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DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO: IDENTIFICAÇÃO E CLASSIFICAÇÃO OOCITÁRIA E EMBRIONÁRIA Profª Drª Grace Anne Vieira Magalhães Ghiotto “O impossível existe até que alguém duvide dele e prove o contrário.” Albert Einstein Fonte da imagem: • Oócito deve ser fecundado até 12h após ovulação; • Para reprodução assistida – coito programado; • Apenas acompanhamento por ultrassonografia; Ilustrações de Jacob Rueff no De Conceptu et Generatione Hominis (1554) Fonte da imagem: DESENVOLVIMENTO INTRAUTERINO TEM 3 FASES: • Pré-embrionário • Embrionário • Fetal Desenvolvimento intrauterino é dividido: Dias, semanas ou meses RA foca na 1ª semana ou período que antecede a fecundação até 5 ou 7 dias de desenvolvimento. PERÍODO PRÉ-EMBRIONÁRIO: • Divisão do blastômero (clivagem) • Formação de Blastocisto • Formação de discos embrionários – bilaminar - trilaminar Blastocisto: 1ª semana de desenvolvimento Oócito - Célula mais rara, Menor tempo de vida, Uma das maiores células quando madura; Apresenta Envoltório glicoproteico, Zona pelúcida, Cumulus oóphorus Cumulus oóphorus: cels do folículos de Graaf – rodeiam e nutrem o oócito Corona radiata: Camada de células mais íntimas ligadas ao oócito; Estendem citoplasma em direção ao oócito pela Zona Pelúcida = intercomunicação entre oócitos e céls Corona Radiata Oócitos maduros: Complexo Cumulus oóphorus (COC) secreta hialuronidase e cels ficam frouxas – células separadas pelo composto Características Morfológicas dos oócitos • Avaliação do oócito deve ser rápida e não invasiva; • Observação microscópica da morfologia; • Estimulação ovariana libera muitos oócitos com dismorfismo – mais de 50%; • Estudos tentam predizer morfologia para aumentar taxa de fertilização; DISMORFISMO Pode ser estimulado por estimulação ovariana com gonadotrofinas exógenas, falta sincronia entre maturação nuclear e citoplasma e idade materna; DISMORFISMO Intracitoplasmático • Granulações • Inclusões – corpos refráteis • Vacúolos • Agregados do RE liso Extracitoplasmático Anormalidades na formação de oócitos, zona pelúcida, espaço perivitelínico e primeiro corpúsculo polar Fonte da imagem: A - oócito normal. B - possui um primeiro corpúsculo polar aumentado. C - um primeiro corpúsculo polar fragmentado; D - um primeiro corpúsculo polar diminuído; E - possui granulação citoplasmática homogênea; F - possui granulação citoplasmática centralizada; G - apresenta vacúolo; H - apresenta corpo refrátil; I - agregado de RE; J - apresenta espaço perivitelínico aumentado; K - apresenta espaço perivitelínico com granulações; L - alterações de forma. Classificação do Grau da Maturação Oocitária Na RA, para ICSI (injeção intracitoplasmática de Espermatozoides) células COC são removidas; • Baseada na vesícula germinativa e 1º corpúsculo polar; • 3 graus de maturação; Fonte da imagem: Grau 1 - Imaturo • Denominado como Vesícula Germinativa; • Estão em prófase I (primeira divisão celular)– célula diplóide (2n) • Apresentam vesícula germinativa – cromossomos estão dentro • De 24 a 36 horas para completar maturação; • Quando aumenta LH – vesícula se move para ponto periférico e desaparece. Fonte da imagem: Grau 2 - Intermediário • Metáfase I • Cels corona mais aderidas e do cumulus mais dispersas; • Sem núcleo e corpúsculo polar (CP); • Pouco espaço perivitelínico; • Oolema próximo à ZP • Metáfase I – Diploide ainda – metáfase da 1ª divisão da meiose; • De 1 a 24 h para ficar maduro; • CP pode ocorrer a qualquer momento (requer observação) Fonte da imagem: Grau 3 - Maduro • Metáfase II • Cels corona aderidas e do cumulus expandidas; • Primeiro CP no espaço perivitelínico; • Metáfase II – haplóide (n) – metáfase da 2ª divisão da meiose; • Ideal para fertilização; • Ainda apresenta 2 cromátides – 1 delas vai liberar no 2º CP quando ocorrer fertilização; • Inseminado ou injetado de 4 a 6 h após sua coleta. Fonte da imagem: Grau 4 – Pós-maduro • Células do cumulus são como massa gelatinosa e citoplasma de aspecto granular escurecido; Grau 5 – Atrésico • Ausência de células do cumulus - oócitos disformes e citoplasma granular Do zigoto ao blastocisto Fertilização – estabelece células diplóides (2n) e inicia CLIVAGEM ou SEGMENTAÇÃO EMBRIONÁRIA Do zigoto ao blastocisto Primeira célula embrionária – Zigoto Divisão celular = curta intérfase / ↓ constituintes citoplasmáticos Do zigoto ao blastocisto Divisão celular: 2 células filhas – BLASTÔMERO – 30 horas 4 células filha – 40 a 50 horas Do zigoto ao blastocisto Zigoto se desloca – contração da tuba e cílios; Nutrição do zigoto – secreção das glândulas tubárias e uterinas; Fonte da imagem: Fertilização in vitro ❖ Avalia desenvolvimento de 0 a 7 dias; ❖ Nutrição em meio de cultivo Fonte da imagem: DIA 0 ➢ Aspiração do oócito e fertilização (FIV / ICSI) ➢ Coloca na placa com meio de cultivo e incuba por 16 a 18 horas; ➢ Checa fertilização no próximo dia – dia 1 Fonte da imagem: DIA 1 ➢ Checagem da fertilização ➢ 2 pró-núcleos ou Corpúsculo Polar Fonte da imagem: DIA 2 E 3 ➢ Estágio de clivagem; ➢ 4 e 8 células, respectivamente; ➢ Inicial – 2 blastômeros e a cada 24 horas uma divisão; ➢ Divisão é um importante indicador de viabilidade embrionária; ➢ Geralmente avalia no dia 3 Fonte da imagem: DIA 2 E 3 ➢ Durante clivagem: ➢ Blastômero envolto na Zona pelúcida; ➢ Não aumentam de volume celular; ➢ Blastômero cada vez menores; ➢ Compactação do volume intracel; ➢ Junções comunicantes entre células do interior e separando das do exterior; ➢ Caráter TOTIPOTENTE; Fonte da imagem: DIA 4 Formação de mórula: ➢ 16 blastômeros que iniciam compactação; ➢ Chega no útero e fica por 2 dias; ➢ Fluído do útero penetra no blastômero – espaços intracelulares – formação da blastocele. Fonte da imagem: DIA 4 Formação de blastocele: ➢ Afinamento da Zona Pelúcida ➢ Aumento do tamanho do embrião Fonte da imagem: DIA 5 Formação de blástula - blastocisto: ➢ Blastocisto apresenta: ➢ Cavidade – blastocele ➢ Conjunto de cél internas – Embrioblasto (futuro embrião) ➢ Células que delimitam o blastocisto - Trofoblasto Fonte da imagem: DIA 5 Trofoblasto Responsável pela interação com o endométrio e forma placenta; Fonte da imagem: DIA 5 Quando forma blastocisto, ocorre a liberação da ZP: ➢Eclosão ou Hatching Dia 5 Conforme se desenvolve, células se achatam – maior superfície de contato; Se formam microvilos e junções intercelulares – permite que células fiquem juntas no hatching Fonte da imagem: Classificação Embrionária – critérios básicos Dia 1 – Número de pronúcleos e corpúsculos polares; • Menos ou mais PN é anormal – relacionado a diferença de números de cromossomos; Classificação Embrionária – critérios básicos Dia 2 e 3 • Número de células – 2- 4 dia 2 e 6 - 8 no dia 3; • Simetria de blastômeros – tamanhos idênticos em células pares e oposto para células ímpares; • Fragmentação em porcentagem – extrutura extracelular anuclear e conteúdo citoplasmático com membrana; • Presença de blastômero multinucleados – mais de um único núcleo em interfase; Fonte da imagem: Classificação Embrionária – critérios básicos Dia 4 • Número de blastômeros, quarto ciclo de clivagem, evidência de compactação. • Morfologia regular ou irregular – relacionada a identificação dos limites celulares. Classificação Embrionária – critérios básicos Dia 5 a 7 • Embrião deve alcançar fase de blastocisto; • Ficam cultivados até 7º dia, quando se avalia os estágios; Essencial para avaliar o estágio de desenvolvimento do embrião e o seu potencial – avaliação para o processo de transferência embrionária; 5 a 7 di as - bl as to ci st o 1. Grau de expansão da cavidade (blastocele) 2. Massa celular interna (MCI) – Critério de normalidade / ausente / não compactada / degeneradas 3.Trofectoderma (TRF) – critério de normalidade / irregular / poucas células / degeneradas Fonte da imagem: Fonte da imagem: https://crhwahibhassan.com.br/jornada-do-embriao/ Fonte da imagem: https://www.institutobernabeu.com/es/foro/embrion-blastocisto-tipos-y-clasificacion-conforme-su-calidad/ Slide 1 Slide 2 Slide 3 Slide 4 Slide 5 Slide 6 Slide 7 Slide 8 Slide 9 Slide 10 Slide 11 Slide 12 Slide 13 Slide 14 Slide 15 Slide 16 Slide 17 Slide 18 Slide 19 Slide 20 Slide 21 Slide 22 Slide 23 Slide 24 Slide 25 Slide 26 Slide 27 Slide 28 Slide 29 Slide 30 Slide 31 Slide 32 Slide 33 Slide 34 Slide 35 Slide 36 Slide 37 Slide 38 Slide 39 Slide 40 Slide 41 Slide 42 Slide 43 Slide 44 Slide 45 Slide 46 Slide 47 Slide 48 Slide 49