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ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLÉICO (DNA) O DNA é o material genético A informação genética está disposta em Genes Material genético compactado na região nucleóide Cromossomo único, circular fechado (na maioria das bactérias, ex: Escherichia coli) Célula procariótica (bactérias) Célula eucariótica Material genético compactado no núcleo Vários cromossomos, lineares Material genético encontrado, também, em cloroplastos e mitocôndrias Vírus Cromossomo único Dogma Central da Biologia Molecular Transcrição Tradução ESTRUTURA DO DNA Constituintes do DNA Fosfato Açúcar (desoxirribose) Base nitrogenada: Purinas (Adenina e Guanina) Pirimidinas (Citosina e Timina) Arranjados em nucleotídeos A polimerização dos nucleotídeos forma o DNA Níveis de organização do ácido desoxirrubonucléico (DNA) Estrutura primária Sequência de nucleotídeos Estrutura secundária Dupla-hélice Estrutura terciária Arranjo espacial do DNA cromossomal em cromatina (eucariotos) e nucleóide (procariotos) As bases nitrogenadas do DNA são constituídos por anéis contendo nitrogênio e carbono Adenina e Guanina contêm um par de anéis fundidos Citosina e Timina contêm um único anel Adenina Guanina Citosina Timina Purinas Pirimidinas Ligação fosfodiéster As bases são ligadas ao carbono 1´ da desoxirribose O grupo fosfato está ligado ao carbono 5´ da desoxirribose O DNA é composto de dois filamentos de nucleotídeos Oligonucleotídeos: até 50 unidades Polinucleotídeos: acima de 50 unidades James Watson e Francis Crick (1953) demonstraram como os nucleotídeos estão ordenados no DNA Parte da ligação fosfodiéster localiza-se entre o fosfato e o carbono 5´, e parte entre o fosfato e o carbono 3´ da desoxirribose Polaridade 5´ 3´ Na molécula, os dois filamentos têm orientações opostas DNA é negativamente carregado Um filamento está orientado 5´ 3´, e o outro filamento orientado 3´ 5´ Os dois filamentos estão unidos entre si por meio de pontes de hidrogênio entre suas bases complementares (duas entre A-T, e três pontes entre C-G) Os dois filamentos da molécula de DNA estão mantidos lado a lado e retorcidos sob a forma de dupla hélice O açúcar-fosfato está do lado de fora da dupla hélice e as bases se projetam para o interior O DNA natural tem uma hélice orientada para a direita A dupla-hélice contém sulcos com dois tamanhos distintos * Suas superfícies são usadas por diferentes classes de proteínas que se ligam ao DNA Propriedades do DNA Com a orientação em sentido inverso dos filamentos do DNA e a regra de pareamento de bases, o DNA pode ser corretamente duplicado O DNA possui conteúdo de informação, dado por sua sequência de nucleotídeos Fornecimento de variação genética por meio das mutações, que resultam em mudança da informação codificada Natureza dos genes Pode-se definir um gene como uma região do DNA capaz de ser transcrita a fim de produzir uma molécula de RNA funcional, no momento e no lugar corretos durante o desenvolvimento de um organismo Os genes possuem em uma extremidade uma região reguladora, e na outra extremidade, uma região contém sinais para finalizar o transcrito Muitos genes de eucariontes contêm regiões de íntrons (não codificam para a proteína em questão) e regiões codificadoras denominadas éxons Entre os genes existe DNA intergênico e em muitos eucariontes, parte do DNA entre os genes é repetitiva Os genes estão organizados em cromossomos Natureza dos genomas A organização dos genes no DNA difere nos procariotos e nos eucariotos O Genoma é o conjunto completo do DNA de um organismo Os genomas são medidos em unidades de pares de bases Em genomas de plasmídeos, organelas e vírus há pouco espaço intergênico, esses genomas não possuem grandes quantidades de proteínas associadas a eles Genomas de procariontes O genoma da maioria dos procariontes está contido em um único cromossomo, uma dupla hélice de DNA única, fechada e circular * Pouco espaço intergênico e os íntrons são raros Em algumas regiões do genoma, alguns genes funcionalmente relacionados se encontram juntos como um grupo, e uma molécula de mRNA é produzida a partir da unidade inteira operon Genoma de bactéria Genomas nucleares de eucariontes Em eucariontes, a grande maioria de genes encontra-se organizada em cromossomos no núcleo Cromossomos diferentes no genoma contêm diferentes grupos de genes O material que compõe o cromossomo denomina-se cromatina, constituída de DNA e proteína DNA de eucariontes é compactado de forma eficiente Cada molécula de DNA dupla-fita está organizada em cromossomos, e cada cromossomo é uma molécula de DNA densamente pregueada Os nucleossomos contêm um octâmero de duas unidades cada um de histonas H2A, H2B, H3 e H4 O nucleossomo assume uma forma helicoidizada chamada solenóide, estabilizado por outra histona, H1, que fica no centro da estrutura A cromatina está organizada em nucleossomos O DNA é enrolado duas vezes ao redor do octâmero Um nível de compactação adicional converte o solenóide na estrutura tridimensional chamada cromossomo Os cromossomos apresentam uma região central de proteína não-histona, o arcabouço central As alças de DNA projetam-se lateralmente a partir do arcabouço central, cuja matriz tem forma de espiral Os cromossomos estão super-helicoidizados no núcleo durante multiplicação celular O arcabouço central organiza o DNA durante a replicação A dupla-hélice de DNA pode ser desnaturada e renaturada Agentes desnaturantes Aquecimento Extremos de pH Perfil de desnaturação característico de moléculas de DNA Temperatura (oC) D e s n a t u r a ç ã o ( % ) Fatores que afetam a termperatura de desnaturação (Tm) do DNA Tamanho da molécula: diretamente relacionado Conteúdo de bases G+C: diretamente relacionado Força Iônica: diretamente relacionado pH: inversamente relacionado Presença de solventes orgânicos: inversamente relacionado Relação entre a temperatura de desnaturação (Tm) e a composição de bases do DNA tm (oC) G + C (% do total de nucleotídeos) Nucleotídeos absorvem luz Ultra-Violeta (UV) Comprimento de onda (nm) Comprimento de onda (nm) C o e f i c i e n t e m o l a r d e a b s o r ç ã o C o e f i c i e n t e m o l a r d e a b s o r ç ã o
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