aula pratica preparo de tampões

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Aula Prática de Bioquímica Núcleo Comum da Saúde FHOUniararas 
 
Preparação de tampões e avaliação da capacidade tamponante 
1. Fundamentos teóricos 
 O organismo dispõe de três importantes mecanismos reguladores do pH que atuam em sincronia com a 
finalidade de preservar as condições ótimas para as funções celulares. O mecanismo respiratório (ação rápida), o 
mecanismo renal (ação lenta) e o mecanismo químico (ação imediata), representado por pares de substâncias 
chamados sistemas "tampão" podem reagir com ácidos ou com bases em excesso nos líquidos do organismo. 
 Os tampões são as substâncias que limitam as variações do pH do sangue e demais líquidos orgânicos ao se 
combinarem com os ácidos ou as bases que alcançam aqueles líquidos. As substâncias que constituem os tampões 
agem aos pares (par ácido-base conjugado), constituindo um sistema protetor. Um sistema tampão é constituído por 
um ácido fraco e sua base conjugada. O par ácido-base conjugado do sistema tampão, em condições normais, existe 
em uma relação constante (equilíbrio químico), que o organismo tende a preservar. 
 Quando um ácido é adicionado num meio tamponado, a base conjugada do tampão rapidamente reage com 
os íons H+ formados pelo ácido. Assim como quando uma base é adicionada num meio tamponado, o ácido do 
tampão rapidamente forma íons H+ repondo o que foi consumido por essa base. Desse modo, evitando a variação da 
concentração de íons H+, previne-se variações bruscas no pH do meio tamponado. 
 Todos os sistemas tampão do organismo atuam da mesma forma. O sistema neutraliza o excesso de ácidos 
ou de bases e em seguida o organismo tenta recompor a relação normal do tampão. O princípio fundamental da 
regulação do equilíbrio ácido-base é a manutenção da relação constante entre o par ácido-base do sistema tampão. 
Figura 1- Tampão bicarbonato do sangue. 
 
2. Procedimento Experimental 
2.1. Preparo dos tampões 
2.1.1) Escolher e preparar 50 (ou 100 mL) de UM dos tampões, usando fostato de sódio: 
a) Fosfato 0,1 mol/L, pH 7,4 b) Fosfato 0,1 mol/L, pH 6,5. 
2.1.2) Para preparar o tampão é necessário executar os seguintes procedimentos: 
I) Calcular a massa do sal, necessária para preparar 50 (ou 100 mL) do tampão na concentração de 0,1 mol/L usando 
a fórmula: m = M x PM x V 
 onde a m é a massa expressa em g, M é a concentração em mol/L e V é o volume expresso em litros; 
II) Dissolver o sal em um béquer usando um volume inferior ao volume final (50 ou 100 mL); 
III) Acertar o pH do tampão (com um pHmetro) usando soluções diluídas de HCl (para diminuir o pH) ou NaOH (para 
aumentar o pH); 
IV) Acertar o volume usando um balão volumétrico de 50 (ou 100 mL). 
 
 
 
 
 
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2.2. Avaliação da capacidade tamponante 
I) Prepare DUAS sequências de tubos com a composição apresentada na figura a seguir: 
 
 
 
 
 
 
 Sequência 1 Sequência 2 
(adição de 10 gotas de HCl 0,1 mol/L) (adição de 10 gotas de NaOH 0,1 mol/L) 
 
II) Meça o pH dos tubos 1 a 3 (pH inicial) das duas sequências e anote na tabela 1. 
IV) Adicione 15 gostas de HCl 0,1 mol/L na sequência 1 e 15 gotas de NaOH 0,1 mol/L na sequência 2. 
V) Agite todos os tubos, meça o pH (pH final) e anote os valores na tabela 1. 
VI) Copie os resultados de um grupo que trabalhou com o tampão diferente do seu. 
 
Tabela 1. Valores de pH inicial e pH final da sequência de tubos que receberam adição de HCl 0,05M 
Tampão 
Sequência 1 (adição de HCl) Sequência 2 (adição de NaOH) 
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 
pHinic pHfim pHinic pHfim pHinic pHfim pHinic pHfim pHinic pHfim pHinic pHfim 
Fosfato (pH 6,5) 
Fosfato (pH 7,4) 
 
Tabela 2. Composição química e capacidade tamponante dos tampões. 
Tampão Relação pH/pKa 
Predomina ácido ou base 
conjugada 
Tampona melhor adição de 
HCl ou NaOH? 
Fosfato 0,1 M, pH 6,5 
Fosfato 0,1 M, pH 7,4