Esfregaço sanguíneo, Colorações e hemograma

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04/07/2023
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ESFREGAÇO 
SANGUÍNEO E 
COLORAÇÕES
http://www.histologyguide.com/figure-view/fig-027-
hematopoiesis/08-figure-1.html
https://pathology.med.umich.edu/slides/dirView.php?p
ath=/Medical%20Education/M2%20Pathology/Hemato
pathology
O esfregaço de sangue, também conhecido como 
extensão sanguínea, é um teste realizado em 
hematologia para a contagem e a identificação de 
anormalidades nas células do sangue.
Um esfregaço de sangue pode fornecer 
informações importantes sobre o paciente, 
auxiliando o médico no diagnóstico de doenças 
relacionadas ao sangue, por exemplo as anemias, e 
outras condições médicas, tais como infecções
1.Apoiar a lâmina de microscopia, já com a identificação do paciente, sobre uma superfície limpa. 
Certificar-se de que a lâmina tem boa qualidade e não está suja ou possui vestígios de gordura, o que 
pode prejudicar o teste.
2.Colocar uma pequena gota de sangue próxima a uma das extremidades da lâmina.
3. Com o auxílio de outra lâmina, colocar a gota de sangue em contato com sua borda. Para isso a 
lâmina extensora deve fazer um movimento para trás tocando a gota com o dorso em um ângulo 45°.
4.O sangue da gota irá se espalhar pela borda da lâmina extensora por capilaridade.
5.A lâmina deve então deslizar suave e uniformemente sobre a outra, em direção oposta a 
extremidade em que está a gota de sangue. O sangue será “puxado” pela lâmina.
6.Depois de completamente estendido, o sangue forma uma película sobre a lâmina de vidro.
7.Deve-se deixar que o esfregaço seque sem nenhuma interferência.
8.Seguir para o passo de coloração.
PROCEDIMENTO https://www.youtube.com/watch?v=wqvrP2gb5XI
Esfregaço Sanguíneo
O esfregaço de sangue é usado 
para fazer uma diferenciação 
entre os leucócitos, isto é, fazer 
uma contagem do número de 
neutrófilos, linfócitos, monócitos, 
eosinófilos e basófilos. 
Chegando-se a uma 
porcentagem de cada célula 
encontrada. 
Usado também para avaliar a 
série vermelha e as plaquetas.
1.Cabeça da lâmina: região imediatamente 
após o local em que estava a gota sanguínea. 
Nessa região, com frequência, há aumento do 
número de leucócitos (principalmente de 
linfócitos).
2.Corpo da lâmina: região intermediária entre 
cabeça e cauda. É nessa região que os 
leucócitos, hemácias e plaquetas estão 
distribuídas de forma mais homogênea. É a área 
de escolha para a análise qualitativa e 
quantitativa da distensão sanguínea.
3.Cauda da lâmina: região final da distensão 
sanguínea. Nessa região, há encontro de alguns 
esferócitos e elevação de monócitos e 
granulócitos, que podem apresentar maior 
distorção morfológica.
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http://www.histologyguide.com/figure-view/fig-027-hematopoiesis/08-figure-1.html
http://www.histologyguide.com/figure-view/fig-027-hematopoiesis/08-figure-1.html
https://pathology.med.umich.edu/slides/dirView.php?path=/Medical%20Education/M2%20Pathology/Hematopathology
https://pathology.med.umich.edu/slides/dirView.php?path=/Medical%20Education/M2%20Pathology/Hematopathology
https://pathology.med.umich.edu/slides/dirView.php?path=/Medical%20Education/M2%20Pathology/Hematopathology
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Semestre letivo 2020.2
A vantagem de se fazer um hemograma é que 
algumas células podem ser contadas 
erradamente pelos processos automáticos.
Alguns aparelhos não contam células imaturas 
e podem levar a um erro quanto a um 
diagnóstico de leucemia. 
O esfregaço, porém, deve ser avaliado por 
pessoal experiente
Após a técnica de esfregaço
sanguíneo é utilizado
CORANTES para corar
células sanguíneas.
Existem muitas variações
como a coloração:
Panótico Rápido:
https: //www.youtube.com/watch?v=V
AjxXkRcp58
Leishman, Giemsa .
Cada corante possui características químicas e afinidades 
diferenciadas. Assim, quando uma estrutura se cora, revelando a 
mesma cor do corante, diz-se que é uma coloração ortocromática e 
quando a estrutura toma uma cor diferente daquela do corante, diz-se 
que é uma coloração metacromática.
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Coloração de Leishman O corante de Leishmann, é usado em microscopia 
para colorir esfregaços de sangue.
 É um sistema para coloração de células em esfregaço 
de sangue periférico, medula óssea ou para estudo 
citológico de elementos celulares colhidos por 
punção, raspagem ou concentrados celulares de 
derrames cavitários. 
Geralmente é usado para diferenciar e identificar 
leucócitos, parasitas da malária e tripanossomas
PROCEDIMENTO TÉCNICO 
a- Fazer os esfregaços e secar em temperatura ambiente 
b- Cobrir as lâminas com 7-10 gotas do corante;
c- Deixar agir por 3 minutos; 
d- Adicionar duas vezes o volume água destilada sobre a 
lâmina e misturar com o corante
e- Corar durante 10 a 12 minutos; 
f- Escorrer e lavar em água corrente; 
g- Secar as lâminas em posição vertical;
h- Observar ao microscópio.
Uma coloração de Leishman mostrando o estádio 
esquizonte do parasita da malária Plasmodium vivax
https://www.youtube.com/watch?
v=mwAWVi3Nhf8
Coloração de Giemsa O corante de Giemsa é um tipo de coloração de 
amostras clínicas, com base na mistura de 
corantes ácidos e básicos
A. Trypanosoma evansi no sangue periférico. B. Células 
sanguíneas normais. C. Borrelia theileri no sangue 
periférico. D. Linfoma de Burkitt
A técnica é muito útil para estudos citológicos, pois 
permite a observação de estruturas celulares 
específicas. Essa técnica mancha os citoplasmas, 
núcleos, nucléolos, vacúolos e grânulos das células, 
sendo capaz de distinguir traços finos de cromatina. 
Também é possível detectar hemoparasitas, 
bactérias extras e intracelulares, fungos, entre 
outros.
PROCEDIMENTO TÉCNICO 
a- Fazer os esfregaços e secar em temperatura ambiente b- 
Em tubo de ensaio, misturar 3 gotas do corante Giemsa para 
cada 2 mL de água (Guardar).
c- Cobrir o esfregaço com álcool metílico por 2 minutos. 
d- Escorrer o álcool metílico sem lavar, cobrir a lamina com a 
mistura de Giemsa.
e- Corar durante 10 minutos; 
f- Escorrer e lavar em água corrente; 
g- Secar as lâminas em posição vertical;
h- Observar ao microscópio.
https://www.youtube.com/watch?v=
YqbVP1m3hog
Solução de Turk
Uma amostra de sangue é diluída (1/20) com líquido de Turk, composto por ácido acético (lisa as hemácias) e 
azul de metileno ou violeta de genciana (cora os leucócitos).
Ela faz parte do hemograma, mais especificamente do leucograma, composto também pela contagem 
diferencial de leucócitos e avaliação da extensão sanguínea
Após um período de incubação, a diluição é pipetada em Câmara de Neubauer e a contagem é feita no 
microscópio (objetiva de 10x ou 40x)
Leucócitos/μL = (leucócitos contados x 
fator da diluição x 104) ÷ 4
O valor normal geralmente varia entre 
4.000 e 10.000 leucócitos por microlitro de 
sangue (/μL).
https://www.youtube.com/watch?v=_LEain56y8A
• Hemácias/μL = (hemácias contados x fator da diluição x 
104)
• O valor normal geralmente varia entre 4 a 5,5 milhões 
hemácias/mm3.
• Contagem em Câmera de Neubauer no microscópio na 
objetiva de 10X ou 40X.
Contagem de Hemácias - Solução de Hayen
Utilizado para contagem de hemácias:
➢ Solução de Hayen (preserva morfologia das hemácias):
• Bicloreto de mercúrio;
• Cloreto de sódio;
• Sulfato de sódio;
• Água destilada.
➢ Procedimento técnico:
• Diluir a amostra de sangue 1/200 (4 mL + 20 uL).
Área de 
contagem 
de 
hemácias.
Reticulócitos - Azul de Cresil Brilhante
O azul de cresil brilhante cora os restos de RNA associados aos 
ribossomos, que aparecem como filamentos ou ramos azuis. 
Procedimento técnico:
1. Em tubo de ensaio, pipetar 
100 uL de sangue total 
para 50 uL do corante;
2. Incubar a 37ºC por 15-30 
min;
3. Realizar o esfregaço;
4. Contar 10 campos com 
2000 hemácias ou 5 
campos com 1000 
hemácias.
Cálculo por regra de 3:
1000 hemácias ------------- 10 reticulócitos
4.500.000 hemácias -------- X reticulócitos
X = 45.000
4.500.000 células---------------- 100%
45.000 células -------------------- X%
X = 1% (VR = 0,5 a 2%)
Fonte: https://labpratica.com.br/2019/04/17/interpretacao-clinica-e-valor-diagnostico-dos-reticulocitos/Esfregaço sanguíneo corado com azul de 
cresil brilhante para contagem de 
reticulócitos (hemácias mais jovens)
COMO FAZER CONTAGEM
GLOBAL DE:
ERITRÓCITOS/LEUCÓCITOS/
PLAQUETAS, HEMATÓCRITO?
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https://www.biomedicinapadrao.com.br/2016/12/5-dicas-para-fazer-um-esfregaco.html
https://www.biomedicinapadrao.com.br/2013/10/conhecendo-camara-de-neubauer.html
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Tubo roxo - usados em análises hematológicas.
EDTA como anticoagulante, função quelante e
retirar íons cálcio (Ca2+), parando a cascata
de coagulação.
Tubo para Coleta do Hemograma
ERITROGRAMA
Contagem global de eritrócitos
Hematócrito 
Dosagem de hemoglobina 
Índices hematimétricos (HCM, VCM, CHCM, RDW)
Velocidade de hemossedimentação
SÉRIE VERMELHA
. Contagem global de eritrócitos
Objetivo: diagnóstico diferencial e seguimento das anemias, 
poliglobulias e outros (hemorragias, sobrecarga de líquidos...)
Manual é só para confirmação do automático.
Eritrócito: produzidos na M.O.; Vida de 90-120 dias; Carregam 
hemoglobina (Hb) no sangue.
Presentes em número de 500 x mais que os glóbulos brancos (meia vida 
mais longa).
Resultado: abaixo do normal, chama-se eritropenia, e acima, 
eritrocitose.
VR: 4,5 a 6,0 milhões/mm3
Hemograma
O hemograma é o nome dado ao conjunto de avaliações das células do sangue
que, reunido aos dados c línicos, que indica ao medico exames complementares
para fechar um diagnósticas.
O hemograma é composto por três determinações básicas que incluem as avaliações 
dos eritrócitos (ou série vermelha), dos leucócitos (ou série branca) e das plaquetas 
(ou série plaquetária). 
Para a série vermelha a automatização fornece o índice RDW que avalia a amplitude da superfície dos 
eritrócitos 
Os três primeiros dados, contagem de 
hemácias, hemoglobina e hematócrito, são 
analisados em conjunto. Quando estão 
reduzidos, indicam anemia
Dosagem da Hemoglobina: a dosagem da 
hemoglobina é feita após a lise dos eritrócitos e 
estabilização da hemoglobina. Em seguida é realizada a 
leitura colorimétrica (cianometa-hemoglobina) pela 
densidade óptica medida em espectrofotômetro
Hemoglobina e hematócrito, são analisados em conjunto. Quando estão reduzidos, indicam anemia, isto é, 
baixo número de glóbulos vermelhos no sangue. Quando estão elevados indicam policitemia, que é o 
excesso de hemácias circulantes.
Hemoglobina e hematócrito
Valores de refereência:
Crianças de 6 a 12 anos: 11,5 a 15,5 g/dL; Homens: 14 a 18 g/dL; Mulheres: 12 a 16 g/dL
https://www.youtube.com/watch?v=j2tVk-POEps
Hematócri to é o percentual do
sangue que é ocupado pelas
hemácias (mede % 
hemácias/amostra de sangue 
circulante).
Um hematócr ito de 45%
signif ica que 45% do sangue é
compostos por hemácias .
Os outros 55% são basicamente
água e todas as outras
substâncias diluídas.
Usado para calcular VCM e CHCM
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Microhematócrito
✓ Aumento de Eritrócitos:
• Policitemias.
✓ Redução de plasma 
(hemoconcentração):
• Diarreia;
• Desidratação.
↑ Aumento
✓ Redução de eritrócitos:
• Anemias.
✓ Aumento de plasma 
(hemodiluição):
• Gravidez;
• Insuficiência renal.
↓ Diminuição
Série Vermelha - Hematócrito
O volume globular médio (VGM) ou volume corpuscular médio (VCM), mede o 
tamanho das hemácias.
PROPAGANDA COMERCIAL
Um VCM elevado indica hemácias macrocíticas, ou seja, hemácias grandes. VCM 
reduzidos indicam hemácias microcíticas, isto é, de tamanho diminuído. Esse dado 
ajuda a diferenciar os vários tipos de anemia.
Por exemplo, anemias por carência de ácido fólico cursam com hemácias grandes, 
enquanto que anemias por falta de ferro se apresentam com hemácias pequenas.
Valores de Referência:
VCM é entre 80 e 100 fl
Volume globular médio (VGM)
Microcíticas Macrocíticas
VCM - Alterações
Normocíticas
✓Anemia megaloblástica;
✓Anemia perniciosa.
↑ Macrocitose
✓Anemia ferropriva;
✓Alguns tipos de 
talassemia.
↓ Microcitose
VCM - Interpretação
VR: entre 80 e 100 fL (finolitrons); crianças 75 e 80 fL.
VCM = Ht x 10
 nº hemácias (em milhões)
Obs: Resultado: discreta ou extensa micro ou macrocitose.
CHCM (concentração de hemoglobina corpuscular média) ou CHGM 
(concentração de hemoglobina globular média) avalia a concentração de 
hemoglobina dentro da hemácia.
HCM (hemoglobina corpuscular média) ou HGM (hemoglobina globular 
média) é o peso da hemoglobina dentro das hemácias
Os dois valores indicam basicamente a mesma coisa, a quantidade de 
hemoglobina nas hemácias. Quando as hemácias têm poucas hemoglobinas, 
elas são ditas hipocrômicas. Quando têm muitas, são hipercrômicas.
Valores de Referência:
CHCM e HCM
HCM 27.0 a 32.0 pg
CHCM 31.0 a 36.0 g/dL
Classifica as anemias em HIPOCRÔMICAS e 
HIPERCRÔMICAS;
CHCM = Hb (g/dL) x 100 (%)
 Ht (%)
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Portanto:
HCM é a quantidade de Hb na hemácia (nº absoluto); 
CHCM é o quanto da hemácia está preenchida por Hb (dos 100%, X% são 
Hb).
No manual é mais confiável do que o HCM pois não tem relação com a contagem 
de er itrócitos (=maior variação) 
Macrocítica
Normocítica
Massa de Hb (HCM)= 29 pg
% Saturação (CHCM) = 32%
Massa de Hb (HCM)= 47 pg
% Saturação (CHCM) = 32% Hipocrômicas Hipercrômicas
Índices Hematimétricos – HCM e CHCM
Normocrômicas
1 – Contagem total de leucócitos (CTL) : 103 /mm3 
2 – Contagem diferencial de leucócitos (CDL) 
Neutrófilos (Bastonetes e Segmentados) : % e 103 /mm3 
Eosinófilos : % e 103 /mm3 
Basófilos : % e 103 /mm3 
Linfócitos : % e 103 /mm3 
Monócitos : % e 103 /mm3 
A contagem diferencial de cada leucócito é emitida em % (ou valor relativo) e em
103 /mm3 (ou valor absoluto). O valor absoluto tem melhor expressão diagnóstica
em relação ao valor relativo.
A série branca, é analisada por meio dos 
seguintes índices: 
✓ Contagem total/global de leucócitos;
✓ Contagem diferencial de leucócitos:
• Número absoluto;
• Número relativo.
Série - Branca
45,5 – 73,5%0 – 4,4% 0 – 1% 2 – 10% 20,3 – 47%
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Valores da série Branca
O valor normal dos leucóci tos varia entre 4.000 a 11.000 células por 
micro l i t ro (ou mi l ímetros cúbicos).
Quando os leucóci tos estão aumentados, damos o nome de leucocitose . 
Quando estão diminuídos chamamos de leucopenia .
Grandes elevações podem ocorrer nas leucemias, que nada mais é que o 
câncer dos leucóci tos. Enquanto processos infecciosos podem elevar os
leucóci tos até 20.000-30.000 células /mm3, na leucemia, esses valores
ul trapassam faci lmente as 50.000 cel /mm3.
As leucopenias normalmente ocorrem por lesões na medula óssea. Podem
ser por quimioterapia, por drogas, por invasão de células cancerígenas ou
por invasão por micro-organismos.
✓ Processos infecciosos;
✓ Leucemias.
↑ Leucocitose
✓ Lesões na medula óssea:
• Quimioterapia;
• Câncer;
• Infecções.
✓ Baixa imunidade:
• Desnutrição.
↓ Leucopenia
Leucograma - Interpretação
As plaquetas são analisadas quantitativamente (CP: 103 /mm3 ) e com uso de contadores 
automatizados é possível obter o índice PDW (%) que fornece o resultado da amplitude da 
superfície das plaquetas quantificadas, bem como o MPV (fm3 ) que indica o volume 
médio plaquetário
As plaquetas são produzidas na medula óssea e derivam da fragmentação do citoplasma 
dos megacariócitos. Tem forma discóide, são anucleares e estão presentes no sangue em 
quantidades variáveis entre 140 e 450 x 103 /mm3
Plaquetas
✓ Ou Hiperplaquetose;
✓ Exemplos-associações:
• Trombose.
✓ Causas:
• ↑ produção.
↑ Trombocitose
✓Ou Plaquetopenia;
✓Exemplos-associações:
• Hemorragias.
✓ Causas:
• ↓ produção, insuficiente, 
↑ destruição.
↓ Trombocitopenia
Plaquetograma - Interpretação
CONTAGEM: CÂMARA DE NEUBAUER
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A
E1 E2
E3 E4
E5
 
B
 
C
 
D
 
E
Leucograma: ler A,B, C e D
Eritrograma: ler E (E1, E2, E3, E4 e E5)
Contagem de glóbulos Vermelhos
Procedimento:Pipetar 3980 μL sol. diluente de Gower* em um tubo de ensaio;
Pipetar r igorosamente 20 μL de sangue e transferir para o tubo com diluente 
(dil. 1/200)
Homogeneizar delicadamente por 2 minutos; (agita delicadamente)
Transfer ir para câmara de Neubauer; 
Aguardar ~ 3 minutos e contar. 
A contagem deve ser feita no reticulo E. Contam-se 5 quadradinhos: 4 das 
extremidades e 1 central. (o aumento utilizado é o de 400x)
Volume do poço
Procedimento:
Pipetar 380 μL sol. de Turk em tubo de ensaio.
P ipetar r igorosamente 20 μL de sangue e transferir para o tubo com o diluente (dil. 
1/20);
Homogeneizar, invertendo-o delicadamente por 2 minutos;
Aguardar ~ 3 minutos e contar;
Contar todas as células dos quadrados A,B,C,D (aumento de 100x)
 
Contagem de glóbulos Brancos
Volume do poço
Contagem de plaquetas
Procedimento:
Pipetar 20 microlitros de sangue e diluir essa quant idade em 4,0 mL de líquido 
diluidor* (diluição 1:200);
Homogeneizar cuidadosamente;
Carregar a câmara de contagem, colocá-la em câmara úmida para evitar a evaporação 
(sobre um papel de filt ro molhado, cobrir a placa de Petri). Esperar 10 minutos para 
que as plaquetas se depositem.
Contagem: contar as plaquetas em 80 quadrantes (5 quadrados da divisão de 
eritrócitos) x 10.000 .
* C itrato de sód io…………………………………………. 3,8 g
Formo l a 40% ( fo rmalina)…………………………… 0,2ml
Azul de C resil Brilhante……………………………… 0,1g
Água destilada…………………………………………… 100ml
Contagem de plaquetas
Procedimento pela técnica de Fônio:
Feito a partir do esfregaço sanguíneo corado com panóptico;
Contar 1000 eritrócitos em diferentes campos, anotando o número de plaquetas 
encontradas.
Cálculo: nº de plaquetas X nº de eritrócitos por mm3 (total)= número de plaquetas 
por mm3 de sangue
https://www.youtube.com/watch?v=7EMLQV9P6SQ
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https://www.youtube.com/watch?v=7EMLQV9P6SQ
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Resultado de 
hemograma – 
Pessoa Saudável 
DÚVIDAS?
http://www.histologyguide.com/slidebox/sli
debox.html
VISITEM O SITE 
DE HISTOLOGIA SANGUÍNEA
HEMATOPOIESE
Resultado de exame
Mulher
Resultado de exame
Mulher gestante
Resultado de exame
Mulher
Resultado de exame
Homem
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AULA PRÁTICA DE HEMATOLOGIA: ÍNDICES HEMATIMÉTRICOS 
RDA, sexo feminino, 21 anos, chega ao hospital com cianose, palidez de pele e mucosas e fadiga intensa. 
Paciente apresenta 1,63 cm e 49 kg após dieta de restrição calórica para perda de peso (sem orientação 
nutricional). Relata que há 15 dias teve uma infecção de urina e foi tratada com antibiótico. Depois do 
tratamento não teve mais ardência ao urinar ou qualquer outro sintoma.
Realizados os exames laboratoriais, nos bioquímicos houve apenas leve aumento de ASL e ALT.
Os resultados dos exames hematológicos estão listados abaixo e os valores de referência estão entre 
parênteses:
- Hb = 11 g/dL (13 a 16)
- Ht = 37% (38 a 50)
- Contagem de eritrócitos (CE) = 4,2 milhões/mm3 (4,5 a 6,0)
Calcule os índices hematimétricos (VCM, HCM e CHCM). Após o cálculo, discuta as principais alterações 
(o que significam) e suas possíveis consequências em duas situações possíveis: 1ª) com RDW de 12% e 
2ª) com RDW de 18% (VR 11 a 14%).
VCM = Ht (37) / CE (4,2) = 88 fL - - (VR: 80 a 100) - - normocitose
HCM = Hb (11) / CE (4,2) x 10 = 26,2 pg - - (VR: 27 a 32) - - hipocromia
CHCM = Hb (11) / Ht (37) = 29,7 % - - (VR: 31 a 36) - - < 31: sugestivo para Anemia ferropriva; talassemias, 
hemolíticas; > 36: Esferocitose (hereditária ou adquirida); doença falciforme e hemoglobinopatia C.
Com um RDW normal é indício de normocitose, o que pode indicar uma anemia hemolítica por antibiótico; Com 
RDW alto pode indicar micro e macrocitose, podendo indicar desnutrição (falta de ferro causando microcitose e 
vitamina B12 causando macrocitose).
Resposta:
Vamos praticar!!!!
1. Entrar no site: http://www.histologyguide.com/slidebox/slidebox.html
2. Selecionar Sangue periférico e visualizar as laminas e células
3. Explique as funções e características de cada célula
Hemácia
Linfócito
http://www.histologyguide.com/EM-view/EM-227-blood-cells/07-photo-1.html?x=0&y=0&z=-1&page=1
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http://www.histologyguide.com/slidebox/slidebox.html
	Slide 1: Esfregaço sanguíneo e Colorações
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	Slide 25: Microhematócrito
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	Slide 31: Portanto:
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	Slide 44: Contagem de glóbulos Vermelhos
	Slide 45
	Slide 46: Contagem de plaquetas
	Slide 47: Contagem de plaquetas
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