Cultura de celulas 13 04

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Renata Miliani Martinez - UNISO
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Cultura de células
É o processo pelo qual células são mantidas vivas e em crescimento fora de seu tecido original em condições controladas
É possível fazer culturas de tecidos vegetais, animais e humanos
Para iniciar o processo é necessário fazer a desagregação (mecânica ou enzimática) do tecido original para que as células sejam cultivadas em uma camada aderente, substrato sólido ou suspensão em meio de cultura
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Aplicações cultura de células
Bioengenharia
Diferenciação celular
Metabolismo celular
Interação celular
Terapia celular
Transplante de tecidos
Produção de hormônios
Diagnóstico laboratorial
Produção de vacinas
Estudos de biocompatibilidade
Estudos e análises de citotoxicidade
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Histórico cultura de células
Hoje
Séc XIX
Roux: cultivo de céls procarióticas não aderentes
1907: Harrison manteve crista neural de sapo 
em linfa coagulada por 1 semana
Início das precauções assépticas
1912: Alex Carrel ganhou prêmio Nobel por descobrir que
 a troca de meio de cultura prolongava o tempo de 
vida das células
1916:Peyton Rous e Fred Jones criam método de subcultivo 
utilizando tripsina em tecidos de aves e mamíferos
1923: Carrel e colaboradores desenvolvem os primeiros
 frascos de cultura
1948: Keilova introduz produção de antibi[oticos em cultura
1952 - 1959: Eagle, Sanford e Leibovitz, Dulbecco desenvolvem 
meios básicos de cultura
1952: George Gay introduz primeira linha de linhagem imortal 
Henrietta Lacks (células HeLa de carcinoma de útero humano)
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Necessidades para cultura de células
Biossegurança
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Necessidades para cultura de células
Infra estrutura
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Necessidades para cultura de células
Contaminação
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Produtos de mercado baseados em cultura de células
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Valor do mercado de cultura de células
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Mercado de produtos biotecnológicos – cultura celular
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Biotecnologia x Síntese orgânica
Fonte: Angela Jozala
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Cultivo de células vegetais
Geralmente são cultivados tecidos vegetais
Ferramenta utilizada no melhoramento vegetal
Aplicações: multiplicação de material genético (troca e avaliação do germoplasma), produção de mudas livres de vírus, aumento da variabilidade genética
Fonte: Embrapa
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Clonagem vegetal
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Fatores que afetam a regeneração vegetal in vitro
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Variedades de uma mesma espécie respondem de maneira diferente às condições de cultivo
Fatores que afetam a regeneração vegetal in vitro
Genótipo
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A capacidade da regeneração depende da maturidade, do estado fisiológico e do tecido utilizado
Geralmente, tecidos jovens e em crescimento são usados como boas fontes de explantes (folhas jovens)
Fatores que afetam a regeneração vegetal in vitro
Fonte do explante
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Fatores que afetam a regeneração vegetal in vitro
Condições de cultura
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Etapas e vias de regeneração in vitro
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Cultivo de células animais e humanas
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Pontos críticos no preparo de meio de cultura
Água ultra pura obtida no dia
Dissolver individualmente por completo cada ingrediente
pH aferido após todos os suplementos inclusive o soro
Operador
Fonte de contaminação (micoplasma)
Uso de EPIs
Sala apropriada sem circulação
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Cultivo de células animais
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Evolução típica de uma linhagem celular
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Importante para culturas celulares
Manutenção da assepsia, evitando contaminação uso de antibióticos
Controle apropriado do pH e temperatura 
Troca eficiente de gases e manutenção eficiente do nível de O2 
Suprimento adequado de nutrientes, hormônios e fatores 
Suporte para adesão celular 
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Células aderentes x não aderentes
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Fonte: Angela Jozala
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Biossegurança
Células animais devem ser manipuladas usando-se as práticas e a contenção do nível de biossegurança 2. 
O trabalho deve ser realizado em cabine de segurança biológica, e todo o material deverá ser descontaminado antes do descarte. 
A contenção secundária é obtida mediante a combinação de elementos relacionados à infraestrutura laboratorial. 
Deve ser preparado um procedimento com as especificações das atividades realizadas e todo pessoal deve ser orientado sobre os possíveis riscos e para a necessidade de seguir as especificações de cada rotina de trabalho, os procedimentos de biossegurança e práticas de segurança