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27/11/2015 1 FUNÇÕES DO MATERIAL FUNÇÕES DO MATERIAL GENÉTICOGENÉTICO • Dogma Central da genética; METABOLISMO DO DNAMETABOLISMO DO DNA •• Replicação ou Duplicação do DNAReplicação ou Duplicação do DNA Processo que permite que novas moléculas de DNA sejam formadas a partir de uma molécula preexistente. A sequência de bases no DNA contém o código genético Zigoto= 6 bilhões de pb Se ocorrer 1 erro a cada 1 milhão de pb = 6.000 erros / divisão E. coli = 4,7 milhões de pb Se a velocidade de replicação for de 1000 nucleot./min = 3 dias para replicação Replicação do DNA • Em que momento o DNA é replicado? Investigação em procariotos Escherichia coli Replicação do DNA • Modelo de Watson e Crick e a replicação 27/11/2015 2 Bactérias crescendo em meio contendo nitrogênio leve Replicação do DNA • Experimento de Meselson-Stahl • É semiconservativa • É bidirecional Replicação do DNA em procariotos • Ponto de origem Procariotos – único ponto Replicação do DNA • Origem de replicação – oriC (245 pb) • 850 nucleotídeos/segundo (E. coli – 100 min) Direção de síntese em ambas as fitas 5’3’ Direção de crescimento da molécula: Bidirecional • Ponto de origem – 5000 nucleotídeos / min. Eucariotos – vários pontos Replicação do DNA em eucariotos Direção de crescimento da molécula: Unidirecional Origem Direção de síntese em ambas as fitas 5’3’ Replicação do DNA – componentes necessários: • um molde de DNA unifilamentar • matérias-primas para um novo filamento • enzimas e outras proteínas Replicação do DNA – características gerais: • semiconservativa • dupla hélice • complementariedade de bases; • antiparalelas Nov a Nov a Fita parental Fita parental Fitas filhas 27/11/2015 3 OH H OH H DNA Polimerase OH H O H • Requer um molde • Requer um iniciador Replicação do DNA - Polimerização da cadeia G G A A T C T C 5’ 3’ OH H DNA Polimerase A Primase (RNA Polimerase) RNA iniciadores (Primers – 10-12 nucleot.) OH 5’ 3’ U C C Coordenação entre as sínteses Visão Geral da Replicação Direção síntese = 5`Direção síntese = 5`→3`→3` Complementariedade das Complementariedade das bases = fidelidade de bases = fidelidade de transferência de informaçãotransferência de informação REPLICAÇÃOREPLICAÇÃO SEMICONSERVATIVASEMICONSERVATIVA A síntese prossegue sempre na direção 5’ → 3’ Como pode ambas as fitas serem sintetizadas continuamente enquanto a forquilha de replicação se movimenta? Síntese contínua Síntese descontínua Fragmentos de Okasaki Direção da movimentação da forquilha de replicação Fragmentos de Fragmentos de OkasakiOkasaki Uma das novas fitas de DNA é sintetizada em pedaços curtos, chamados de fragmentos de Okasaki 27/11/2015 4 DNA Girase DNA polimerase Replicação do DNA • Fragmentos de okazaki -procariotos: 1000-2000 nucleotídeos -eucariotos: 100-200 nucleotídeos Replicação do DNA • DNA polimerases da E. coli DNA Polimerase Polimerização 5´ 3´ Exonuclease 3´ 5´ Exonuclease 5´ 3´ Função I Sim Sim Sim Remove e substitui primers II Sim Sim Não Reparo do DNA III Sim Sim Não Alonga o DNA Dímero de subunidade β da DNA polimerase III • Enzimas: sistema da DNA replicase ou replissomo 1) Proteínas Iniciadoras 3) Proteínas ligadoras de DNA de fita simples (SSB) 4) DNA Polimerase 5) RNA polimerase (Primase) 7) DNA Ligase 2) DNA helicases Replicação do DNA 6) DNA Girase 27/11/2015 5 DNA girase REPLICAÇÃOREPLICAÇÃO 29 Conectam a ponta 3’ do DNA preenchedor com a ponta 5’ do fragmento de Okazaki posterior. Replicação do DNA (1) Múltiplas origens de replicação (2) Mais tipos de DNA polimerases (3) Montagem dos nucleossomos - DNA pol α (alfa): sintetiza primer - DNA pol δ (delta): sintetiza cadeia descontínua - DNA pol ᵋ (épsilon): sintetiza a cadeia contínua - Outras DNA pol Em eucariotos 27/11/2015 6 Micrografia eletrônica do DNA eucariótico no processo de replicação https://www.youtube.com/watch?v=27TxKoFU2Nw
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