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DR. BRUNO JOSÉ MARTINS DA SILVA INSTRUMENTAÇÃO BIOMÉDICA Ananindeua- Pará 2024 HEMATOLOGIA • Função → Estudo do sangue, seus distúrbios e doenças Divisão Hematologia geral Aspecto da coagulação Imunohematologia COLETA → DICAS DE BIOSSEGURANÇA 1. Usar SEMPRE luvas descartáveis. 2. Ter cuidado no manuseio de seringas, agulhas e lancetas para evitar ferimentos. 3. Nunca re-encapar as agulhas. 4. Descartar seringas, agulhas e lancetas em recipientes específicos sem nunca reutilizá-las. 5. No caso de preparação de lâminas de sangue, manuseá-las da mesma maneira que as amostras de sangue até a fixação pelo metanol e coloração. Sangue Venoso Sangue venoso → Preferido para a maioria dos exames hematológicos Sangue CapilarX Sangue capilar → Satisfatório para alguns exames como: contagem de células, microhematócrito, tipagem sanguínea em lâmina e esfregaço sanguíneo, desde que se consiga fluxo espontâneo de sangue IMPORTANTE • Testes laboratoriais não podem fornecer informações enganadoras → Falsas interpretações podem levar a condutas médicas desnecessárias → Diagnóstico errado ANTICOAGULANTE • Qual usar? Fonte: http://www.biomedicinaonline.com.br/2015/08/tubos-para-coleta-de-sangue.html ANTICOAGULANTE • Tampa roxa → Exames hematológicos e pode conter EDTA-K2, EDTA-K3 ou EDTA 8% → Destinado a exames de hematologia, contagem de plaqueta, eletroforese de hemoglobina entre outros... • Tampa azul → Coagulograma, possui citrato trissódico 3,2 a 3,8% → Utilizado para realizar exames de tempo de atividade da protrombina, tempo de tromboplastina e antitrombina III Fonte: http://www.biomedicinaonline.com.br/2015/08/tubos-para-coleta-de-sangue.html EXAMES REALIZADOS NO SETOR DE HEMATOLOGIA • Hemograma • Coagulograma I e II (essa divisão não se aplica mais) • Teste de falcização • Contagem de reticulócitos • VHS HEMOGRAMA • Representa a avaliação quantitativa e qualitativa dos componentes celulares sanguíneos • Hemograma é compostos: • Eritrograma →Avalia a série vermelha • Leucograma →Avalia a série branca • Plaquetograma →Avalia a série plaquetária HEMOGRAMA AUTOMATIZADO • Permiti uma alta sensibilidade e precisão dos resultados - Contagem dos leucócitos - Contagem dos eritrócitos - Contagem das plaquetas - Índices hematimétricos → Volume corpuscular médio (V.C.M), hemoglobina corpuscular média (H.C.M), Concentração de hemoglobina corpuscular média (C.H.C.M) HEMOGRAMA AUTOMATIZADO • RDW / ( red blood cell distribution width = amplitude de distribuição dos eritrócitos) → Medida eletrônica do volume dos eritrócitos - É um índice que indica anisocitose - Valor normal → 11-14% - Acima de 14% → Indica excessiva heterogeneidade → Anisocitose RDW HEMOGRAMA- NÃO AUTOMATIZADO Fonte: http://pt.slideshare.net/priscilaoliveira3975/manual-de-hematologia-18585125 HEMOGRAMA- NÃO AUTOMATIZADO Fonte: http://pt.slideshare.net/priscilaoliveira3975/manual-de-hematologia-18585125 DETERMINAÇÃO DO GLOBAL Hemácias → Usar solução isotônica → Evitar lise Hemácias por µL de sangue = H.c. x 5 x 10 x 200 Fator de diluição – 1:200 → 4mL de líquido isotônico e 0,02 mL de sangue Conta-se 1/5 mm2 da câmara HEMOGRAMA- NÃO AUTOMATIZADO Fonte: http://pt.slideshare.net/priscilaoliveira3975/manual-de-hematologia-18585125 DETERMINAÇÃO DO GLOBAL Leucócitos → líquido de Turk (composto por ácido acético glacial e violeta genciana), que causa hemólise dos eritrócitos e facilita a visualização dos leucócitos Leucócito por µL de sangue = LC x 20 x 10 / 4 → Resultado x 50 → Leucócito global Fator de diluição – 1:20 → 0,4mL de líquido de turk e 0,02 mL de sangue HEMOGRAMA- NÃO AUTOMATIZADO Fonte: http://pt.slideshare.net/priscilaoliveira3975/manual-de-hematologia-18585125 NÃO CONFUNDA!!! A contagem global de leucócitos se refere à contagem de todos os leucócitos (total de leucócitos por mm3 de sangue) No esfregaço → Contagem diferencial de leucócitos → Divisão por subgrupos HEMOGRAMA- NÃO AUTOMATIZADO NÃO CONFUNDA!!! HEMOGRAMA- NÃO AUTOMATIZADO • Esfregaço sanguíneo →Visualização das células • Esfregaço → Teste rápido → Necessita de um profissional treinado • Policromatocitose → Não é detectada pela automação → Hemácias acinzentadas → está presente também após o 40 dia na regeneração pós-hemorrágica, sempre nas anemias hemolíticas COLORAÇÃO • Kit rápido Panótico - Panótico rápido n 1: compõe-se por uma solução de triarilmetano a 0,1% - Panótico rápido n 2: compõe-se por uma solução de xantenos a 0,1% - corante ácido - Panótico rápido n 3: compõe-se por uma solução de tiazinas a 0,1% - corante básico Fonte: http://www.interlabdist.com.br/dados/produtos/bula/doc/13764277764820b3e23b11e.pdf HEMOGRAMA- MANUAL • Visualização no microscópio Neutrófilo Eosinófilo Basófilo Monócito Linfócito Fonte: http://www.atlasdosangueperiferico.com.br/fotos.php ESFREGAÇO SANGUÍNEO – DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS PARASITÁRIAS MS, 2010 ESFREGAÇO SANGUÍNEO – DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS PARASITÁRIAS Fonte: http://limbicomcs.blogspot.com.br/2014/06/parasitologia.html COAGULOGRAMA • O coagulograma é um exame de triagem → Eficiente para análise do sistema de coagulação →Antes de cirurgias → Nível de coagulação do sangue • Para o exame é realizado uma série de testes que avaliam: - O tempo de sangramento (TS) - Retração do coágulo - Prova do laço (PL) - Tempo de coagulação (TC) - Tempo de protrombina (TP) - Tempo de ativação parcial da tromboplastina (TPPA) Coagulograma I Coagulograma II ATUALMENTE SE UTILIZA APENAS TP E TPPA TEMPO DE SANGRAMENTO (TS) • É indicado antes de cirurgias • Consiste em medir-se o tempo que o indivíduo leva para parar de sangrar através de uma perfuração, de dimensões padronizadas • Este teste fornece dados sobre a função e número de plaquetas • TS varia de 1-4 minutos Fonte: http://www.atlasdosangueperiferico.com.br/fotos.php RETRAÇÃO DO COÁGULO (RC) • Indicada antes de intervenções cirúrgicas • Normalmente → Após a coagulação completa do sangue, o coágulo começa a se retrair, descolando-se gradualmente das paredes do tubo e separando-se nitidamente do soro. A malha de fibrina se retrai pela ação da coesão das plaquetas. Um coágulo firme e bem retraído é sinal de número normal de plaquetas • É determinada pelo volume de soro obtido RETRAÇÃO DO COÁGULO (RC) • Valor normal de retração 45-55% PROVA DO LAÇO (PL) • O teste determina a fragilidade das paredes capilares e estima a tendência à hemorragia • Quando há alterações de permeabilidade capilar, há passagem de células sanguíneas para os tecidos, demonstrada pelo aparecimento de petéquias Fonte: https://br.pinterest.com/pin/368380444502370777/ COAGULOGRAMA • O coagulograma é um exame de triagem → Eficiente para análise do sistema de coagulação →Antes de cirurgias → Nível de coagulação do sangue • Para o exame é realizado uma série de testes que avaliam: - O tempo de sangramento (TS) - Retração do coágulo - Prova do laço (PL) - Tempo de coagulação (TC) - Tempo de protrombina (TP) - Tempo de ativação parcial da tromboplastina (TPPA) Coagulograma I Coagulograma II VIA DE COAGULAÇÃO VIA COMUM TEMPO DE COAGULAÇÃO (TC) • Corresponde a um teste clássico, solicitado, com frequência, entre os testes pré-operatórios →Avalia via intrínseca • Teste: - Colhe-se o sangue do paciente em tubo sem anticoagulante, incubando-o em banho-maria a 37ºC (temperatura corporal) → Espera-se que a coagulação ocorra em um tempo que varia de 5 a 10 minutos. O coágulo formado contém plaquetas, glóbulos vermelhos e rede de fibrina TEMPO DE PROTROMBINA (TP) • Avalia a via extrínseca da coagulação • Utiliza-se tubo de coleta de tampa azul → Citrato de sódio • Utiliza-se tubo de polipropileno ou siliconizado • Teste: - centrifuga-se o tubo de coleta e transfere-se apenas o plasma livre de plaquetas e de glóbulos vermelhos para outro tubo→ Add reagente do TP - fator tecidual (para iniciar a coagulação pela via extrínseca) e cálcio → Em um tempo de 11 a 14 segundos, observa-se a formação de um coágulo feito puramente de fibrina TEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ATIVADA (TTPA) • Avalia a via intrínseca e comum da coagulação • Teste: - Add os reagentes do TTPA: um substituto do fosfolípide plaquetário (o qual iniciará a coagulação pela via intrínseca) e cálcio → Em um tempo de 34 a 45 segundos DÍMERO D • Dímero D → são produzidos a partir da ação da plasmina sobre fragmentos de fibrina D de ligação cruzada → O seu surgimento indica que o mecanismo de coagulação foi ativado e que ocorreu formação de trombina • Marcador de fibrinólise → Marcador indireto da coagulação continuada DÍMERO D • Determinação por aglutinação em látex → Menos sensível → Detecta conjunto de coágulos → teste mais sensível e específico para o diagnóstico de coagulação intravascular disseminada (CIVD). • Determinação ultrasensível por elisa ou técnicas de imunoturbidimétricas → Mais sensível → Detecta um único coagulo (isolado → Quantificação do dímero D → trombose venosa profunda, embolia pulmonar, coagulação intravascular disseminada, insuficiência renal, hepática ou cardíaca, câncer disseminado TESTE DE FALCIZAÇÃO • Diagnóstico da anemia falciforme • Sob baixa tensão de oxigênio, os eritrócitos contendo hemoglobina S tomam a forma característica de foice, ou de meia-lua Fonte: http://www.ciencianews.com.br/index.php/publicacoes/casos- clinicos/casos-hematologicos/casos-hematologicos-caso-13/ TESTE DE FALCIZAÇÃO 1. Colocar em um tubo 50µl de sangue total + 100µl de solução fisiológica 0,9%, misturar por inversão, e adicionar 100µl de metabissulfito de sódio a 2%. Misturar por inversão 2. Colocar na lâmina de microscopia 10 a 20µl da mistura e espalhar por um espaço de 4 cm2 3. Cobrir a preparação com lamínula, e vedar os quatro lados com esmalte. Conservar a preparação em câmara úmida (placas de Petri com algodão embebido com água) 4. Examinar em microscópio com objetiva 10 ou 40x, após 1 hora, 3 horas, 6 horas, 12 horas e 24 horas. CONTAGEM DE RETICULÓCITOS • São precursores das hemácias • Aumento na circulação sanguínea → Várias complicações de saúde • Contêm no seu interior material reticular, provavelmente uma ribonucleoproteína que não apresenta afinidades pelos corantes comuns →Azul de cresil brilhante • 1. No tubo de hemólise colocar duas a 3 gotas da solução corante. Em seguida acrescentar 2 a 3 gotas do sangue colhido por punção venosa com anticoagulante. 2. Misturar e colocar em banho-maria durante 20 minutos. 3. Retirar do banho-maria. Misturar novamente e fazer esfregaços da maneira usual. 4. Secar e examinar ao microscópio sob imersão. RETICULÓCITOS (SETA) GRAFICO HEMOGRAMA IMUNOHEMATOLOGIA • Estudo dos antígenos presentes nas hemácias e eritrócitos Tipagem sanguínea Fator Rh Coombs direto • 1. Coombs indireto → O teste de antiglobulina indireta (Coombs) é utilizado para detectar anticorpos IgG contra os eritrócitos no soro de um paciente detecta imunoglobulinas IgG ou frações do complemento ligadas às hemácias, e faz parte da rotina de exames no pré – natal de gestantes Rh negativo, triagem de anemias hemolíticas e provas pré - transfusionais Slide 1 Slide 2: HEMATOLOGIA Slide 3: Coleta Dicas de biossegurança Slide 4 Slide 5: IMPORTANTE Slide 6: Anticoagulante Slide 7: Anticoagulante Slide 8: EXAMES REALIZADOS NO SETOR DE HEMATOLOGIA Slide 9: HEMOGRAMA Slide 10: HEMOGRAMA AUTOMATIZADO Slide 11: HEMOGRAMA AUTOMATIZADO Slide 12: RDW Slide 13: HEMOGRAMA- Não automatizado Slide 14: HEMOGRAMA- Não automatizado Slide 15: HEMOGRAMA- Não automatizado Slide 16: HEMOGRAMA- Não automatizado Slide 17: HEMOGRAMA- Não automatizado Slide 18: HEMOGRAMA- Não automatizado Slide 19 Slide 20 Slide 21: COLORAÇÃO Slide 22: HEMOGRAMA- Manual Slide 23: ESFREGAÇO SANGUÍNEO – Diagnóstico de doenças parasitárias Slide 24: ESFREGAÇO SANGUÍNEO – Diagnóstico de doenças parasitárias Slide 25: COAGULOGRAMA Slide 26: TEMPO DE SANGRAMENTO (TS) Slide 27: RETRAÇÃO DO COÁGULO (RC) Slide 28: RETRAÇÃO DO COÁGULO (RC) Slide 29: PROVA DO LAÇO (PL) Slide 30: COAGULOGRAMA Slide 31: VIA DE COAGULAÇÃO Slide 32: TEMPO DE COAGULAÇÃO (TC) Slide 33 Slide 34: TEMPO DE PROTROMBINA (TP) Slide 35: TEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ATIVADA (TTPA) Slide 36: DÍMERO D Slide 37: DÍMERO D Slide 38: TESTE DE FALCIZAÇÃO Slide 39: TESTE DE FALCIZAÇÃO Slide 40: CONTAGEM DE RETICULÓCITOS Slide 41 Slide 42: RETICULÓCITOS (SETA) Slide 43: GRAFICO HEMOGRAMA Slide 44: IMUNOHEMATOLOGIA Slide 45