Citopatologia: Coleta e Processamento de Amostras

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Coleta da Amostra
Fixação
Coloração Papanicolaou
CITOPATOLOGIACITOPATOLOGIACITOPATOLOGIA
Coleta
Escrutínio
Interpretação
60%25%
15%
Falso-Negativos
COLETA DA AMOSTRA
CITOLOGIA CONVENCIONAL
CITOLOGIA EM MEIO LÍQUIDO
ASPECTOS ANATÔMICOS
APARELHO GENITAL FEMININO
COLPOSCOPIA
COLO UTERINO NORMAL
APÓS APLICAÇÃO DE SORO FISIOLÓGICO APÓS TRATAMENTO COM LUGOL
(TESTE DE SCHILLER)
PROLAPSO 
UTERINO
E AS 
REPERCURSÕES
PARA A 
QUALIDADE DA
COLETA
DA AMOSRA 
QUALIDADE DA AMOSTRAQUALIDADE DA AMOSTRA
As lesões malignas e pré-malignas do colo 
do útero só poderão ser detectadas se o 
esfregaço for de boa qualidade, incluindo 
elementos representativos de todas as 
áreas de risco.
PROPRIEDADES 
DO
EPITÉLIO ESCAMOSO
PROLIFERAÇÃO
DIFERÊNCIAÇÃO
DESCAMAÇÃO
TIPOS DE AMOSTRAS
CITOLOGIA 
CONVENCIONAL
EM MEIO LÍQUIDO
TÉCNICA DE COLETA
CITOLOGIA CONVENCIONAL
CITOLOGIA DE BASE LÍQUIDA
- Época ideal da coleta
- Fatores que podem prejudicar a 
qualidade da amostra citológica
Orientação adequada a mulher
- Local de coleta
- Material adequado para colheita
- Forma do esfregaço
- Números adequados de células e sua 
representatividade
- Fixação adequada com fixador apropriado
Principais Causas de Erros
Instrumental, Amostragem e Preparo do esfregaço
Espéculo descartável
Ectocérvice (JEC) Endocérvice
Coleta
Fundo de saco
M
S
C
3
1
2
1
1
8 Fundo 
de saco
Ectocérvice
Endocérvice
Ectocérvice
M
S
C
3
1
2
1
1
8 Fundo 
de 
saco
Ectocérvice
Endocérvice
M
S
C
3
1
2
1
1
8 Fundo 
de 
saco
Ectocérvice
Endocérvice
Endocérvice
Confecção dos esfregaços
M
S
C
3
1
2
1
1
8 Fundo 
de saco
Ectocérvice
Endocérvice
Esfregaço Cérvico-vaginal
CASO DA ROTINA
�NOME : M A C P IDADE : 22 ANOS 
�UM : 09 / 08 / 02 
�EXAME : 2 7 388 
�CONSIDERAÇÕES CLÍNICAS :
SEM INDICAÇÃO 
�CONSIDERAÇÕES 
CITOMORFOLÓGICAS : 
CELULARIDADE REPRESENTATIVA ESCASSA E NO 
LIMITE DA LAMÍNULA
Fixação dos Esfregaços
Objetivo
Preservar características citomorfológicas e reter
certos elementos citoquímicos, que são essenciais
na etapa de coloração
Tipos de Fixação
- Úmida
- De Cobertura
- Mista
Fixador mais usado: Etanol a 95%
Considerações gerais
- Fixação imediata
- Tempo de fixação – 15 a 30 minutos
Tipos de Fixação
Úmida
De Cobertura
A maioria destes agentes têm dupla função:
- fixam as células
- quando secam promovem o aparecimento de um fino 
filme protetor
Tipos de Fixação
Carbovax 4000
Consiste em etanol a 95% e uma película - polietilenoglicol
Álcool – fixador
Polietileno glicol –filtro protetor
Obs: permite que os esfregaços sejam armazenados sem 
distorções celulares por uma semana
De cobertura
Consiste em álcool isopropílico e o glicol do polietileno 
glicol
Obs: Alguns apresentam concentrações de álcool 
maiores
do que as recomendadas para ótima fixação – retração 
celular,condensação da cromatina e perda dos detalhes 
nucleares
Não são recomendados para esfregaços hemorrágicos
Spray
De cobertura
Processamento dos espécimes fixados com 
carbovax e spray
É fundamental que sejam eliminados antes da coloração 
- Inibem a penetração apropriada da coloração –
especialmente da hematoxilina e o verde brilhante
- Apresenta excessiva eosinofilia
De cobertura
Processamento dos espécimes 
fixados com carbovax e spray
Procedimentos antes da coloração
- As amostras devem ficar imersas em etanol a 
95% em2 cubas, no mínimo 15 minutos cada
Mista
Fixação úmida com subseqüente exposição ao ar
- Procedimento
- Fixação imediata em fixador líquido – etanol 95% - mín.15`
- Remover do recipiente e deixar secar ao ar ambiente
- Colocar a lâmina em recipiente para transporte
Tipos de Fixação
CITOLOGIA EM MEIO LÍQUIDO
� A citologia em base-líquida é um instrumento fundamental 
para a identificação de células pré-neoplásicas e neoplásicas 
do colo uterino. Esta técnica tem como princípio transferir 
todo material celular coletado para um meio líquido, sua 
prioridade é preservar as estruturas morfológicas e as 
moleculares, como as proteínas e os ácidos nucléicos. Como 
método laboratorial ela auxilia no rastreamento de lesões 
precursoras do câncer e nas variadas formas de neoplasia 
maligna. 
A Citologia em base líquida possibilita a redução de perda no 
preparo da amostra e a melhor distribuição celular. 
� Principais Vantagens em Meio Líquido
*Maior sensibilidade: menor perda de material coletado e 
melhor distribuição das células; 
*Citologia em monocamada e com fundo mais limpo; 
*Realização do teste de Captura Híbrida a partir da mesma 
amostra; 
*Redução de falsos negativos em até 20%; 
*Redução de casos insatisfatórios em até 40%; 
*Sensibilidade de até 86,7% em Lesões de Baixo Grau -
contra 63,6% na técnica convencional.
CITOLOGIA EM MEIO LÍQUIDO
- Coloração de Papanicolaou
- Corantes etiquetados e datados, armazenados 
adequadamente, data de vencimento
- Trocados e filtrados com regularidade
- Processamento da amostra
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
- Coloração de Papanicolaou
Corantes:
Nuclear - Hematoxilina
Citoplasmático - Orange G6 e EA (Eosina, Verde 
Luz ou Verde Brilhante e Pardo Bismarck)
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
Técnica de Coloração de Papanicolaou modificada
Etapas
Fixação
Hidratação
Etanol 95%
Álcool 80%, 70%, 50% - 6 mergulhos cada 
Água destilada - 6 mergulhos 
Coloração
Nuclear Hematoxilina de Harris – 30” a 2 min.
Lavagem Água destilada/corrente - 1 a 3 min.
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
Técnica de Coloração de Papanicolaou Modificada
Desidratação Etanol 50%, 70%, 80% e 95%
6 mergulhos Cada
Coloração
Citoplasmática
OG 6 - 20” a 2 min.
Lavagem Etanol 95% - 6 mergulhos
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
Técnica de Coloração de Papanicolaou Modificada
Coloração
Citoplasmática
e Nucleolar
EA 36 (EA 50 ou EA 65) - 20”a 2 min.
Lavagem Etanol 95% - 2 banhos - 10 mergulhos cada
Desidratação Etanol absoluto - 6 mergulhos
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
Clareamento Etanol absoluto e Xilol 
6 mergulhos
Montagem Xilol EntelanLâmínula
Técnica de Coloração de Papanicolaou Modificada
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
M.JIMÉNEZ AYALA & F.NOGALES ORTIZ 1978
ALCOOL
96%
HEMATOXILINA
HARRIS 5’
SUBMERGIR 5 VEZES 5’ 5 VEZES
E.A 31 - 5’ SUBMERGIR 5 VEZES
SECAGEM COM
PAPEL DE FILTRO
MONTAGEM
Técnica de coloração
e Montagem da lâmina
Técnica de Coloração de Shorr
Objetivo
- Permitir a ligação entre a lâmina e lamínula, através do 
meio de montagem
- Proteger o material celular da dessecação e retração
- Agir como um efetivo selador contra oxigênio, prevenindo
o desbotamento do corante
Montagem da Lâmina
Método de escrutínio recomendado
Horizontal / Vertical
Terminologia recomendada
Classificação - Richart
- Bethesda
Análise Microscópica
Objetiva 10 X Objetiva 40 X
Método de Escrutíneo
Vertical
Horizontal
M
N
S
1
0
3
5
L
S
W
2
6
1
CASOS DA ROTINA
�NOME : M S C IDADE : 34 ANOS 
�UM :09 / 09 /02 
�EXAME : 2 8 007 
�CONSIDERAÇÕES CLÍNICAS :
PC 5119/02 : NIC II
�CONSIDERAÇÕES CITOMORFOLÓRICAS : 
AMOSTRA LIMITADA PARA AVALIAÇÃO ONCÓTICA POR ÁREAS 
ESPESSAS 
ADEQUAÇÃO DA AMOSTRA
FIXAÇÃO INADEQUADA
( RESSECADO AO AR )
AMOSTRA INSATISFATÓRIAESPALHAMENTO ESPESSO
ADEQUAÇÃO DA AMOSTRA
AMORTRA INSATISFATÓRIA
ARTEFATO DE RISCO
ESFREGAÇO ATRÓFICO
( CROMATINA NUCLEAR ARRASTADA )
EXCESSO DE LUBRIFICANTE
ADEQUAÇÃO DA AMOSTRA
AMOSTRA INSATISFATÓRIA
EXCESSO DE NEUTRÓFILOS
SEM CÉLULAS EPITELIAIS
CITÓLISE EXCESSIVA
ADEQUAÇÃO DA AMOSTRA
AMOSTRA INSATISFATÓRIA
EXCESSO DE SANGUE
CONTAMINAÇÃO POR TALCO
CONTAMINANTES
DEPÓSITOS DE CRISTAIS
GRÃOS DE PÓLEM
CONTAMINAÇÃO POR FUNGOS
PREVENÇÃO DO CÂNCER 
GENECOLÓGICO
PREVENÇÃO DO CÂNCER 
GENECOLÓGICO
FOLDER PARA ORIENTAÇÃO DA 
MULHER
FOLDER PARA ORIENTAÇÃO DA 
MULHER
Quais as 
mulheres que 
devem se 
submeter ao 
exame?
Quais as 
mulheres que 
devem se 
submeter ao 
exame?
O exame é
doloroso?
É demorado?
O exame é
doloroso?
É demorado?
O que é o 
exame 
preventivo do 
câncer de 
útero?
O que é o 
exame 
preventivo do 
câncer de 
útero? É um exame em 
que é coletado o 
material do útero 
e da vagina,
posteriormente 
colocado numa 
lâmina de vidro e 
examinado ao 
microscópio. 
É um exame em 
que é coletado o 
material do útero 
e da vagina,
posteriormente 
colocado numa 
lâmina de vidro e 
examinado ao 
microscópio. 
Quais os 
cuidados que 
devo ter antes de 
fazer o exame?
Quais os 
cuidados que 
devo ter antes de 
fazer o exame?
Qual serviço 
procurar?
Qual serviço 
procurar?
Após o 
exame, o que 
fazer?
Após o 
exame, o que 
fazer?
Quando devo 
fazer este 
exame 
novamente?
Quando devo 
fazer este 
exame 
novamente?
Outras doenças 
podem ser 
encontradas 
durante o exame?
Outras doenças 
podem ser 
encontradas 
durante o exame?