AULA 3_Biossegurança_Biotecnologia

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11/12/2012 
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Biossegurança em 
Laboratórios de 
Microbiologia 
Universidade Federal Rural do Semi-Árido 
Microbiologia Geral - ANI0335 
Raphaela V .G. Barreto 
 
11/12/2012 Biossegurança em Laboratórios de Microbiologia - 11/12/2012 
Profa. Raphaela Barreto 
Bibliografia recomendada 
Biossegurança em Laboratórios de Microbiologia - 11/12/2012 
Profa. Raphaela Barreto 
BIOSSEGURANÇA 
 
Refere-se à aplicação do conhecimento, técnicas e equipamentos 
COM A FINALIDADE DE PREVENIR a exposição do trabalhador, 
laboratório e ambiente a agentes potencialmente infecciosos ou a 
riscos biológicos. 
Conjunto de normas, procedimentos e atitudes de segurança 
que visam minimizar os acidentes em laboratório. 
Boas práticas laboratoriais - BPL 
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Histórico 
Conclusão: 
“A manipulação de culturas, espécies ou 
inalação de poeira contendo a bactéria 
Brucella é eminentemente perigosa para os 
trabalhadores de um laboratório.” 
1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de 
brucelose associados a laboratórios 
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222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por 
acidentes relatados 
1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções 
associadas a laboratórios 
Histórico 
1342 casos de infecções, sendo 72% das 
infecções por brucelose, tuberculose, tifo 
e infecção estreptocócica 
1951 - Sulkin e Pike – Nova pesquisa 
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Histórico 
1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos 
1980 – Precauções universais na manipulação de 
fluídos corpóreos 
1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de 
Biossegurança - Fiocruz 
1995 – Lei Brasileira de 
Biossegurança – Lei 897/95 
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1999 – Fundação da Associação Nacional de 
Biossegurança (ANBio) 
1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de 
Biossegurança 
2000 – Biossegurança como 
disciplina científica universitária 
2001 – Indução de ações em 
biossegurança pelo CNPq 
Histórico 
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O símbolo deve estar 
afixado na porta de entrada 
de todos os laboratórios 
que desenvolvam 
projetos com OGMs e 
derivados. 
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Tipos de riscos 
• Riscos de acidentes 
 
• Riscos ergonômicos 
 
• Riscos físicos 
 
• Riscos químicos 
 
• Riscos biológicos 
(Portaria do Ministério do Trabalho, MT nº 3214, 08/06/78) 
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RISCOS FÍSICOS 
“Riscos provocados por algum tipo de energia” 
 
• Equipamentos que geram calor ou chamas 
• Equipamentos de baixa temperatura (frio) 
• Radiação:Raio X, Não ionizante (LN, UV, IV, RL) 
• Pressões anormais 
• Umidade 
• Ruídos e vibrações 
• Campos elétricos 
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RISCOS FÍSICOS: ESTUFA 
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RISCOS FÍSICOS: AUTOCLAVE 
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RISCOS FÍSICOS: NITROGÊNIO LÍQUIDO 
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RISCOS FÍSICOS: Flambagem 
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VIAS DE TRANSMISSÃO DE PATÓGENOS EM 
LABORATÓRIOS DE MICROBIOLOGIA 
 • Transmissão oral 
 
• Transmissão aérea 
 
• Transmissão cutânea 
 
• Transmissão ocular 
 
 
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Manuseio de agentes biológicos, químicos e físicos – 
EXPOSIÇÃO A RISCOS 
As atividades no Laboratório de Microbiologia incluem: 
 
1. Execução de preparações e observações microscópicas; 
2. Preparo, montagem e esterilização de materiais e de meios de 
cultura, reagentes; 
3. Manipulação de amostras biológicas, culturas de micro-
organismos; 
4. Execução de técnicas de cultivo, isolamento, quantificação, 
caracterização e identificação de micro-organismos. 
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MICRO-ORGANISMOS E GRUPOS DE RISCO 
  Grupo 1: Micro-organismos que, até o momento, não causam 
doenças para o homem (baixo risco individual e coletivo) e que não 
representam riscos para o ambiente. 
Ex. Lactobacillus, Lactococcus, Saccharomyces, cepas não patogênicas de 
Escherichia coli, dentre outros. 
 
 
 Grupo 2: Micro-organismos que podem causar doenças no homem, 
mas a exposição laboratorial raramente produz doença. Mesmo assim, 
para essas doenças existem medidas profiláticas e terapêuticas 
eficientes. Moderado risco individual e baixo risco coletivo; propagação 
limitada. 
Ex. Espécies de Salmonella, E. coli patogênicas, Proteus, Staphylococcus, 
Streptococcus, Neisseria, Listeria, dentre outros. 
 
 
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MICRO-ORGANISMOS E GRUPOS DE RISCO 
  Grupo 3: Micro-organismos que podem causar doenças graves no 
homem e apresentam risco elevado para os laboratoristas. Eles 
podem apresentar riscos de serem disseminados para a população. 
Elevado risco individual e baixo risco coletivo; propagação direta. 
Ex. Mycobacterium tuberculosis 
 
 
 Grupo 4: Micro-organismos que causam doenças humanas severas 
e apresentam risco elevado para os laboratoristas e para a população 
em geral. Eles são agentes altamente infecciosos que se propagam 
facilmente, podendo causar a morte das pessoas infectadas. Elevado 
risco individual e coletivo; propagação direta e indireta. 
Ex. Vírus Ebola 
 
 
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NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA (laboratórios) 
 NB 1 – Agentes nunca descritos como causadores de doenças e 
que não constituem risco para o meio ambiente; baixo risco 
coletivo. 
 
ex: Laboratórios didáticos 
 
 NB 2 – Agentes associados com doença humana com pouco risco 
para os profissionais de laboratório. 
 
 moderado risco individual e baixo risco coletivo 
 
ex. Maioria dos laboratórios de pesquisas biomédicas 
 
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NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA (laboratórios) 
 NB 3 – Agentes associados com doença humana e podendo causar 
graves enfermidades aos profissionais de laboratório. 
 risco individual elevado e risco coletivo baixo. 
 
ex. Laboratórios para pesquisa de Aids e tuberculose 
 
 NB 4 – Agentes perigosos que causam graves doenças para o homem 
e representam sério risco para os profissionais de laboratório e para a 
coletividade. 
 
ex. Laboratórios que trabalham com agentes altamente infecciosos e 
que se propagam facilmente podendo levar a morte, como o vírus ebola 
entre outros. 
 
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Equipamento de proteção individual – EPI 
 Segundo a Lei n° 6.514, de 22.12.1997, Seção IV, art.166, toda empresa 
é obrigada a fornecer aos seus funcionários, gratuitamente, EPI′s 
segundo as necessidades de trabalho e ao risco inerente, que se 
encontrem em perfeito estado de conservação. 
 
 Os empregados, de acordocom a Norma Regulamentadora n° 6 (NR 6) 
da Portaria n° 3.214, de 08.06.1978, são obrigados a usar o(s) EPI(s) e se 
responsabilizar pela guarda e conservação deste(s). 
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 Máscaras 
• Específica para poeira, névoa e pó, que não deve ser utilizada no 
manuseio de substâncias químicas; 
• Descartável; 
• Filtro específico para um tipo de substância química; 
• Proteção facial com filtro. 
 
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• Proporcionar ao usuário visão transparente, sem distorções e 
opacidade; 
• As lentes devem ser especiais para o tipo de atividade executada; 
• Muitas atividades exigem óculos de segurança e uma proteção de toda 
a face. 
 
 Óculos 
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 Luvas 
• São confeccionadas de vários materiais, para serem utilizadas em 
diversas atividades com diferentes substâncias; 
• Devem ser de uso individual e serem higienizadas após o uso; 
• As luvas de procedimento não são para manuseio de substâncias 
químicas e lavagem de vidrarias. 
 
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 Jalecos 
• São de uso constante nos laboratórios e constituem uma proteção 
para o profissional; 
• Devem sempre ser de mangas longas, confeccionados em algodão ou 
fibra sintética (não inflamável); 
• Os descartáveis devem ser resistentes e impermeáveis. 
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Equipamento de proteção coletiva – EPC 
 Cabine de Segurança Biológica - CSB 
• Constituem o principal meio de contensão e são usadas como barreiras 
primárias para evitar a fuga de aerossóis para o ambiente; 
 
• Há três tipos de cabines de segurança biológica: 1) Classe I; 2) Classe II 
3) Classe III; 
 
• As cabines são equipadas filtros HEPA (High Efficiency Particulated Air - 
0,3 µm), LUZ, UV, ETC. 
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1) Classe I 
 
. Painel frontal aberto ou fechado (uso de luvas de borracha); 
. Não protege o experimento (o ar penetra na cabine aberta); 
. Protege o ambiente e o operador; 
. Recomendada para trabalho com agentes de NB1. 
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2) Classe II 
. Protege o operador, o experimento e o ambiente; 
. O ar é totalmente mandado para fora; 
. Trabalho com agentes NB1 e NB2. 
 
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Cabinetes de biossegurança II 
(Câmara de Fluxo laminar) 
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3) Classe III 
. Contenção máxima; 
. Absolutamente hermética; 
. Aço inoxidável, uso de luvas de borracha e temperatura controlada; 
. Permite produtos químicos; 
. Usada para NB1, NB2, NB3 e NB4. 
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• Manter portas e janelas do laboratório fechadas; 
• Evitar a circulação no laboratório durante os procedimentos; 
• Ligar a cabine e a luz UV por 20 minutos antes e após o uso; 
• Descontaminar seu interior com gaze estéril em álcool 70% antes e após o uso; 
• Lavar as mãos e antebraço; 
• Usar jaleco/avental e luvas; 
• Limpar todos os objetos antes de colocá-los e após retirá-los da CSB; 
• Cuidado no bico de Bunsen em seu interior; 
• Não usá-la para guardar objetos; 
•Não ligar a luz UV enquanto estiver usando a CSB; 
• Controlar o tempo de uso da UV; 
• Não deixar papéis presos no vidro/ acrílico. 
Cuidados 
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 Capela Química 
• Reduz o perigo de inalação e contaminação do operador e ambiente. 
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 Chuveiro 
• Chuveiro de aproximadamente 30 cm de diâmetro; 
• Acionado por alavancas de mão, cotovelos ou joelhos; 
• Deve estar localizado em local de fácil acesso. 
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 Lava olhos 
• Dispositivo formado por dois chuveiros de média pressão, acoplados a 
uma bacia metálica; 
• Pode fazer parte do chuveiro de emergência ou tipo lavagem ocular 
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 Manta ou cobertor 
• Confeccionado em lã ou algodão grosso, não podendo ter fibras sintéticas; 
• Utilizado para abafar ou envolver vítima de incêndio. 
• Também chamado de balde de areia; 
• Utilizado sobre derramamento de álcalis para neutralizá-lo. 
 Vaso de areia 
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 Extintor de incêndio 
1) Classe A 
. Incêndios em materiais sólidos inflamáveis e fácil combustão; 
. Extintor: água e espuma. 
 
2) Classe B 
. Incêndios em materiais gasosos e inflamáveis; 
. Extintor: gás carbônico, pó químico e espuma. 
 
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3) Classe C 
. Incêndios em materiais energizados por onde passa corrente elétrica; 
. Extintor: gás carbônico, pó químico. 
 
4) Classe D 
. Elementos que se inflamam espontaneamente, por exemplo, magnésio, 
zircônio, titânio, pó de alumínio, urânio etc; 
 . Combate por abafamento com pó químico especial. 
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 Análise de risco 
1) Tipos de riscos 
2) Intensidades dos riscos 
G M 
P 
GRUPO 1: RISCOS FÍSICOS (verde) 
GRUPO 2: RISCOS QUÍMICOS (vermelho) 
GRUPO 3: RISCOS BIOLÓGICOS (marrom) 
GRUPO 4: RISCOS ERGONÔMICOS (amarelo) 
GRUPO 5: RISCOS DE ACIDENTES (azul) 
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 Exemplo de mapa de risco 
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 Sinalização 
Sinalização de segurança 
Não comer, beber, mascar chiclete ou tomar medicamento. 
Não correr e nem fazer movimentos bruscos no laboratório. 
Não cheirar ou tocar em produtos químicos. 
Não usar jóias. 
Deixar o laboratório limpo e arrumado 
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Sinalização de emergências 
Saída de emergência à esquerda 
Posto de primeiros socorros 
Lava-olhos de emergência 
Direção a seguir 
Chuveiro de emergência 
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Perigo de incêndio 
Perigode eletrocussão 
Perigo – altas temperaturas 
Perigo - Substâncias Corrosivas 
Perigo de Intoxicação 
Perigos 
Sinalização de aviso 
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Proteção obrigatória dos olhos 
Proteção obrigatória das mãos 
Proteção obrigatória dos olhos e vias respiratórias 
Proteção obrigatória das vias respiratórias 
Obrigatório lavar as mãos 
Proteção obrigatória do corpo 
Sinalização de obrigação 
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RADIAÇÃO RISCO 
BIOLÓGICO 
ARMA 
QUÍMICA 
SIMBOLOGIA 
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IRRITANTE 
INFLAMÁVEL 
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PERIGO AO MEIO 
AMBIENTE 
TÓXICO 
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CORROSIVO 
C
O
M
B
U
ST
ÍV
EL
 
EX
P
LO
SI
V
O
 
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RISCO 
BIOLÓGICO 
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RADIAÇÃO 
IONIZANTE 
RADIAÇÃO 
NÃO 
IONIZANTE 
RADIAÇÃO A 
LASER 
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GÁS 
COMPRIMIDO 
SUPERFÍCIE 
AQUECIDA 
BAIXA 
TEMPERATURA 
CAMPO 
MAGNÉTICO 
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Medidas coletivas: 
• Descarte e remoção de lixo 
• Extintores de incêndio 
• Lavador de olhos 
• Sinalização adequada 
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Acesso aos equipamentos de segurança coletiva 
Livre Obstruído 
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Coleta de lixo seletiva 
SACO PRETO 
 Lixo Comum 
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Normas Inegociáveis 
NÃO COMA 
NÃO BEBA 
NO LABORATÓRIO!!! 
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NUNCA pipetar com a boca!!! 
Normas Inegociáveis 
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Retirar as luvas antes de usar 
o telefone, tocar em óculos, 
maçanetas, portas de 
geladeiras, etc. 
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Não circular nas áreas sociais utilizando 
equipamentos de proteção, como luvas 
ou pró-pés. 
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Transportar reagentes químicos ou biológicos com segurança e de 
acordo com as recomendações 
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Retirar as luvas antes de tocar em equipamentos comuns. 
Exceção: quando assinalado “uso de luvas obrigatório” junto ao equipamento. 
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Com luva: 
mão protegida 
Sem luva: 
mão desprotegida 
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Não usar jaleco do laboratório no refeitório 
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Lavar as mãos antes e depois de trabalhar no 
laboratório. 
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Limpeza no horário de trabalho?! 
BOAS PRÁTICAS LABORATORIAIS 
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Boas Práticas Laboratoriais - BPL 
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Boas práticas laboratoriais 
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Acidentes em Laboratórios 
 
Freqüência dos Acidentes 
 
 20% causas conhecidas 
 Maioria desses acidentes tem como 
 causa materiais perfuro-cortante. 
 
 80% causas desconhecidas 
 Podem levar dias, meses ou até 
 mesmo anos para a doença se 
 manifestar. 
 Não existe lembrança de uma possível 
 contaminação. 
 Tem como principal fonte de veículo 
 carreador, o aerossol. 
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MAIORES CAUSAS DE ACIDENTES 
 
 Manipulação de Lâminas 
 Inoculação de Animais 
 Necrópsia 
 Cabine de Segurança Biológica 
 Centrífuga 
 Derramamento 
 Manipulação de Seringas 
 Placas de Petri e Pipetas 
 Manipulação de Meio Contaminado 
 Aerossóis 
 
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 Aerossóis 
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Alguns imprevistos não são tão imprevisíveis assim! 
“A PREVENÇÃO DE ACIDENTES É RESPONSABILIDADE DE CADA 
UM DE NÓS”