ESTUDO DIRIGIDO DE MICROBIOLOGIA AV1

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ESTUDO DIRIGIDO DE MICROBIOLOGIA AV1
INTRODUÇÃO A MICROBIOLOGIA
1. Quais são os grupos de seres que o estudo da microbiologia inclui?
Archaea, Bacteria e Eukarya
2. Cite características dos domínios Archaea, Bacteria e Eukarya.
Archaea; organismos geralmente quimiotróficos e procariontes, que não possuem membrana nuclear.
Bacteria; organismos unicelulares e procariontes que anteriormente eram classificados como eubactérias
Eukarya; organismos eucariontes, ou seja, que possuem núcleo delimitado por membrana nuclear.
3. Explique a importância dos microrganismos, ressaltando suas funções na natureza.
Bactérias; Produtores de antibióticos e antifúngicos / Fixadoras de nitrogênio/Controle biológico/ Produtores de alimentos: iogurte/Produtores de ácidos e vitaminas/Sintetizadores de hormônios por engenharia genética
Algas; fotossintetizantes
Vírus; Controle biológico/Engenharia genética (vetores de terapia genética)
Microrganismos marinhos; Base da cadeia alimentar
Fungos; Produtores de alimentos: queijos, cerveja, pão, vinho, rum, uísque/Produtores de antibióticos e antifúngicos/ Maiores decompositores do planeta/Controle biológico
4. Conceitue patógeno, patogenicidade, virulência, infecção, prevalência, incidência, epidemia, pandemia e endemia.
• Patógeno→ Agente biológico capaz de causar doenças.
• Patogenicidade→ Capacidade de um agente biológico causar doença em um hospedeiro suscetível.
• Virulência→ é a capacidade patogênica de um microrganismo, medida pela mortalidade que ele produz e/ou por seu poder de invadir tecidos do hospedeiro.
• Infecção→ invasão de uma espécie estranha em um organismo hospedeiro. O agente infectante procura utilizar os recursos do hospedeiro para se multiplicar (com evidentes prejuízos para o hospedeiro).
• Prevalência→ número total de casos, ou proporção de casos, existentes numa determinada população e num determinado momento temporal.
• Incidência→ número de novos casos surgidos numa determinada população e num determinado intervalo de tempo;
• Epidemia→ é quando uma doença se desenvolve num local de forma rápida (fazendo várias vítimas), num curto intervalo de tempo.
• Endemia → é qualquer doença que ocorre apenas em um determinado local ou região, não atingindo nem se espalhando para outras comunidades.
• Pandemia → epidemia a nível mundial
5. O que significa taxonomia bacteriana e quais são seus níveis de organização?
É a área da Microbiologia que estuda: Classificação; Nomenclatura; Identificação bacteriana. Conceito: divisão sistemática de organismos em grupos relacionados por características similares. “Espécie”: menor e mais definitivo nível de divisão; As espécies estão reunidas em gêneros; Os gêneros em famílias; As famílias em ordens; As ordens em classes.
6. Quais são as características usadas para a classificação dos microrganismos?
– Genotípicas; Tem o objetivo de determinar o grau de parentesco entre as moléculas de DNA das amostras em classificação. Proporção “citosina-guanina” na molécula de DNA através de testes de biologia molecular; Sequenciamento; Análise do RNA 16S.
– Fenotípicas: Morfológicas, Coloração; Estruturais; Nutritivas; Metabólicas; Sensibilidade a antibióticos.
7. Quais são os critérios a serem obedecidos para a nomenclatura dos microrganismos?
– Taxon ou Taxa→ família, gênero e espécie
– É regida pelo código internacional de nomenclatura bacteriana: Manual de Bergey
– Os taxon são construídos da mesma maneira, o que permite a comunicação entre microbiologistas e outros profissionais.
– Todos os nomes em latim ou latinizados;
– 1a palavra (gênero) é sempre escrita com inicial maiúscula;
– 2a palavra (espécie) escrita em minúscula;
– O nome do gênero e da espécie, conjuntamente referidoscomo a espécie, são sublinhados ou italianizados;
– Ex: Staphylococcus aureus ou Staphylococcus aureus
8. Explique como se dá a identificação dos microrganismos, citando os critérios e análises usados.
• A identificação se dá através do isolamento e uso prático de um esquema de classificação.
• É verificar o tipo de espécie ou outra categoria presente na amostra a ser analisada.
• O processo de identificação primeiro assume que a bactéria de interesse já tenha sido descrita. – De modo geral, são usados dois sistemas de identificação: Chaves e Tabelas
• Morfologia celular (forma, tamanho e organização das células);
• Características de coloração (Gram);
• Motilidade;
• Presença ou ausência de esporos;
• Características de crescimento (condições atmosféricas, velocidade, temperatura,etc);
• Características bioquímicas (presença de certas enzimas);
• Testes sorológicos;
• Análise dos produtos metabólicos finais;
• Análises genéticas com sondas de ácido nucléicos.
CITOLOGIA E MORFOLOGIA BACTERIANA
1. Descreva as diferenças entre seres procariontes e eucariontes.
As células procariontes, ou procarióticas, são organismos sem um núcleo de célula ou qualquer outra organela ligada à membrana. Seu material genético fica disperso no citoplasma, e a maioria dos seres procariontes é unicelular, apesar de alguns procariotas serem multicelulares. As células eucariontes, ou eucariotas, são organizadas em estruturas complexas por membranas internas e um citoesqueleto. A estrutura mais característica da membrana é o núcleo.
2. Cite as estruturas essenciais e acessórias da célula bacteriana.
Cápsula, Parede celular, Mesossomas, Cromossomas, Plasmídeo, Membrana Celular, Flagelo, Ribossomo, Pili, Esporos, Grânulos de reserva 
3. Caracterize e cite a função das seguintes estruturas da célula bacteriana:
a) Nucleóide; estão localizadas no interior do núcleo, onde acontece a síntese de ribossomos; 
b) Plasmídios; são moléculas duplas de DNA que armazenam material genético;
c) Ribossomos; são estruturas celulares responsáveis pela produção de proteínas;
d) Grânulos metacromáticos; volutina
e) Grânulos de polissacarídeos;glicogênio e amido 
f) Grânulos de polihidroxibutirato; pseudomas
g) Vacúolos de gás; flutuação
h) Magnetossomos; contem oxido de ferro 
i) Membrana plasmática; é responsável por envolver o citoplasma da célula e regula o fluxo de substâncias dentro e fora dela;
j) Mesossomas; invaginação da membrana citoplasmática, 
k) Parede celular; cobertura externa que protege a célula bacteriana e dá a sua forma; 
l) Cápsula; cobertura externa adicional que protege a célula, que impede a desidratação e favorece a adesão às superfícies;
m) Glicocálice; substancias poliméricas intracelulares formando uma estrutura amorfa frouxamente ligada a parede celular
n) Flagelos; ajudam na locomoção da célula;
o) Pili (fímbrias); apêndices superficiais rígidos compostos de proteína 
p) Endosporos; células especializadas de repouso, altamente resistente á dessecação, ao calor e reagentes químicos
3. Descreva as diferenças entre a parede celular de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas.
As bactérias Gram-positivas retêm o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa. Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final.
4. Descreva a parede celular de micobactérias.
Possuem a forma de bacilos retos ou levemente curvado, sem a presença de flagelos ou de cápsula, além de não ter formação do endosporo. Apesar das micobactérias não possuírem membrana externa e, por isso, se assemelharem às gram-positivas, seu alto teor lipídico confere diferenças estruturais importantes na parede.
5. Cite exemplos de bactérias que não possuem parede celular.
São as Gram-negativas, como as Pseudomonadáceas, as Enterobactérias, etc. Os micoplasmas são bactérias que não apresentam parede celular e são muito pequenas (entre 0,1 e 0,25 µm)
6. Descreva os variados tipos de morfologia bacteriana.
As bactérias apresentam vários tipos morfológicos,sendo os mais vulgares os cocos (forma esférica), os bacilos (forma de bastonete), os espirilos (forma espiralada) e os vibriões (forma de vírgula), espiroqueta 
CONTROLE DO CRESCIMENTO MICROBIANO
1. Explique por que a necessidade de controlar o crescimento microbiano.
Prevenir a transmissão de doenças, evitar a decomposição de alimentos, evitar a contaminação da água e do ambiente.
2. Defina esterilização, desinfecção, anti-sepsia, degerminação e sanitização.
ESTERILIZAÇÃO: - Destruição de todas as formas de vida microbiana, incluindo os endósporos (formas mais resistentes); - Método mais comum: Aquecimento; - Esterilização comercial: tratamento de calor suficiente para matar os endósporos do Clostridium botulinum nos alimentos enlatados.
DESINFECÇÃO: Normalmente se refere a destruição dos patógenos vegetativos e não dos endósporos. Métodos:- substâncias químicas - radiação ultravioleta - água fervente – vapor. Na prática: utilização de produtos químicos para tratar uma superfície ou substância inerte (desinfetantes)
ANTI-SEPSIA: Quando este tratamento é para um tecido vivo. Anti-Sépticos: menos tóxicos que os desinfetantes
MODIFICAÇÕES DA DESINFECÇÃO: (A) DEGERMINAÇÃO: remoção mecânica dos microrganismos, em vez da morte, em uma área limitada. (B) SANITIZAÇÃO: Processo que leva à redução dos microrganismos, a níveis seguros, de acordo com os padrões de saúde pública (elimina 99,9% das formas vegetativas). Minimiza as chances de transmissão doença de um usuário para outro.
3. Cite os fatores que influenciam no tratamento microbiano.
Tamanho da população; Características microbiana; Concentração do agente; Tempo de exposição; Temperatura; Condições ambientais
4. Cite as ações dos agentes de controle microbiano frente a célula microbiana.
ALTERAÇÃO DA PERMEABILIDADE DA MEMBRANA: Lesão aos lipídios e proteínas da membrana: - Causa o vazamento do conteúdo celular no meio (agentes químicos e antibióticos).
DANOS ÀS PROTEÍNAS E AOS ÁCIDOS NUCLÉICOS: Proteínas: - Desnaturação = rompimento de ligações covalentes e pontes de hidrogênio (certos produtos químicos e calor). DNA, RNA:lesão por calor, radiação ou substâncias químicas são letais para a célula.
5. Cite os exemplos de métodos físicos e explique as ações de cada um deles.
1. CALOR: - MATA OS MICRORGANISMOS DESNATURANDO SUAS ENZIMAS; - A RESISTÊNCIA AO CALOR VARIA DE ACORDO COM O MICRÓBIO:
A) CALOR SECO: morte dos microrganismos por oxidação. Incineração materiais de hospital contaminado. Flambagem: esterilização de alça de inoculação. Estufa: esterilização de vidraria (170oC/2 horas)
B) CALOR ÚMIDO: - Desnaturação das proteínas por quebra de pontes de H; - ESTERILIZAÇÃO POR CALOR ÚMIDO:- Fervura (100 oC). – Vapor. - Autoclave
FERVURA: • Não inativa endosporos e alguns vírus. Mata formas vegetativas bacterianas, os fungos e quase todos os vírus
VAPOR DE FLUXO LIVRE (NÃO PRESSURIZADO) • Equivalente a água fervente Um tipo do vírus da hepatite pode sobreviver a até 30 min de fervura e alguns endosporos bacterianos resistem à fervura por mais de 20 h.
AUTOCLAVE: • Esterilização mais confiável: temperatura acima da água fervente (através do vapor sob pressão); • Quanto maior a pressão na autoclave > a temperatura; • 121oC, 15min, 1 atm. • Material cirúrgico, meios de cultura, material odontológico Autoclave
PASTEURIZAÇÃO: Louis Pasteur: método prático de prevenir a deterioração da cerveja e vinho através de um aquecimento leve (suficiente para matar microrganismos que causavam a deterioração sem alterar o sabor do produto). - Principalmente utilizado na Indústria de Laticínios. - Teste de eficiência: atividade da fosfatase (enzima presente no leite que após a pasteurização deve estar inativada). - Elimina bactérias patogênicas e quase todos os vírus patogênicos
PASTEURIZAÇÃO: - Lenta: • 63 oC por 30 min (elimina 95% das bactérias). • Altera pouco o leite. - Pasteurização de Alta Temperatura e Curto Tempo (HTST – high – temperature short-time): • 72 oC por 15-20 s (eficiência de 99,5% na redução bacteriana) • Alteração pouco maior no leite
PASTEURIZAÇÃO: - Ultra High Temperature (UHT) – Processo Longa Vida: 130o -150oC C/3-5 s; Alta eficiência (> 99,99%); Elimina todas as formas vegetativas das bactérias, mas não todos os esporos; Alteração do sabor (“cozido”); Perdas de nutrientes; Alteração da fração protéica UHT: efeito sobre as Proteínas Esterilização – altas temperaturas: • 120oC/10 min; • Elimina todas as formas de microrganismos, inclusive esporos • Carameliza o leite, torna-o escuro • Sem uso comercial no Brasil
2. FILTRAÇÃO: • Passagem de um líquido ou gás por uma membrana ou tela, com poros pequenos o suficiente para reter os microrganismos. - Filtro de Partículas de Ar de Alta Eficiência (HEPA – high efficiency particule air). Ex: salas de hospitais com pacientes queimados (0,3 μm). - Filtro de Membrana – compostos por ésteres de celulose ou polímeros plásticos (normalmente usa-se filtro de 0,2 μm). 
3. BAIXAS TEMPERATURAS: - Depende do tipo de microrganismo e da intensidade de aplicação. - Diminuição/interrupção do metabolismo celular. Refrigeradores comuns (0 – 7 oC) = Psicrófilos. A maioria dos patógenos humanos não crescem. Congelamento – 50 a – 95oC
4. RESSECAMENTO: • Os microrganismos não crescem ou se reproduzem, mas podem permanecer viáveis por anos (EX: Técnica de liofilização) • Formas de resistência (endosporos/esporos), alguns vírus e micobactérias.
5. RADIAÇÃO: Lesão do DNA – formação de radicais livres muito reativos: - Radiação Ionizante - Radiação não-ionizante. RADIAÇÃO IONIZANTE: - Radiações de pequeno comprimento de onda: alta energia e penetrabilidade. - Raios Gama, raios X ou feixes de elétrons de alta Energia. - Lesão do DNA – formação de radicais livres muito reativos. - Fármacos, soro, vacinas e material médico. RADIAÇÃO NÃO - IONIZANTE: - Ondas curtas - Luz Ultravioleta (UV): comprimento de onda de 260 nm o mais eficiente. - Ar em ambientes fechados Desvantagem - apresenta baixa penetrabilidade (não atravessa vidros, filmes escuros e outros materiais).
6. Cite os exemplos de métodos químicos e explique as ações de cada um deles.
Usados para controlar o crescimento de microrganismos em ambos os tecidos vivos e os objetos inanimados (DESINFETANTES).
AGENTES QUÍMICOS: • Dificilmente se obtém a esterilidade • A maioria reduz a população microbiana em níveis seguros ou removem as formas vegetativas dos patógenos.
PROBLEMA: ação dos agentes é diferente para cada micróbio.
CARACTERISTICAS DOS AGENTES QUIMICOS 
- Alta toxicidade para os microrganismos
- Solúvel em água
- Estabilidade elevada
- Inócuo para o homem e animais
- Ausência de afinidade por matéria orgânica estranha
- Toxicidade para os microrganismos em temperatura ambiente
- Capacidade de penetração
- Não ser corrosivo e nem manchar
- Desodorante
- Detergente
TIPOS DE DESINFETANTES:
1. Fenol e Compostos Fenólicos
2. Biguanidas
3. Halogênios
4. Álcoois
5. Metais Pesados e seus compostos
6. Agentes de superfície
7. Compostos de Amônio Quaternário
8. Antibióticos
9. Aldeídos
10. Quimioesterilizantes Gasosos
11. Peroxigênios (Agentes oxidantes)
FENOL (ácido carbólico) E DERIVADOS FENÓLICOS - Hoje em dia pouco uso! (Irritantes para a pele e odor desagradável). Ação: lesam a membrana plasmática, inativam as enzimas e desnaturam as proteínas.
BIGUANIDAS- Clorexidina; - Frequentemente utilizada no controle microbiano da pele e mucosas (anti-séptico). - Efetiva para a maioria das bactérias vegetativas e fungos, mas não é esporicida. - Atividade não é afetada por matérias orgânicas - Início de ação:15 segundos após o contato com a pele ou mucosa, mantendo efeito residual por 6 horas. Efeito bactericida: destruição da membrana celular e precipitação dos componentes internos da célula microbiana
HALOGÊNIOS- Particularmente Iodo e Cloro (agentes antimicrobianos efetivos) • Iodo (I2) possui ação bactericida, fungicida, virucida e ação residual. - Álcool iodado (1% a 2% de iodo e iodeto de potássio em 70% de álcool). - Iodóforo (polvidona-iodo): desinfecção da pele e tratamentode féridas Mecanismo do I2: inibição da síntese protéica • Cloro (Cl2) atua como gás ou em combinação com outras substâncias químicas. - Ação germicida é causada pelo ácido hipocloroso (HOCl) quando adicionado à água. É um forte oxidante que impede o funcionamento de boa parte do sistema enzimático celular.
METAIS PESADOS E SEUS COMPOSTOS - Bastante utilizados como germicidas ou anti-sépticos. - Prata, Mercúrio, Cobre e Zinco. - Ação Oligodinâmica (oligo = pouco) = < [metais] - > atividade Antimicrobiana - Nitrato de Prata 1 %, Cloreto de Mercúrio, Sulfato de Cobre, Cloreto de Zinco. Mecanismos de ação: causam a desnaturação de proteínas.
AGENTES DE SUPERFÍCIE- Agentes de superfície (tensoativos ou surfactantes) podem reduzir a tensão superficial entre as moléculas de um líquido. - Sabão: pouco valor anti-séptico (mais importante na remoção mecânica através da esfregação). - Detergentes (ácido-aniônico): a porção carregada (ânion) da molécula reage com a membrana plasmática (atuam sobre um amplo espectro de micróbios e não são tóxicos). 
ANTIBIÓTICOS - Controle microbiano através da ingestão ou aplicação superficial. Usados para o tratamento de doenças. - Alguns antibióticos são utilizados para controle de produtos (Conservação de alimentos) Nisina: adicionada ao queijo para inibir o crescimento de certas bactérias da deterioração formadoras de endósporos. Natamicina: antibiótico antifúngico aprovado para uso em alimentos, principalmente para queijo
MEIO DE CULTURA E TÉCNICAS DE SEMEADURA
1. Defina meio de cultura e cite sua finalidade.
◦ Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o crescimento bacteriano, em condições de laboratório.
◦ A maioria das bactérias pode ser cultivada em laboratório, utilizando-se meios nutrientes;
◦ Diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente quanto as exigências mínimas de substâncias nutrientes; Sobrevivência microbiana/Crescimento microbiano/Semear- proporcionar o crescimento do microrganismo em meio de cultura/Estéril/Composição química ◦ Varia; ◦ Substâncias: orgânicas e inorgânicas
2. Diferencie meios líquidos, semi-sólidos e sólidos.
Sólidos: ágar 1 a 2% / Semi-sólidos 0,5% de ágar – Ágar 100°C- fusão 30° a 40°C- sólido
•Ativação das culturas
•Repiques de microrganismos
•Provas bioquímicas.
•Em tensões variadas de oxigênio;
•Verificação da motilidade;
•Conservação de culturas;
3. Explique como ocorre o preparo de um meio de cultura em laboratório, sua esterilização e posterior distribuição em vidrarias.
 Pesa-se o meio de cultura e hidrata-se com H2O destilada (usualmente coloca-se apenas uma parte do volume de água, mede-se o pH e, acerte-o se necessário, e então completa-se o volume final);
 Esteriliza-se o meio pelo calor úmido em autoclave (121C por 15 minutos), ou filtração quando algum componente é termo sensível.
 Distribuir o meio de cultura pronto em placas ou tubos, previamente esterilizados.
4. Diferencie meios artificiais e naturais, e cite exemplos.
Artificiais ou sintéticos; ◦ quimicamente definidos/◦ utilizados para trabalhos experimentais em laboratório/◦ EX: 
Componente QTDE
Glicose 5,0 g
Fosfato de Amônia (NH4N2PO4) 1,0 g
Cloreto de Sódio 5,0 g
Sulfato de Magnésio (MgSO4) 0,2 g
Fosfato Dibásico de Potássio (K2HPO4) 1,0 g
Água 1,0 litro
Naturais ou Complexo; ◦ Componentes: fonte de C, N, vitamina, sais minerais/◦ Utilizados para trabalhos experimentais em laboratório/◦ EX:
Componente QTDE
Peptona 5,0 g
Extrato de Carne 3,0 g
Cloreto de Sódio 8,0 g
Ágar 15,0 g
Água 1,0 litro
5. Diferencie meios simples e especiais, e cite exemplos.
Simples – sem exigência nutricional / Ex: Caldo e ágar nutriente
Especiais – cumprem exigências vitais / Ex: ágar sangue
6. Diferencie meios de enriquecimento, diferenciais e seletivos, e cite exemplos.
Enriquecimento – estimula o crescimento de determinado microrgansimo:
◦ Crescimento lento;
◦ Exigentes;
◦ Fastidiosos (dificuldade de nutrição)
EXEMPLO; Caldo tioglicolato (aneróbios)/ Caldo Tetrationato (Salmonella)
Diferencial – separa os grupos de microrganismos:
◦ Facilita identificação das colônias
◦ Ex: ágar sangue
Seletivo – Impede o crescimento de bactérias não desejadas e favorece o crescimento das bactérias de interesse
◦ Ex: ágar Salmonella-Shigella
7. Cite exemplos de alguns meios de cultura usados para bactérias, descrevendo a finalidade deles.
O agar sangue é utilizado em laboratórios de análises clínicas como cultivo primário para o isolamento de Streptococcus spp e Staphylococcus spp.;
Ágar Cled (Cystine Lactose Electrolyte Deficient) Não seletivo, porém é diferencial; Destinado ao isolamento, cultivo e contagem de colônias em amostras de urina; Permite a identificação de bactérias fermentadoras da lactose devido a mudança de coloração do meio de verde para amarelo.
Mac Conkey - É um meio seletivo e diferencial para isolamento de Enterobacteriaceae e bacilos Gram negativos entéricos; Sais biliares e cristal violeta: inibição de gram(+) e gram(-) fastidiosos. Lactose é o único carboidrato.
Ágar Salmonella Shigella - Altamente Seletivo / Formulado para inibir a maioria dos coliformes e permitir o crescimento de Salmonella e Shigella a partir de fezes, urina e alimentos frescos ou enlatados / As concentrações de sais biliares e citrato de sódio inibem todas as bactérias g (+) e coliformes;
Ágar Chocolate - Meio Enriquecido/ Cultivo de organismos fastidiosos, como Neisseria sp., Haemophilus sp.e outros germes exigentes/ Para o isolamento de Haemophilus adiciona-se antibióticos (ex: bacitracina); Aparência: marrom/ Adicionado de sangue 80Oc.
Ágar Müeller Hinton - Finalidade: Realização de antibiograma (teste de sensibilidade) pela
técnica de difusão de discos segundo o CLSI / É rico em proteínas e carboidratos que fornece o substrato ideal para o desenvolvimento e crescimento de cepas bacterianas de interesse clínico / Aparência: Âmbar claro
Ágar Müeller Hinton + Sangue - Finalidade: Facilitar o crescimento de microrganismos fastidiosos / Streptococcus sp.
Lowenstein-Jensen - Componentes: ovos inteiros coagulados, sais definidos, glicerol e fécula de batata; agente inibidor = verde malaquita (Gram +); Meio para o isolamento de Mycobacterium tuberculosis.
Meios Cromogênicos - A identificação presuntiva é baseada nas diferentes colorações das colônias bacterianas, causada pelas reações enzimáticas espécie ou gênero específico com substratos incorporados no meio de cultura
Caldo BHI - Meio de enriquecimento; permite o crescimento da maioria das bactérias.
Caldo Tioglicolato - Meio enriquecido, adicionado de hemina e vitamina K; não inibidor; permite um bom desenvolvimento de todos anaeróbios encontrados com frequência em amostras biológicas.
8. Descreva os seguintes processos de semeadura de bactérias: esgotamento, contagem semi-quantitativa, e tapete.
Semeio por esgotamento = obtenção de colônias isoladas. Contagem semi-quantitativas =
alça calibrada de 0,001. Semeadura em tapete para teste de sensibilidade.
9. Logo após a semeadura de bactérias em placas ou tubos, explique onde guardar estes materiais e em que condições são submetidos para favorecer o crescimento bacteriano.
Estufa Bacteriológia 35-37°C por 24-48h
COLORAÇÃO DE BACTÉRIAS
1. Explique o que são métodos de coloração simples e diferenciais e qual a finalidade deles.
Simples: Apenas 1 corante; Morfologia; Ex: Azul de metileno
Diferenciais: 2 corantes; Morfologia e Reação tintorial; Ex: Método de Gram e Método de Ziehl-Neelsen
2. Explique como preparar a lâmina com bactérias para o Método de Gram (preparo do esfregaçoe fixação).
Espalhar a cultura em uma camada fina sobre a lâmina, secar ao ar, passar a lâmina sobre a chama para a fixação
3. Descreva todas as etapas do Método de Gram, explicando o que ocorre para que ao final da técnica as bactérias apresentem cores diferenciadas.
1. Preparo da Lâmina e Fixação: 2. Cobrir a lâmina com uma solução de cristal violeta por 1 minuto; 3. Retirar em água corrente; 4. Cobrir a lâmina com solução de iodo Formação do complexo cristal violeta – iodo; 5. Retirar em água corrente; 6. Cobrir a lâmina com o descorante álcool- acetona por alguns segundos; 7. Retirar em água corrente; 8. Cobrir a lâmina com o corante safranina; 9. Retirar em água corrente.
4. Cite como as bactérias podem ser classificadas pelo Método de Gram, citando a cor que cada tipo apresenta. E além da cor diferenciada, diga o que mais pode ser verificado no microscópio ao observar as estruturas bacterianas.
Gram-positivos (roxo), Gram-negativos (rosa). Cocos em Cadeia Gram-positivos, Bacilo Gram-negativos
5. Porque existe a necessidade de acrescentar uma gota de óleo de imersão na objetiva de 100x de aumento para observar bactérias no microscópio óptico?
Sem o óleo a maioria da luz é refletida e perdida 
6. Explique a finalidade do Método de Ziehl-Neelsen.
Através do método de Ziehl-Neelsen é possível visualizar BAAR e distinguí-los de outros achados bacterianos.
7. O que significa a expressão: bactérias álcool-ácido resistentes (BAAR)? Cite exemplos.
Ácido-álcool resistência ou álcool-ácido resistência é a propriedade físico-química de algumas bactérias à resistência à descoloração da fucsina básica (vermelha) a qual penetra na célula por ação do fenol e do calor. Usa-se a característica de ácido-álcool resistência para a identificação de organismos patológicos, entre eles o Mycobacterium leprae.
8. Descreva as etapas do Método de Ziehl-Neelsen.
1. Adição de carbolfucsina e posterior aquecimento da lâmina com bico de Busen; 2. Retirar em água corrente; 3. Cobrir a lâmina com o descorante álcool-ácido por alguns segundos; 4. Retirar em água corrente; 5. Cobrir a lâmina com o contra corante azul de metileno; 6. retirar
METABOLISMO E CRESCIMENTO BACTERIANO
1. Defina metabolismo e os dois tipos de reações que o caracterizam.
METABOLISMO - grego: metabole = mudança, transformação. Soma de todas as reações químicas em um organismo vivo.
São de dois tipos gerais: Aquelas que envolvem a liberação/produção de energia com a quebra de compostos complexos em compostos mais simples: CATABOLISMO. Ex: Reações de Hidrólise. Aquelas envolvidas na utilização da energia para a construção de moléculas complexas a partir de moléculas mais simples: ANABOLISMO. Ex: Reações de síntese por desidratação.
2. Descreva o papel da molécula de ATP no processo metabólico.
Requerimento de Energia
- Síntese dos componentes celulares: parede, membrana, etc.
- Síntese de enzimas, ácidos nucléicos, polissacarídeos, etc.
- Reparos e manutenção da célula.
- Crescimento e multiplicação.
- Acumulação de nutrientes e excreção de produtos indesejáveis.
- Motilidade.
3. Descreva o papel das enzimas no metabolismo, sua estrutura e fatores que podem influenciar na sua atividade.
Enzimas:
- Podem aumentar a velocidade das reações químicas
- São catalizadores
- Específicas (Cada uma atua em um substrato específico)
- Apoenzima (Parte proteica) + Cofator (Íon metálico ou molécula orgânica complexa Coenzima) = Holoenzima (Enzima completa)
- Fatores que influenciam a atividade das enzimas:
- Temperatura
- pH
- Concentração do substrato
- Inibidores
4. Cite diferenças entre a respiração aeróbica e a fermentação.
Respiração Aeróbica; alto rendimento energético, exige presença de oxigênio livre, produtos finais (CO2 + H2O) não alteram o meio. Fermentação; baixo rendimento energético, exige ausência de oxigênio livre, acumulo de produtos finais no meio.
5. Cite exemplos de como o ser humano pode utilizar a fermentação dos microrganismos em seu próprio benefício.
Queijos, fermentos biológicos, bebidas alcoólicas entre outros 
6. Descreva exemplos de reações catabólicas e como a célula bacteriana pode utilizar a energia adquirida para promover reações anabólicas.
Catabolismo dos lipídios: Gorduras __lipase___ Ácido graxo e glicerol Lipases
Catabolismo das proteínas: Proteínas __Proteases__ Aminoácidos
 Peptidases
7. Cite exemplos de fatores físicos e químicos que podem influenciar o crescimento bacteriano.
Influência dos fatores físicos; Temperatura/ pH/ Pressão osmótica
Influência dos fatores químicos; Água/ Fontes de Carbono/ Minerais (Nitrogênio, enxofre, fósforo)/ Elementos traços/ Oxigênio
8. Classifique as bactérias quanto as temperaturas ideais para seu crescimento.
Microrganismos são classificados em 4 grupos: Psicrófilos: crescem em baixas temperaturas (-10 a 15 °C) Ex: Bacillus globisporus. Mesófilos: crescem em temperaturas moderadas (10 a 50 °C). Termófilos: crescem em altas temperaturas (40 a 70 °C) Ex: Clostridium botulinum. Termófilos extremos (68 a 110 °C) Ex: Thermus aquaticus
9. Classifique as bactérias quanto a afinidade ou aversão a um ambiente salino.
Refere-se a acidez ou a alcalinidade de uma solução; Maioria dos microrganismos cresce melhor perto da neutralidade (pH 6,5 – 7,5); poucas bactérias são capazes de crescer em pH ácido (como pH4,0) Bactérias: faixa entre pH 7,0
Exceções: Bactérias acidófilas: alto grau de tolerância à acidez (H.pylori 0,1 a 5,4); Bactérias alcalifílicas: (Bacillus e Archaea) (pH 10 – 11). o Fungos - tendem a ser mais acidófilos que as bactérias (pH<5).
10. Classifique as bactérias quanto a afinidade ou aversão ao oxigênio.
Oxigênio- Extremamente importante ao desenvolvimento microbiano.
AERÓBIOS
Estritos (obrigados): só crescem na presença de O2 (Pseudomonas)
Facultativos: utilizam O2 em seu metabolismo energético, mas podem crescer na ausência de O2 (família Enterobacteriaceae)
Microaerófilo: sobrevivem em ambientes com alta concentração de CO2 e baixas de O2 (H. pylori)
ANAERÓBIOS
Aerotolerantes: suportam a presença de O2 mas sem utilizá-lo em seu metabolismo. Ex: Lactobacillus acidophillus
Estritos (obrigados): não toleram O2 (letal) Ex: Clostridium tetani e Clostridium botulinum
11. Descreva o processo de divisão binária de uma bactéria.
Tempo de Geração, em geral de cerca de 15 a 30 min para a maioria das espécies mesófilas de importância em micro médica e de alimentos. Células filhas idênticas a célula mãe = “clone”
12. Cite e descreva as etapas da curva de crescimento de um microrganismo.
Fase lag; Pouca ou ausência de divisão celular/ Fase de adaptação ≥ 1 hora/ Síntese de enzimas nas novas condições/ Estado de latência, com intensa atividade metabólica. Tempo (min.)
Fase log; Início do processo de divisão (período de crescimento ou aumento logarítmo= 2n);/ Reprodução celular extremamente ativa, sensíveis as mudanças ambientais; EFEITO DE ANTIBIÓTICOS.
Fase Estacionária; Velocidade de crescimento diminui/ Escassez de nutrientes ou acúmulo de
Metabólitos/ no de células vivas = no de células mortas.
Fase de morte ou declínio: no de células mortas excede o de células novas.