PCR e extracao de DNA

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PCR e extração 
de DNA Sara Vasconcelos 
• Etapas da Extração de DNA da Mucosa Oral: 
1. Coleta da Amostra: 
—> Utiliza-se um swab estéril (cotonete) para raspar o interior da bochecha (mucosa oral) por cerca de 30 
segundos em movimentos circulares.
Em alguns casos, usa-se enxágue bucal com solução salina ou água destilada estéril para coletar células.
2. Armazenamento (opcional): 
—> O swab pode ser armazenado em um tubo estéril, seco ou com tampão específico (como PBS ou tampão TE), até 
o momento da extração.
3. Lise Celular: 
—> As células coletadas são incubadas com um tampão de lise contendo detergente (como SDS) e, geralmente, 
uma enzima proteolítica (ex: proteinase K) para romper as membranas celulares e liberar o DNA.
4. Remoção de Proteínas e Contaminantes: 
—> Adiciona-se uma solução (como fenol-clorofórmio) ou usa-se kits com colunas de sílica para separar o DNA 
das proteínas e outros contaminantes celulares.
5. Precipitação do DNA: 
—> O DNA é precipitado com etanol ou isopropanol frio e sal (geralmente acetato de sódio ou cloreto de sódio).
—> Após centrifugação, forma-se um pelote de DNA no fundo do tubo.
6. Lavagem: 
—-> O pelote de DNA é lavado com etanol 70% para remover impurezas residuais.
7. Ressuspensão: 
—-> O DNA purificado é dissolvido em água estéril ou tampão TE (Tris-EDTA).
8. Armazenamento: 
—> O DNA extraído pode ser armazenado a -20°C ou -80°C para uso posterior.
• Etapas básicas da PCR:
A reação em cadeia da polimerase (PCR – Polymerase Chain Reaction) é uma técnica de biologia molecular usada 
para amplificar sequências específicas de DNA. Em poucas horas, ela pode produzir milhões de cópias de um 
fragmento específico de DNA a partir de uma quantidade muito pequena.
—> Desnaturação (94–98°C): O DNA de fita dupla é aquecido para se separar em duas fitas simples.
—> Anelamento (50–65°C): Ocorre o resfriamento para permitir que os primers (sequências curtas de DNA) se 
liguem às regiões complementares da fita molde.
—> Extensão (72°C): A enzima Taq polimerase adiciona nucleotídeos à fita molde a partir dos primers, 
sintetizando novas fitas de DNA.
—> Essas etapas são repetidas por 25–40 ciclos, dobrando a quantidade de DNA a cada ciclo.
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• Questões: 
1. Qual é a principal enzima utilizada na reação de PCR?
A) RNA polimerase
B) DNA helicase
C) Taq DNA polimerase
D) Transcriptase reversa
E) DNA ligase
2. A coleta de DNA da mucosa bucal é considerada vantajosa por:
A) Requerer jejum prolongado
B) Ser altamente invasiva
C) Permitir obtenção rápida e não invasiva de material genético
D) Exigir anestesia local
E) Ser mais precisa que a coleta de sangue
3. Durante a PCR, a etapa de desnaturação ocorre para: 
A) Ligar os primers ao DNA molde
B) Inativar enzimas contaminantes
C) Separar as fitas duplas de DNA
D) Iniciar a transcrição gênica
E) Ativar os íons magnésio
4. Os primers na PCR têm a função de:
A) Inibir a replicação do DNA
B) Formar ligações cruzadas no DNA
C) Determinar o segmento específico a ser amplificado
D) Cortar o DNA em fragmentos menores
E) Catalisar a síntese de DNA
5. O sucesso da extração de DNA da mucosa bucal depende de:
A) Alta concentração de glicose no meio
B) Temperatura ambiente elevada
C) Coleta adequada de células epiteliais e uso de detergente para lise celular
D) Uso de RNA como molde
E) Digestão do DNA com proteases
6.Na PCR, a etapa de extensão ocorre tipicamente a:
A) 94 ºC
B) 50 ºC
C) 37 ºC
D) 72 ºC
E) 25 ºC
7. Qual dos seguintes reagentes não é essencial para a reação de PCR?
A) DNA molde
B) Taq polimerase
C) Dideoxinucleotídeos (ddNTPs)
D) Primers específicos
E) dNTPs
8. A principal limitação da extração de DNA pela mucosa bucal em ambientes clínicos é:
A) Alto risco de contaminação com DNA bacteriano
B) Incapacidade de obter DNA genômico
C) Necessidade de centrifugação a vácuo
D) Risco aumentado de mutações
E) Inexistência de material genético em células da mucosa
9. A Taq polimerase é derivada de um microrganismo adaptado a:
A) Ambientes frios
B) Altas pressões
C) Ambientes hipersalinos
D) Altas temperaturas
E) Ambientes anaeróbios
10. O objetivo final da PCR em estudos clínicos é:
A) Produzir proteínas recombinantes
B) Inibir genes específicos
C) Amplificar sequências específicas de DNA para diagnóstico molecular
D) Realizar transfecção genética
E) Converter DNA em RNA para terapia gênica
• Respostas: 
1. C
2. C
3. C
4. C
5. C
6. D
7. C
8. A
9. D
10. C