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Atlas de Citologia Departamento de Histologia e Embriologia Métodos de estudos da célula 1. Tipos de Coloração a) PAS ( Ácido periódico de Schiff) Este método é primariamente usado para identificar glicogênio em tecidos. É principalmente usada para colorir estruturas contendo uma alta proporção de macromoléculas de carboidratos (glicogênio, glicoproteína, proteoglicanos), tipicamente encontrado em eg. tecidos conjuntivos, mucos, e lâminas basais. Produz uma cor magentapúrpura (Hepatócitos corados com PAS + Hemalúmen( Hematoxilina + alúmen)* * Corantes básicos que evidenciam organelas de caráter ácido b) Azul de Alcian Corante básico é usado para corar polissacáridos ácidos, tais como glicosaminoglicanos em cartilagens e outras estruturas do corpo, alguns tipos de mucopolissacarídeos, glicocálice de células, glicoproteínas etc. Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia (Epitélio do intestino delgado com PAS+ Azul de alcian) c) Imunocitoquímico É o conjunto de técnicas que usam anticorpos para identificar células, que funcionam como antígenos, nos tecidos. Esta identificação ocorre devido a reações específicas, interação anticorpoantígenos, que confere cor aos compostos que se pretendem estudar, permitindo a sua visualização ao microscópio óptico composto. A imunocitoquímica utiliza algumas substâncias marcadoras que têm a capacidade de se ligarem aos anticorpos, sem que estes percam a sua capacidade de se acoplarem com o antígeno.. Os três métodos mais usados para marcar os anticorpos são: ● Conjugação com composto fluorescente. Torna possível a identificação do anticorpo marcado e, portanto, do antígeno a que ele se liga, pelo emprego do microscópio de fluorescência. ● Conjugação com uma enzima. O anticorpo é localizado por meio de técnicas histoquímicas, geralmente, usadas em enzimas. A enzima mais usada é a peroxidase, que pode ser localizada pelo método DAB (33’diaminobenzidina) e visualizada tanto no microscópio ótico como no eletrônico. ● Conjugação com uma substância que não se deixa atravessar pela luz e que dispersa eletrões. Um dos marcadores mais frequentemente usados é o ouro, cujas partículas podem ser visíveis nos microscópios ótico e eletrônico. Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia (Localização histoquímica de substâncias imunorreativas utilizando anticorpos marcados como reagentes / Pâncreas evidenciando o glucagon) d) HematoxilinaEosina (HE) Nas células coradas com HE, os ácidos nucleicos presentes no núcleo são corados pela hematoxilina, corante básico, dando ao núcleo um tom azularroxeado. A eosina, por sua vez, um corante ácido, é atraída pelos elementos básicos das proteínas do citoplasma da célula, corandoos de róseo a vermelho. (Espalhamento da mucosa bucal corada com HE) Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia e) Impregnações metálicas Estás técnicas são usadas para a observação de células que não evidenciam organelas através do método de coloração. Não é técnica de coloração, porque não ocorre um processo de tingimento. A cor é devida ao depósito de metais sobre alguma estrutura. Exemplo de impregnações: técnica de Aoyama, impregnação argêntica, Gomory e etc (Impregnação argêntica em células reticulares do baço) Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia 2. Citomorfologia 1. Esférica 2. Poligonal 3. Prismática 4. Caliciforme 5. Bicôncava 6. Piramidal 7. Cúbica 8. Plana Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia 3. Citoesqueleto e movimento celular a) Epidídimos com estereocílios Esterocílios: São microvilosidades de tamanho maior que as regulares e às vezes são ramificadas. Apesar do nome, não tem motilidade. Os estereocílios aumentam a área de superfície da célula, facilitando o movimento de moléculas para dentro e para fora da célula. São comuns em células do revestimento epitelial do epidídimo e do ducto deferente. (Epitélio PseudoEstratificado Colunar com Estereocílios do epidídimo corados com HE) Ep: epitélio, Sz: espermatozoides, N:núcleo, Sc: esterocílio, TC: tecido conjuntivo b) Cílios da traqueia Os cílios são especializações celulares, comumente mais longas e de maior calibre que as microvilosidades. A interação e deslizamento entre os pares de MT do cilindro externo e o par central, em presença de ATP, causa torção e flexão do axonema, produzindo o batimento ciliar. Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia (epitélio pseudoestratificado de revestimento interno da traqueia corado com H.E com evidência da presença de cílios em sua região apical) c) Microvilosidade Os microvilos são projeções citoplasmáticas presentes no intestino delgado. Localizados na parte apical da célula. Tem função de absorção. O glicocálix recobre os microvilos. (Células epiteliais prismáticas do intestino delgado corado com HE) Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia d) Queratina/Pele ( Tecido epitelial de revestimento estratificado pavimentoso queratinizado corado com HE) 4. Sistema de Endomembranas/ Secreção celular a) Corpúsculo de Nissl (Neurônio) Os corpúsculos de Nissl ou grânulos de Nissl ou também denominada substância cromófila, são acumulações basófilas, que se encontram no citoplasma de células nervosas Essa região corada é composta por retículo endoplasmático rugoso e polirribossomos, essa constituição permite que o neurônio seja uma célula que esteja frequentemente produzindo proteínas. Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia (Neurônio corado com HE) b) Ergastoplasma e grânulos de secreção (ácinos pancreáticos) As células exócrinas do pâncreas possuem duas regiões de citoplasma bem distintas, separadas pelo núcleo. Uma destas regiões (destaque em azul) é obviamente basófila, arroxeada, e corresponde ao ergastoplasma muito desenvolvido nestas células que são grandes produtoras de proteínas. A outra região (destaque em laranja) contém uma grande quantidade de grãos de secreção, ricos em proteínas as enzimas produzidas pela célula. Esta região é acidófila. Cada célula tem a forma de uma pequena pirâmide, que em cortes aparece triangular. (Células glandulares pancreáticas coradas com HE) Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia C) Complexo golgiense (Epidídimos) (Célula do epidídimos em IA(Preto) corada com HE) 5. Bioenergética e inclusões citoplasmáticas a) Melanócito Éuma célula dendrítica que produz melanina, substância pigmentar que envolve a célula protegendo seu núcleo dos raios solares. No homem, os melanócitos se encontram na pele, na camada basal da epiderme, no sistema nervoso central e na retina. A melanina é um dos responsáveis pela coloração da pele e auxiliam na proteção celular contra a radiação solar. Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia b) Adipócitos Adipócitos são células armazenadoras de gordura (lipídios), possuem a forma arredondada e são encontradas no Tecido Adiposo. (Adipócitos corados com HE) c) Melanóforos Célula com característica forma ramificada, contendo grânulos de melanina; estreladas em fibroblastos localizados no tecido conjuntivo, caracterizado pela presença de numerosos grânulos de melanina no citoplasma.tais grânulos, sob a ação de impulsos nervosos e de hormônios, podem dispersarse ou concentrarse, determinando modificações da cor da pele. O núcleo é alongado e está localizado em uma posição central. Tem um citoplasma escasso no qual estão incluídos retículo áspero e complexo de Golgi. Melanóforos, juntamente com os melanócitos formam o componente de pigmento de tecido conjuntivo) Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia d) Cloroplastos É uma organela presente nas células das plantas e outros organismos fotossintetizadores, como as algas e alguns protistas. Possui clorofila, pigmento responsável pela sua cor verde. (As estruturas em verdes sãos os cloroplastos presentes em células vegetais) 6. Divisões celulares I) Interfase II) Prófase Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia III) Metáfase IV) Anáfase V) Telófase 7. Núcleos 1. Linfócito Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia 2. Eosinófilo 3. Basófilo 4. Neutrófilo Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia 5. Monócito Comparação entre os linfócitos Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia Componentes Nucleares Nu = Nucléolo L= Limite Celular H = Heterocromatina Eu = Eucromatina Cp = Citoplasma ● Quando há evidência do nucléolo, então a célula se encontra em interfase. Paulo Lima Centro de Biociências UFPE Departamento de Histologia e Embriologia