isolamento em cultivo in vitro: Cultivo da biópsia da borda da ulceração Diagnóstico Imunológico - Teste intradérmico (Intradermoreação de Montenegro ou da leishmanina) - Testes sorológicos (Pesquisas) Diagnósticos Moleculares - PCR (Pesquisas)
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