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Universidade Jorge Amado – UNIJORGE Disciplina: Fisiologia Veterinária Curso: Medicina Veterinária - Semipresencial Turma: 3° trimestre - Noturno Docente: MSc. Lorena Caires ROTEIRO DE AULA PRÁTICA – AULA 1 (Dias 17/08 e 20/08) Prática 1 – Osmolaridade Materiais: • Pipetas de Pasteur de 3 ou 5 mL • Tubos de centrífuga • Estante porta-tubos • Esparadrapo • Centrífuga • Soluções: NaCl 5%, 0,9% e 0,4%, glicose a 5,1%, ureia a 1,7%; • 5 ml de sangue em tubo heparinizado; • Água destilada • Caixa de luvas descartáveis Metodologia Identificar e adicionar em cada tubo, separadamente, 2 ml das soluções (solução de salina 0,9%, 5%, 0,4%, água destilada, solução de glicose 5,1% e solução de ureia 1,7%). Adicionar em cada tubo 2 gotas de sangue e agitar suavemente. Um dos tubos deve conter apenas 2 ml de sangue. Centrifugar todos os tubos por 10 minutos a 5000 rotações por minuto. (ALTERNATIVA) Prática 1 – Osmolaridade Materiais: • 2 mL de sangue em tubo heparinizado • Solução salina isotônica (NaCl a 0,9%) • Solução salina hipotônica (NaCl a 0,1% ou água destilada) • Solução salina hipertônica (NaCl a 5%) • Micropipeta e ponteiras (de preferência 10 µl) ou Pipetas de Pasteur • Lâminas e lamínulas de vidro para microscopia • Papel toalha • Microscópio óptico • Caixa de luvas descartáveis Metodologia Limpar e identificar as lâminas. Adicionar uma gota de cada uma das soluções salinas as lâminas e, em seguida uma gota de sangue. Homogeneizar levemente com auxílio de um palito ou da pipeta de Pasteur. Colocar cuidadosamente a lamínula sobre a mistura, evitando a formação de bolhas de ar. Secar cuidadosamente o excesso e observar ao microscópio, iniciando na objetiva de 4x até 40x de aumento. Prática 2 – Sistema Digestório (Simulando a digestão bucal): Materiais • Tubos de ensaio • Pipetas graduada de 10 mL. • Água destilada. • Solução de amido a 1%. • Solução de HCl 0,1 M. • Solução de NaOH 0,1 M. • Saliva artificial • Papel pH • Iodo Metodologia: Os tubos de ensaio simularão a digestão bucal. No tubo 1 adicionar 5 mL de solução de amido e 1 mL de água destilada. No tubo 2 adicione 5 mL de solução de amido, 1 mL de água destilada e 1 gota de saliva (opcional: utilize saliva artificial). Cronometrar e observar a mudança na viscosidade das soluções em ambos os tubos. Pedir aos alunos que registrem as observações em uma tabela. Para avaliar a ação da pepsina: adicionar 1 mL de solução de HCl 0,1 M a cada tubo e misturar bem. Iniciar o cronômetro novamente e observar a mudança na viscosidade das soluções. Registrar as observações na tabela. Neutralização do pH: após 5 minutos, adicionar 1 mL de solução de NaOH 0,1 M a cada tubo e misturar bem. Utilizar o papel pH para verificar o pH das soluções. Detectação de açúcares: adicionar 2 gotas de iodo a cada tubo. Observar a mudança de cor das soluções. Prática 3 – Digestão (Papel dos Sais Biliares) Materiais • 2 Béqueres de vidro de 100ml • 50 ml de óleo de cozinha • 100 ml de água • Detergente líquido • Bastão de vidro ou palito Metodologia: Adicionar a mesma quantidade de água e óleo em cada um dos béqueres. Agitar levemente com auxílio de um bastão de vidro ou palito. Adicionar uma pequena quantidade de detergente líquido em um dos recipientes. Observar e registrar as mudanças em ambos. ESTUDO ORIENTADO Elaborar um relatório descrevendo brevemente as práticas realizadas e responder as questões listadas abaixo: Prática 1 1. O que é osmolaridade? Explique a pequena diferença entre as osmolaridades do líquido intersticial e do plasma. 2. Descreva as características do conteúdo dos tubos (cor do sobrenadante, cor e volume do depósito) após a centrifugação, confrontando-as com as do tubo tendo apenas sangue. 3. Classifique as soluções em relação ao conteúdo das hemácias quanto à tonicidade (hipertônica, isotônica ou hipotônica) e à osmolaridade (hiperosmótica, isosmótica ou hiposmótica). Práticas 2 e 3 1. Qual foi o papel da saliva na digestão inicial de carboidratos? Por que é importante a ação da amilase salivar na digestão? 2. Qual é a importância do ácido clorídrico (HCl) na digestão gástrica de proteínas? Como a mudança de pH no ambiente gástrico influencia a atividade das enzimas digestivas? 3. Na prática 3, o primeiro bécher representa um intestino delgado na ausência de sais biliares. O que aconteceu com a gordura e o que isso influenciaria na digestão? 4. Na prática 3, o segundo bécher representa o intestino delgado na presença de sais biliares. O que aconteceu com a gordura e o que isso influenciaria na digestão? OBS: Esta atividade irá compor a nota da AVA 1 e deve ser postada juntamente com os slides do seminário.