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Estudo para microbiologia: * CONTAGEM DE BACTÉRIAS - UFC/mL amostra UFC/mL amostra = | 1mL -> nº de colônias x diluição (+) | 0,1mL -> nº de colônias x diluição (+) x 10 Spread plate – colônias crescem por cima (Meio de cultura + amostra por cima) Pour plate – colônias crescem por cima e no interior (Amostra + meio de cultura por cima) Morfologia bacteriana: Peptona -> Fonte de nitrogênio, é um tipo de substrato. Ágar-ágar - > Solidificar o meio de cultura. Temperatura de fusão 100ºC. Temperatura de solidificação: 45ºC. Classificação do meio quanto a consistência: Sólido, semi-sólido, líquido. Classificação do meio quanto a composição química: - Meio sintético ou quimicamente definido: todos os componentes e quantidades são conhecidos; - Meio complexo: contém componentes cuja composição não é precisa. Exemplos: extrato de carne, extrato de levedura, peptona, sangue, leite, etc. Classificação do meio quanto ao uso: - Meio de uso geral(Meio básico): Permite o crescimento da maioria dos microrganismos presentes na amostra; - Meio de enriquecimento: Favorece o crescimento de um microrganismo específico através da adição de determinados compostos; - Seletivo: Favorece o crescimento de determinados microrganismos através da adição de agentes inibidores que impedem o desenvolvimento de outros; - Diferencial: Permite a distinção de microrganismos através de reações ou produção de estruturas; Coloração de Gram Gram positivas - > CORADAS EM ROXO OU AZUL, GERALMENTE “COCOS”. Gram negativas - > CORADAS EM VERMELHO, GERALMENTE “BACILOS”. Ordem: Cristal violeta, água, lugol, álcool, água, fucsina, água. Funções: - Cristal violeta: Cora as bactérias gram positivas e negativas. - Lugol: Fixa os corantes. - Álcool: Descolore as gram negativas. - Fucsina: Cora as gram negativas. Óleo de imersão: Aumenta o índice de refração, serve como uma lamínula. Tabela do nitrato: Bactéria NO3 NO2 NH3 A - + - Reduziu B - + + Reduziu C + - - Não reduziu D + + + Reduziu E + - + Reduziu F - - - Assimilou G - - + Reduziu Vidrarias: Nome da vidraria e função! Ex: Garrafa de Roux – Serve para o preparo de meio de cultura. Tipos de fungos e suas estruturas: - Pluricelulares (Filamentosos) - Unicelulares (Leveduras) Preparo de lâminas de fungos filamentosos Colônia de fungo em meio de cultura ou, sobre um substrato – uso da alça de platina em forma de “L, retirando um fragmento profundo da colônia; Colônia de fungo em meio de cultura, sobre um substrato ou crescimento sobre a superfície – uso da fita adesiva MONTAGEM DE LÂMINAS - Azul de algodão: Para fungos que apresentam micélio claro; - Agente clarificante (NaOH ou KOH - 30%): Para fungos que apresentam micélio escuro. - Cultivo de fungos em Lâminas e em tubo(?) Aspergillus niger Penicillium Hifas septadas, estípede, vesícula, fiálide e conídios. (Aspergillus spp) Hifas septadas, estípede, ramos, fiálides e conídios. (Penicillium spp) - Azul de metileno: Identificar fungos viáveis. - Extrato de leveduras: É fonte de vitaminas do complexo B. Métodos de isolar bactérias aeróbicas e anaeróbicas. - Isolamento e manutenção de bactérias anaeróbias Meios contendo agentes redutores que proporcionam ambiente anaeróbico. Exemplos: Meio Tioglicolato (tioglicolato sódico e cisteína) Ágar Azida ou ágar azida sangue (azida sódica) Ágar para anaeróbios seg. Brewer (tioglicolato sódico, sulfoxilatoformaldeído e cistina) Isolamento de bactérias anaeróbias Técnica Gaspak | Isolamento de bactérias anaeróbias Técnica Zeissler Conceitos importantes (talvez não caia na prova) - Esterilização: destruição de todas as formas de vida microbiana, incluindo os endósporos. - Desinfecção: destruição de todas as formas de microrganismos patogênicos de uma superfície morta. - Antissepsia: destruição de microrganismos de uma superfície viva. - Assepsia: conjunto de técnicas necessárias para não deixar que um microrganismos penetre num local que não o contenha. Tipos de esterilização: - Forno Pauster: 180ºC A 200ºC POR 1:30 horas - Pasteurização * Aquecimento a 63 ºC/30min - pasteurização baixa; * Aquecimento a 72 ºC/25seg - pasteurização alta ou relâmpago. - Tindalização * Aquecimento a 63 ºC/30min em intervalos de 24 horas por três dias consecutivos. - Autoclavação * Esterilização na autoclave: 120 ºC por 15 a 20 minutos Alguns testes bioquímicos de identificação Redução de nitrato Produção de enzimas: Urease Gelatinase Caseinase Amilase Celulase Catalase Prova do SIM (sulfeto de hidrogênio, indol e motilidade) Fermentação de carboidratos Assimilação de carboidratos
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