Pratica Bioquimica e Biofísica

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ANEXO II 
PROTOCOLO DE EXPERIMENTOS 
 
 
 
Título da prática: Caracterização de aminoácidos e proteinas 
Prof(a). Responsável: Raquel Xavier Ligeiro Dias 
Laboratório: Unidade de ensino: Bioquímica e Biofísica 
Numero e data da aprovação do protocolo pela comissão de ética da Instituição: 
 
1) Objetivos 
o Identificar aminoácidos, enfatizando suas propriedades gerais e estrutura. 
o Caracterizar proteínas através de reações colorimétricas específicas. 
2) Pré-requisitos 
o Química 
o Biologia Celular e Molecular 
3) Antecedentes teóricos 
As reações dos aminoácidos são aquelas de seus grupamentos funcionais, isto é, do grupo 
alfa- carboxílico, do grupo alfa-amino e dos grupos presentes nas cadeias laterais. As 
reações das proteínas, por sua vez, dependem dos diferentes aminoácidos que as 
constituem. Sendo assim, podemos adotar a seguinte nomenclatura para essas reações 
envolvendo aminoácidos e proteínas: 
 
Reações Gerais: são as que estão relacionadas com os grupos -carboxílico e -amino. 
Portanto, são positivas para todo e qualquer aminoácido. 
 
Reações Específicas: são as que estão relacionadas com os grupos funcionais das cadeias 
laterais. Essas reações são, então, positivas unicamente na presença do grupo funcional 
que caracteriza o aminoácido. 
 
 
 
Figura 01: Fórmula geral dos aminoácidos. 
 
 
Figura 2: Aminoácido e Iminoácido. 
 
 
Figura 3: Ligação peptidica 
 
4 Procedimentos: 
1- Coagulação com ácidos minerais fortes: 
a) Colocar em um tubo de ensaio, 2 mL de ácido nítrico concentrado. 
b) Juntar vagarosamente pelas paredes e mantendo o tubo inclinado, 2 mL de 
solução protéica. 
c) No limite de separação das duas camadas aparecerá um anel branco, chamado anel 
de Heller. 
d) No primeiro tubo forma-se um precipitado branco. Enquanto no segundo não 
haverá precipitado. 
 
2- Reação de coloração ou estrutural: 
a) Colocar em um tubo de ensaio, 2 mL de solução protéica e 10 gotas de ácido 
nítrico concentrado. 
b) Forma-se um precipitado branco como na reação de Heller. Ferver até que a 
coloração passe para amarelo. 
c) Colocar 4 gotas de amoníaco concentrado (hidróxido de amônio) e agitar até 
que a coloração fixa-se em alaranjado. 
 
3- Reação de enxofre: 
a) Colocar em um tubo de ensaio, 2 mL de solução protéica e 1 mL de NaOH 10%. 
Ferver por 2 minutos. 
b) Juntar 4 gotas de acetato de chumbo 10%. Notar o escurecimento da mistura. 
 
 
 
4- Reação do biureto com a proteína: 
a) Colocar em um tubo de ensaio, 2 mL de solução protéica e 5 gotas de NaOH 
10%. Agitar. 
b) Adicionar 5 gotas de solução de sulfato de cobre 1%. Agitar. 
c) Observar a coloração rósea ou mais frequentemente violeta ou lilás. 
 
5- Reação com a Ninidrinha 
 
a) Numerar os tubos de ensaio e preparar a seguinte bateria: 
o Tubo 1 2 mL da solução de ovoalbumina 2% 
o Tubo 2 2 mL da solução de glicina 0,1% 
o Tubo 3 2 mL da solução de prolina 0,2% 
o Tubo 4 2 mL de água destilada 
o Tubo 5 2 mL de amostra 
a) A cada tubo de ensaio, adicionar 0,5mL da solução de ninidrina. 
b) Aquecer em banho-maria até que seja desenvolvida coloração. 
c) Observe e anote os resultados. 
 
 
o O desenvolvimento de coloração púrpura indica presença de grupamentos amino, revelando a existência 
de aminoácidos, peptídeos ou proteínas na amostra. 
o Quando os aminoácidos são aquecidos em solução contendo excesso de ninidrina, todos aqueles que têm 
grupamento amino livre produzem um composto púrpura, conhecido como Púrpura de Rüehmann.Essa 
reação também pode ser utilizada na detecção de peptídeos e proteínas que apresentem essa 
característica. 
o Existem dois aminoácidos que são exceções a essa reação: com a prolina e hidroxiprolina, que são 
iminoácidos, a ninidrina reage formando um composto amarelo. 
 
 
5 Bibliografias Consultadas 
BOCK, P.M., PEREIRA DOS SANTOS, P.C dos. Manual Prático de Bioquímica. 1 ed., 
Porto Alegre. Centro Universitário Metodista. Editora Sulina, 2008. 
 
Referências Bibliográficas sugeridas 
 
CAMPBELL, M. K. Bioquímica: Porto Alegre: Artmed, 2000. 
LEHNINGER, Nelson Doval L. Princípios de Bioquímica. 4ª ed., São Paulo: Sarvier, 2006. 
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/tabelas_aa/tabela_aa4.htm