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Montessori nasceu em 31 de agosto de 1870, no leste da Itália, na cidade de Chiaravalle. Era neta do geólogo e naturalista Antônio Stoppani e filha única do casal Alessandro Montessori e Renilde Stoppani. Quando tinha 12 anos, mudou-se com a família para Roma à procura de uma de melhor qualidade. Em 1896, concluiu O seu curso de medicina, tornando-se a primeira mulher italiana a concluir O curso. Seus estudos tinham como enfoque as neuropatologias e, logo após concluí-lo, foi trabalhar como assistente em uma clínica psiquiátrica da Universidade de Roma, onde se dedicou, por dois anos, ao estudo das crianças com deficiência intelectual.