Determinação de Ácido Ascórbico (Vit-C) em suco de frutas por cromatografia liquida

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Relatório de Aula Prática
Determinação de Ácido Ascórbico (Vit-C) em suco de frutas por cromatografia liquida
Nome: Aline Kayser e Geórgia Silva Pinto
Turma: A
1- Objetivo: 
Determinar a concentração de Vitamina C em laranjas a partir da técnica de cromatografia liquida com uso de detectores de UV e de índice de refração.
2- Parte Experimental:
Balão Volumétrico de 25mL
Solução de KH2PO4 concentração de 0,01 molar e ph 2,6
Seringa
Filtro de Celulose 0,2 µm
Coluna: C18 (15 cm x 4,6 mm x 5 µm);
Detector: Ultravioleta no λ de 250 nm e Índice de Refração (RID) em série;
Fluxo: 1 mL min-1;
Temperatura da coluna: T ambiente;
Volume de injeção: 20 µL;
Laranja
3- Resultados: 
Graf.1: Curva de padrões das concentrações de ácido ascórbico em função das áreas medias dos picos obtidos no cromatograma do padrão
Tabela 1 – Concentração, tempo de retenção, áreas, médias, DPR(%) da Vit-C.
	Padrão Vit-C (µg mL-1 )
	Tempo de retenção (min)
	Área do pico (mAU)
	Média (mAU)
	DPR (%)
	5
	3,38
	1,838
	1,809
	
	
	3,38
	1,789
	
	
	
	3,39
	1,801
	
	
	10
	3,39
	4,551
	4,458
	
	
	3,33
	4,223
	
	
	
	3,35
	4,601
	
	
	50
	3,35
	20,825
	21,16
	
	
	3,35
	21,455
	
	
	
	3,36
	21,2
	
	
	75
	3,37
	33,985
	33,757
	
	
	3,38
	33,94
	
	
	
	3,3
	33,345
	
	
	100
	3,36
	48,565
	48,606
	
	
	3,34
	48,3
	
	
	
	3,33
	48,954
	
	
	
	
	
	
	
	AMOSTRA
	3,25
	1,541
	
	
1 - A partir da curva de calibração determine a concentração em g L-1 da Vitamina C na amostra analisada.
Equação da reta dos padrões y = 0,4805x - 1,1082
A amostra apresentou área de 1,541 
2 – Avalie a diferença de sinal entre os detectores de UV e RID
O RID é um detector universal, capaz de detectar qualquer molécula, visto que todas apresentam indíce de refração, no entanto, a concentração do analíto não pode ser baixa ou não será detectada/determinada (como o Acido Ascórbico).
O UV é um detector mais especifico e seletivo, visto que apenas analítos com espectro no UV visivel serão detectados, as concentrações podem ser mais baixas do que no RID, visto que o Acido Ascorbico pode ser determinado, apesar de sua baixa concentração.
4- Conclusão:
Foi possível determinar a concentração de Vitamina C em laranjas pelo uso da técnica de cromatografia liquida com detector de UV.