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Meios de Esterilização: Físicos: - Calor Seco (Estufa, Flambagem e Fulguração) - Calor Úmido (Fervura e Autoclave) - Radiações (Raios alfa, beta e X). Químicos Membrana Citoplasmática: Responsável pela separação do meio externo com o meio interno (citoplasma). Composto por: Proteínas (60%), Bicamada Fosfolipídica (40%), A membrana de procariotos difere dos eucariotos, principalmente por não conterem esteróis. Parede Celular: Principal estrutura que dá forma à bactéria. A pressão osmótica do interior da bactéria é muito maior que a do meio externo. Se não fosse a presença da parede celular, ela estouraria. A parede celular de bactérias Gram positivas é diferente das Gram negativas = varia de acordo com diferentes tipos de bactérias. A Coloração de Gram baseia-se na capacidade das bactérias fixarem ou não o corante Cristal violeta após a lavagem com o álcool-cetona. Seu protocolo envolve: Cristal Violeta, Lugol, Álcool-Cetona e Fucsina Características das Bactérias Gram-Positivas: Aproximadamente 90% de sua parede é composta por peptideoglicano (Por conter essa espessa camada é mais resistente à quebras do que as Gram-negativas.), Sua parede contém até 50% de sua massa seca composta por ácido teicóico. As bactérias Gram positivas coram de roxo escuro. GRAM- NEGATIVAS: Possuem duas membranas, uma interna (comum a todas as bactérias) e a externa, única das Gram-negativas. Formada por pequena camada de peptideoglicano. A única que possui uma camada de Lipopolissacarídeos (LPS) =constituída por lipídio A ligado a um polissacarídeo, antígeno O. O antígeno O, na camada LPS, variam de espécie para espécie = características antigênicas. As bactérias Gram-negativas coram de vermelho. CONDIÇÕES FAVORÁVEIS AO CRESCIMENTO BACTERIANO: Temperatura, pH, Pressão, Osmótica, Oxigênio MEIO SINTETICO: São aqueles cuja composição química (inorgânica) é qualitativa e quantitativamente conhecida. Exemplo: Salina Tamponada MEIO COMPLEXO: São enriquecidos com substâncias capazes de fornecer uma variedade de nutrientes como extrato de carne, leveduras, sangue, coração, soro, etc (orgânicas). Mcgs exigentes conseguem crescer nele. Meios Simples: Contém apenas componentes básicos para o crescimento da bactéria. Meios Enriquecidos: meio que tem aumentada a sua capacidade nutricional para a bactéria com a adição de substâncias como gema de ovo, sangue, plasma, soro, leite, etc. De uso frequente para bactérias de difícil crescimento (fastidiosas) Ex.: CTA, Caldo Triptona, Caldo BHI, etc. Meio de Enriquecimento: Meio seletivo que visa inibir o crescimento de bactérias companhantes e permitir apenas o crescimento da bactéria alvo que pretende-se posteriormente isolar aumentando assim a proporção desta em relação às demais. São meios líquidos. Ex.: Caldo Tetrationato – bactéria alvo: Salmonella spp. Seletivos: Contém substâncias seletivas que inibem o crescimento de certas bactérias e permitem o crescimento de outras. São meios sólidos e têm como objetivo isolar culturas puras. Ex: SS e Mac Conkey Diferenciais: São aqueles que conferem características especiais às colônias que em condições normais seriam idênticas. Ex.: SS, Ágar Esculina, CTA, etc. Fase lag = praticamente não há divisão celular. É uma fase de adaptação onde ocorre aumento de massa. Fase log = divisão celular regular numa velocidade máxima e constante. Fase estacionária = a velocidade de multiplicação diminui gradualmente, até que se anule. Fase de declínio = os mcgs diminuem de número gradualmente até que a cultura fique estéril, ou seja, todos morrem. Meio Stuart: Utilidade: Transporte de diversos materiais e conservação dos mcgs, inclusive patogênicos como Haemophillus spp., Pneumococcus spp., Salmonella spp., Shigella spp. entre outros. Princípio: A carência de uma fonte de nitrogênio impede consideravelmente a multiplicação de mcgs e a composição nutritiva garante a sobrevivência deles. Salina Tamponada: Utilidade: Transporte de material fecal e para conservação e/ou diluição d mcgs. Princípio: Meio líquido tamponado que mantém a bactéria viável. São meios próprios para o crescimento e/ou isolamento do microrganismo. Os principais são: Ágar Chocolate: Meio Sólido Enriquecido, mcgs exigentes como Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. adicionados sangue de cavalo, carneiro ou coelho Ágar Thayer-Martin: Meio Sólido Enriquecido e Seletivo. Diferenciar Nesseria gonorrhoeae e Nesseria meningitidis. Princípio: Contém antibióticos que inibem o crescimento de bactérias do gênero Neisseria saprófitas e outras bactérias. Ágar Salmonella-Shigella (SS): Meio Sólido, Enriquecido, Seletivo e Diferencial. Salmonella e Shigella em amostras de fezes, alimentos e água. (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem mcgs Gram Positivos. A incorporação de lactose no meio também permite diferenciar mcgs. Caldo Selenito e Caldo Tetrationato: Meio Líquido, enriquecimento e isolamento de Salmonella spp. e Shigella spp. em amostras de fezes, urina e alimentos. Princípio: Tem propriedades que inibem coliformes e outras espécies da flora intestinal como estreptococos Ágar Mac Conkey: Meio Sólido Seletivo, Isola bacilos Gram Negativos (enterobactérias e não fermentadores) e verifica a fermentação ou não da lactose. Princípio: O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos Ágar Sangue: Meio Sólido, Enriquecido. mcgs não fastidiosos; Verificação da hemólise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.; e é usado na prova de satelitismo (identificação presuntiva de Haemophilus spp.) Ágar Cled: Meio Sólido, Enriquecido e Diferencial. Utilidade: Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras. Caldo BHI: Brain Heart Infusion (BHI) é um meio derivado de cérebro, coração, peptona e dextrose. Utilidade: Para cultivo de estreptococos, pneumococos, meningococos, enterobacctérias, não fermentadores, leveduras e fungos. Ou também para teste em tubo da coagulase. Ágar Sabouraud: Meio com nutrientes que favorece o crescimento de diversos fungos leveduriformes e filamentosos. Utilidade: Cultivo e crescimento de espécies de cândidas e fungos filamentosos, particularmente associados a infecções superficiais. E caracterização macroscópica do fungo filamentoso (colônia gigante). Morfologia: Gram negativos; imóveis; cocos redondos isolados e aos pares (diplococos). Meio enriquecido: ágar sangue, ágar chocolate ou ágar chocolate modificado (com VCN). Produção de ácido por oxidação de carboidratos. Oxidase + e Catalase + PROVA DA OXIDASE: É uma enzima que detecta o citocromo das bactérias. Pois todas as bactérias fermentadoras são negativas. Já as não fermentadoras podem ser positivas ou negativas. Se a cor mudar para roxo é oxidase positiva GRAM POSITIVA Prova da catalase: Ao colocar o microrganismo em contato com o peróxido de hidrogênio (água oxigenada) a 3% ocorre a ação da enzima catalase, fazendo com que haja reação liberando O2. (Staphyloscoccus positivo) Prova da Coagulase: Pode ser em tubo ou em lâmina. Em tubo é colocado os mcgs. em contato com o plasma (contém a enzima coagulase) que vai reagir com o fator plasmático de fibrinogênio, formando o coágulo. Em lâmina, é colocado o mcgs. em um pouco do plasma, e a parede celular converte fibrinogênio em fibrina, aglutinando as células. Fungos Filamentosos: Possuem hifas em sua estrutura e são multicelulares. Conhecidos também como “bolor” ou mofo”. Hifas podem ser septadas (contínuas) ou não-septadas (cenocíticas).Característica das colônias em cultura: Podem ser algodonosas, Aveludadas, pulverulentas (pó fino) Assexuada: os esporos evoluem e formam hifas que se multiplicam para originar os micélios e os esporângios do novo fungo. Sexuada: Quando há contato com outras hifas diferentes. Formam-se prolongamentos que nem uma hifa à outra, e há fusão dos núcleos, originando um zigoto, que multiplicará por mitose. Diagnóstico microbiológico das micoses: Exame direto: Raspado da lesão,pelos e unhas, secreções, escarro etc. com clareamento com KOH 10-20% Direto com coloração > Tinta nankin, azul de algodão, Gram, Giemsa, etc. Isolamento fúngico: Meios de culturas específicos: ágar Saboraud, com ou sem antibióticos. Micoses Superficiais: limitadas às camadas mais externa da pele, como pelos e unhas. Micoses Cutâneas: Infecções mais profundas na epiderme, são mais invasivas, afetando pele, pelos e unha. Micoses Subcutâneas: Acometem a derme, tecido subcutâneo, músculos e fascia. Micoses Sistêmicas: Acomete órgãos e sistemas internos. Micoses Oportunistas: Acometem indivíduos debilitados. VIRUS Genoma ou Núcleo: RNA ou DNA de fita simples ou dupla. Algumas vezes o genoma pode estar revestido por uma camada de proteínas a mais além do capsídeo. Capsídeo: Formado por capsômeros (proteínas). O conjunto de núcleo mais capsídeo é o nucleocapsídeo. Envelope: Gicoproteínas = peplômeros Muitas vezes as glicoproteínas formam “espículas”, projeções a partir do envelope. Patogenicidade ou Virulência: refere-se ao potencial de alguns mcgs de causarem danos com maior ou menor gravidade em seus hospedeiros
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