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Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * FMJ-Estácio Microbiológica Médica Aula-1 Prof. Fernando Gomes Figueredo fgfigueredo@gmail.com Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Objetivo Objetiva a orientação, habilitação e qualificação do aluno, para como profissional , auxiliar na elucidação do diagnóstico de doenças de origem bacteriana, viral e fúngicas , conforme o proporcionado em aulas teóricas e práticas. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Forma de avaliação Para AV1 Aplicação de prova teórica a ser aplicada em data estabelecida em calendário acadêmico. (Valerá 10,0 pontos) Para AV2 A AV2 : Prova teórica aplicada em data estabelecida em calendário acadêmico (Valerá até 80,0 pontos); Apresentação de Seminários (Valerá até 20,0 pontos) Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bibliografia BIBLIOGRAFIA BÁSICA BUTEL, Janet S; MORSE, Stephen A; BROOKS, Geo F. Microbiologia médica de Jawetz, Melnick e Adelberg. 25. ed. Porto Alegre: AMGH, 2012. 813 p. MURRAY, Patrick R.; ROSENTHAL, Ken S.; PFALLER, Michael A. Microbiologia médica. Rio de Janeiro: Elsevier, 2014 . LEVINSON, Warren. Microbiologia médica e imunologia. 10. ed. Porto Alegre: ARTMED, 2014. 663 p. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * BIBLIOGRAFIA COMPLEMENTAR TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L. Microbiologia. 10. ed. Porto Alegre: ARTMED, 2012. TRABULSI, Luiz Rachid. Micrologia. 5. ed. São Paulo: Atheneu, 2008. 760 p. 576 T758m 5.ed. FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L. Microbiologia. 10. ed. Porto Alegre: Artmed, 2012. 934 p. ISBN 9788536326061. VERONESI, Ricardo; FOCACCIA, Roberto (Ed.). Tratado de infectologia. 4. ed. São Paulo: Atheneu, 2009. MIMS, Cedric; ROITT, Ivan. Microbiologia médica. 3.ed. Rio de Janeiro: Elsevier, 2005. 709 p. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * CRONOGRAMA Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Pontos a serem esclarecidos Frequência 15 minutos de tolerância; Se perdeu a AV1, AV2 Só pode faltar apenas 25% das aulas; Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Microbiologia ? Mikros : pequeno; Bios : vida; Logos : ciência. Então a microbiologia estuda seres, que em sua maioria, só poderiam ser visualizados através da microscopia, como: bactérias, fungos, vírus, protozoários, algas unicelulares, viróides e prions. * Bactérias, fungos, vírus e protozoários. Escherichia coli Cândida albicans HIV Giardia lamblia Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Características gerais dos microrganismos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * na farmacêutica - produção de antibióticos : - tirotricina ; bacitracina ; subtilina ; polimixina B. -ACTINOMICETOS- bactérias, mesmo lembrando fungos: estreptomicina; aureomicina;terramicina. na agricultura fixação do nitrogênio (raízes de leguminosas: feijão, ervilha); parasitas (fitopatologia). na indústria vinagre (fermentação acética); coalhadas (fermentação lática); queijos (“cura”): “duros”: Cheddar; parmesão; “moles”: Limburger. Importância Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * na medicina doenças ! em genética e biologia molecular estudos: mutação, reprodução, engenharia genética, etc. decompositores cadeias alimentares - reciclagem ! Importância das Bactérias Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Nomenclatura Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Biossegurança? Conjunto de medidas voltadas para a prevenção, minimização ou eliminação de riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Vias de Infecção: Inalação; Ingestão; Inoculação direta; Contato com membrana mucosa; Vetores. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Onde estão os agentes patógenos? Saliva Sangue Secreções E mais: fômites, pele, pêlo, unhas, materiais cirúrgicos,materiais laboratoriais e no ambiente. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Contaminação Biológica Contaminação por microorganismos patogênicos, que podem causar agravos à saúde. ● Infecção do cliente; ● Infecção do profissional. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Limpeza!!! Esterilização; Desinfecção (esporos?); Calor Seco Calor Úmido Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Exemplos de Descontaminantes: Autoclave; Estufa; Quaternário de amônio; Fenóis; Cloro e compostos clorados; Álcool etílico (70 – 85%). Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Instalações da Bacteriologia: A área física do laboratório deve ser planejada de acordo com os agentes a serem manipulados. Níveis de Segurança: Segurança nível 1; Segurança nível 2; Segurança nível 3; Segurança nível 4. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Laboratório Com Nível de Segurança 1 Laboratório Escolar Agentes Patógenos Oportunistas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Laboratório Com Nível de Segurança 2 Laboratório de Análises Clínicas Agentes Patógenos Reconhecidos Como Causadores de Patologias Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Laboratório Com Nível de Segurança 3 Laboratório do Instituto de Ciências Biomédicas da USP Agentes Exóticos e/ou Letais Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Laboratório Com Nível de Segurança 4 Electron micrograph of Ebola Zaire virus. This is the first photo ever taken,on 10/13/1976 by Dr. F.A. Murphy, now at UC Davis, then at CDC. Diagnostic specimen in cell culture at 160,000 x magnification. [brettrussell.com] Paciente Vítima do Vírus Ebola Agentes Exóticos e/ou Letais Para o Qual Não Existe Tratamento ou Vacina Vírus de Marburg Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Principais EPIs: ● Vacinação em dia!!! Equipamentos de Proteção Individual Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Principais EPCs: Lava – Olhos de Emergência Extintor de Incêndio Cabine de Segurança Biológica Lixeira Lava – Mãos com Pedal Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Principais Cuidados: Toda amostra deve ser tratada como contaminda; Cuidado com os aerossóis; Cuidado com o reencape de agulhas e o seu descarte; Limpeza do material e bancada após final de trabalho; Tirar o jaleco após trabalho, antes da saída do setor; Não pipetar nenhum material com a boca; Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Principais Cuidados: Não usar adornos pessoais em laboratório; Não comer, nem mascar chicletes no laboratório; Não retocar maquiagem no laboratório Rotular todos os reagentes com seu nome químico ou técnico; Ter um manual de procedimentos operacionais sempre a mãos. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biossegurança Micobacteriologia Todo trabalho com micobactérias deve ser realizado em área especial e reservada (nível3). M. tuberculosis Lâmina corada –Ziehl -Neelsen Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Morfologia, arranjo e estrutura da célula bacteriana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias ??? Eubactérias- são os tipos comuns, encontradas na água, solo e organismos vivos maiores. Arquibactérias- são encontradas em ambientes realmente inóspitos, como os pântanos, fontes termais, fundo do oceano, salinas, vulcões, fonte ácidas, etc. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Divisão Celular Em condições adequadas, uma simples célula procariótica pode dividir-se a cada 20 minutos, dando origem a 5 bilhões de células ( número aproximadamente igual à população humana da terra) em pouco menos de 11 horas. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Morfologia bacteriana Tamanho Arranjo Forma Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Tamanho Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana 0,2 a 1,5 μm de diâmetro 1 a 6 μm de comprimento Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Forma Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Cocos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bacilos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Cocobacilos Gardnerella vaginalis Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Espiroqueta Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Forma de vírgula Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Arranjo Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Diplococos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Estreptococos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Estafilococos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Estrutura da célula bacteriana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Plasmídios Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Membrana Plasmática Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Parede Celular Funções: Pressão osmótica Manutenção da forma Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Parede das bactérias Gram positivas Composição: 90% de peptidioglicano Proteínas e ácidos tecóicos Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Parede das bactérias Gram positivas Função do peptidioglicano: Conferir rigidez à parede. Funções do ácido tecóico Servir de sítio de ligação com o epitélio do hospedeiro. Identificação sorológica. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Parede das bactérias Gram negativas Mais complexa. Possui uma ou poucas camadas de peptidioglicano. Membrana externa. Espaço periplasmático. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Membrana externa Constitui uma barreira adicional para a entrada de algumas substâncias. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Espaço periplasmático Peptidioglicano Enzimas hidrolíticas (quebra de macromoléculas) Enzimas capazes de inativar drogas Proteínas transportadoras Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Protoplastos e Esferoplastos Células desprovidas de parede celular Hidrolise pela lisozima; Bloqueio da síntese de glicopeptídio por antibiótico. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias com paredes de composição química diferente ou sem parede celular Micoplasmas Arqueobactérias Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias que não possuem parede celular Micoplasmas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Coloração de Gram Christiam Gram- 1884 Classificação das bactérias em dois grandes grupos. Gram negativas Gram positivas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * ESQUEMAS DAS PAREDES CELULARES EM BACTÉRIAS GRAM POSITIVAS E GRAM NEGATIVAS Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Parede celular bacteriana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram-Positivas Parede celular espessa (constituída principalmente de peptidioglicano) Outros componentes especiais da parede celular das bactérias gram positivas: ácidos teicóico (fatores de virulência) e lipoteicóico (antígenos de superfície) Bactérias Gram-Negativas Delgada camada de peptidioglicano Presença da membrana externa e do espaço periplasmático Presença do LPS Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram-Negativas Lipopolissacarídeo - LPS (componente estrutural exclusivo da membrana externa das bactérias gram-negativas). Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Os LPSs são compostos por três segmentos ligados covalentemente: 1. Lipídeo A, firmemente embebido na membrana (endotoxina) - Choque pirogênico; 2. Cerne do Polisssacarídeo, localizado na superfície da membrana; 3. Antígenos O, que são polissacarídeos que se estendem como pêlos a partir da superfície da membrana em direção ao meio circundante. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Na Coloração de Gram as células são: Coradas com cristal violeta; Tratadas com iodo para formar o complexo iodo-para-rosalina (hidrofóbico) no interior da célula; Lavadas com uma mistura de solventes orgânicos (álcool-acetona - 30%); Coradas com corante de contraste vermelho, a safranina ou fucsina de Gram (hidrofílico); Classificação de acordo com a constituição: Baseado no método de coloração desenvolvido por Christian Gram, em 1884, as bactérias podem ser divididas em dois grandes grupos. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * COLORAÇÃO DE GRAM Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram positivas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram positivas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram positivas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram negativas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram negativas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Bactérias Gram negativas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Nucleóide Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Logo... Agem: Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Esporos Os esporos que se formam dentro da célula, chamados endosporos, são exclusivos das bactérias (principalmente as pertencentes ao gênero bacillus e clostridium). Eles possuem parede celular espessa, são altamente refráteis (brilham muito com a luz do microscópio) e altamente resistentes a agentes físicos (dessecação e aquecimento) e químicos (anti-sépticos). Os esporos surgem quando a célula bacteriana não se encontra em um meio ideal para o seu desenvolvimento (sua formação leva por volta de 6 horas). Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Esporos bacterianos/ Endosporos Bacillus anthracis Clostridium tetani Clostridium perfringens Clostridium botulinum Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * "Apocalipse zumbi" espalha surto de superbactéria pela Sibéria Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Um surto de antraz,apareceu na região de Yamal-Nenets depois que a temperatura neste verão ficou mais de 5ºC acima do normal. A fonte do surto parece ser a carcaça de uma rena que morreu há mais de 70 anos, na última epidemia de antraz. O corpo do animal, enterrado na tundra, abrigou durante o frio uma pequena colônia de micróbios. Matando 1.500 renas e infectando mais de 10 pessoas Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Esterilização Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Nossa percepção de bactérias como organismos unicelulares baseia-se essencialmente no conceito de culturas puras, nas quais as células podem ser diluídas e estudadas a partir de culturas líquidas. Como praticamente todos os conceitos e conhecimentos microbiológicos foram adquiridos a partir do estudo de organismos em culturas puras, somente há alguns anos começamos a entender que, na realidade, a maioria das bactérias se encontra na natureza vivendo em comunidades, de maior ou menor estruturação. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * O que são biofilmes? Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Biofilmes - Porque formar? Proteção contra: Radiações UV Predadores Desidratação Fagocitose Antimicrobianos Expressão diferencial de genes Comunicação intercelular Troca de material genético Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * DESENVOLVIMENTO DE UM BIOFILME. (a) Colonização primária de um substrato; (b) crescimento, divisão celular e produção do exopolissacarídeo (EPS), com o desenvolvimento de microcolônias; (c) coadesão de células individuais, de células coagregadas e grupos de células idênticas, originando um biofilme jovem, de múltiplas espécies; (d) maturação e formação de mosaicos clonais no biofilme maduro. (Adaptado de Rickard et al., Trends Microbiol., 11:94-100, 2003) Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Medidas Preventivas Superfícies anti-adesivas: heparina, sais de prata Impregnação com agentes antimicrobianos posteriormente liberados: impedindo a comunicação celular impedindo a formação do biofilme promovendo a morte microbiana Enzimas para degradar a matriz: alginato liase Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * CRESCIMENTO MICROBIANO Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * O QUE É CRESCIMENTO? Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * CONDIÇÕES DE CULTIVO Meios de cultura adequados condições ambientais igualmente adequadas. MEIO DE CULTURA Mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Meios de Cultura Os meios de cultura são classificados quanto ao estado físico em sólidos, quando contém agentes solidificantes, principalmente ágar (cerca de 1 a 2,0 %); NOTA: O meio sólido é obrigatoriamente usado quando se pretende separar células. Cada célula individualizada ou agrupamento isolado dá origem, por multiplicação, a um aglomerado que constitui uma colônia. semi-sólidos, quando a quantidade de ágar e ou gelatina é de 0,075 a 0,5 %, dando uma consistência intermediária, de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tensões variadas de oxigênio ou a verificação da motilidade e também para conservação de culturas; e líquidos, sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, utilizados para ativação das culturas, repiques de microrganismos, provas bioquímicas, dentre outros. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * COMPOSIÇÃO Função das substâncias do Ágar e Caldo simples Extrato de carne - Fonte de carbono orgânico, nitrogênio, vitaminas e sais minerais e, nesse caso de energia Peptona – proteína semi-digerida que serve como fonte de nitrogênio Ágar-ágar - Sulfato de ácido poligalacturônico extraído de várias espécies de algas do gênero Gellidum e outras algas afins. Tem como função solidificar os meios e não é metabolizado por bactérias de interesse clínico. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * INFLUÊNCIA DE FATORES AMBIENTAIS Temperatura As variações quanto ao requerimento térmico permite classificar as bactérias segundo a temperatura ótima para o seu crescimento, em: - psicrófilas: entre 12 e 17º C - mesófilas: entre 28 e 37ºC termófilas: 57 e 87ºC pH Os valores de pH em torno da neutralidade são os mais adequados para absorção de alimentos para a grande maioria das bactérias. Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Metabolismo bacteriano: Reaçoes químicas que ocorrem na célula bacteriana: Tipos de metabolismo: Autotrófico Heterotrófico Tipos de processo metabólico Respiraçao aeróbica Respiraçao anaeróbica Fermentaçao Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Oxigênio O oxigênio pode ser indispensável, letal ou inócuo para as bactérias, o que permite classificá-las em: - aeróbias estritas: exigem a presença de oxigênio, como as do gênero Acinetobacter. - microaerófilas: necessitam de baixos teores de oxigênio, como o Campylobacter jejuni. - facultativas: apresentam mecanismos que as capacitam a utilizar o oxigênio quando disponível, mas desenvolver-se também em sua ausência. Escherichia coli e vária bactérias entéricas tem esta característica. - anaeróbias estritas: não toleram o oxigênio. Ex.: Clostridium tetani, bactéria produtora de potente toxina que só se desenvolve em tecidos necrosados carentes de oxigênio. INFLUÊNCIA DE FATORES AMBIENTAIS Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * As Bactérias se dividem por divisão binária transversa Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * Profa. Msc. Walkyria Almeida Santana * CURVA DE CRESCIMENTO * * normalmente - "Gardnerella vaginalis". O tratamento completo deve ser feito com antibióticos por via oral (normalmente azitromicina ou secnidazol em dose única) para a mulher E SEU PARCEIRO SEXUAL, além de creme vaginal que contenha antibiótico específico para a "Gardnerella vaginalis" por 7 à 10 noites e SEM TER RELAÇÕES neste período * Mesossomo função tais como a participação na segregação dos cromossomos durante a divisão, papel respiratório, papel na esporulação, ou até mesmo como sendo um mero artefato decorrente dos procedimentos utilizados para a preparação microscópica dos espécimes. * Clamidea Doença é a DST mais comum no mundo. Tratamento inadequado pode evoluir para problemas graves como infertilidade sinais como corrimento vaginal, alteraç.ões do ciclo menstrual, dor na região pélvica e mal estar. Os micoplasmas podem viver dentro de células, sem matar a célula hospedeira, em simbiose-parasita, à semelhança do que fazem os vírus e algumas bactérias (Rickettsias e Chlamydias), mas também podem viver e crescer fora das células, nos fluidos corporais, coisa de que os vírus não são capazes. Os micoplasmas são responsáveis por doenças como as inflamações alérgicas, pneumonia atípica e outras doenças, e investiga-se uma possível relação entre estes organismos e certas doenças envolvendo o sistema imunitário, como a diabetes mellitus tipo I ou aesclerose múltipla, entre outras. * * *
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