imunologia

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1. Ensaios de Imunofluorescência (IFA) Usam anticorpos (AC) ou antígenos (AG) marcados com fluorocromos moléculas que emitem luz colorida quando expostas à luz ultravioleta (U.V.). A fluorescência indica a presença do antígeno ou anticorpo procurado. Direto Amostra: tecido ou célula do paciente. Adiciona-se anticorpo primário (já marcado com fluorocromo). Se tecido tiver antígeno, ele se liga aparece fluorescência. Detecta antígenos. Indireto antígeno é fixado numa lâmina. Adiciona-se soro do paciente (que pode conter anticorpos). Depois, entra um anticorpo secundário marcado com fluorocromo (que se liga ao anticorpo do paciente). A fluorescência mostra que paciente tem aquele anticorpo. Detecta anticorpos. 2. ELISA (Ensaio Imunoenzimático) Usa enzimas ligadas a anticorpos ou antígenos. Se houver reação antígeno-anticorpo, enzima atua sobre um substrato e gera cor. Cada passo precisa de lavagem e incubação para evitarfalsos resultado é medido por espectrofotômetro (intensidade da cor = quantidade). ELISA Direto Poço com amostra do paciente (antígeno). Adiciona-se anticorpo primário marcado com enzima. Substrato gera cor se antígeno estiver presente. Detecta antígenos. ELISA Indireto Poço com antígeno fixado. Adiciona-se soro do paciente (anticorpos). Depois, anticorpo secundário com enzima. Substrato cor = presença do anticorpo. Detecta anticorpos. ELISA Sanduíche Poço com anticorpo primário fixo. Adiciona-se amostra do paciente (antígeno). Depois, anticorpo secundário com enzima. Substrato cor = presença do antígeno. Detecta antígenos, usado em diagnósticos quantitativos. ELISA de Competição Poço com anticorpo fixo. Coloca-se antígeno do paciente + antígeno marcado com enzima. Eles competem para se ligar. Mais antígeno do paciente = menos cor (porque impede marcado de se ligar). Detecta antígenos em baixas concentrações. 3. Western Blot (teste confirmatório, ex: HIV)Etapas: Eletroforese separa as proteínas virais. Elas são transferidas para uma membrana (nitrocelulose). Bloqueia-se com proteína inerte para evitar ligações inespecíficas. Adiciona-se soro do paciente (anticorpos). Depois, anticorpo secundário com enzima + substrato cor aparece nas bandas específicas. Resultado positivo: surgem bandas coloridas que indicam anticorpos contra proteínas virais específicas. 4. Testes Imunocromatográficos (Testes Rápidos) Testes qualitativos (positivo/negativo). A amostra (soro, sangue, saliva, urina) migra por capilaridade em uma fita. Se houver antígeno ou anticorpo, forma-se um complexo colorido (linha de teste). Há sempre uma linha de controle positivo. Exemplo: testes rápidos de gravidez, HIV, COVID-19. 5. Testes de Aglutinação Baseados na formação de aglomerados (grumos) pela reação entre antígeno e anticorpo. Direta Usa partículas naturais (bactérias, fungos, hemácias). Detecta anticorpos específicos. Indireta (ou passiva) Usa partículas artificiais (látex, hemácias tratadas). Detecta antígenos ou anticorpos ao adicionarreagentes específicos. 6. Hemaglutinação Usa hemácias (glóbulos vermelhos) como base. Se houver antígeno ou anticorpo compatível, forma-se um tapete (reação positiva) Se não houver reação, as hemácias formam um botão no fundo. Muito usada em tipagem sanguínea e alguns testes virais. 7. Imuno-histoquímica (IHQ) Feita em cortes de tecidos. Usa anticorpo primário específico e anticorpo secundário com enzima. substrato cromogênico reage forma cor no local do antígeno. Mostra onde está antígeno, mas não quantifica. Visto em microscópio óptico (não fluorescente). 8. Citometria de Fluxo Cada célula é marcada com anticorpos fluorescentes. As células passam uma uma por um feixe de laser. aparelho mede a fluorescência e tamanho da célula. software gera gráficos (como histogramas e dot plots). Permite identificar e contar tipos celulares muito usada em imunologia e hematologia (ex: contagem de linfócitos CD4 no HIV). 9. Radioimunoensaio (RIA) Usa antígeno radioativo e anticorpo fixo. antígeno radioativo e da amostra competem pelo mesmo anticorpo. Mede-se radioatividade:Menos radiação = mais antígeno na amostra. Muito sensível, mas pouco usado hoje por causa da radioatividade. 10. Ensaios de Luminescência / Quimioluminescência Usa moléculas luminogênicas (que emitem luz após reação química). Quando antígeno e anticorpo reagem, ocorre emissão de luz, medida em luminômetro. Muito sensível, usado em laboratórios automatizados (ex: dosagem de hormônios e marcadores virais). 11. Hepatites (A, B e C) Hepatite A (HAV) Vírus RNA, transmissão fecal-oral (água e alimentos contaminados). Aguda, geralmente se cura sozinha. Prevenção: higiene, saneamento, vacina. Grupos de risco: portadores de HIV, HBV, HCV e crianças pequenas. Hepatite B (HBV) Vírus DNA, transmissão sexual, parenteral, perinatal. Pode ser aguda ou Antígenos principais: HBsAg: da superfície primeiro aparecer. HBcAg: do núcleo indica infecção (anticorpos anti- HBc). HBeAg: indica replicação ativa e alta infectividade. Complicações: cirrose, câncer hepático. Prevenção: vacina, preservativos, não compartilharobjetos cortantes. Hepatite (HCV) Vírus RNA, transmissão principalmente pelo sangue. Frequentemente crônica e assintomática por anos. Pode causar cirrose e câncer de fígado. Tratamento: antivirais diretos cura em muitos casos.