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ESTRUTURA E FUNÇÃO DOS ÁCIDOS NUCLÉICOS Anderson Assaid Simão Ácidos nucleicos Compostos orgânicos que estão envolvidos em todos os processos vitais; regulando estes processos; considerados as substâncias mestras da vida São responsáveis pelas informações hereditárias e controle das atividades celulares Governam o desenvolvimento do corpo e suas características específicas Ácidos nucleicos São polímeros de nucleotídeos Tipos de ácidos nucleicos Ácido Desoxirribonucleico – DNA Ácido Ribonucleico - RNA Nucleotídeos Os nucleotídios, unidades básicas dos ácidos nucléicos, são constituídos de: Uma pentose (açúcar com cinco carbonos) Uma base nitrogenada (anel heterocíclico de átomos de carbono e nitrogênio). Um grupo fosfato (molécula com um átomo de fósforo cercado por 4 oxigênios) Pentoses (RNA) (DNA) 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ Bases nitrogenadas Adenina Guanina Citosina Timina (DNA) Uracila (RNA)Pirimidina Purina (anel simples) (anel duplo) Grupo fosfato Ligação entre o Fosfato e a Pentose Esta ligação é feita através de uma ligação fosfodiéster com a hidroxila ligada ao carbono-5’ da pentose 5’ Ligação entre a Base e a Pentose Esta ligação é feita covalentemente através de uma ligação N-β- glicosídica com a hidroxila ligada ao carbono-1’ da pentose. Ligação N-β- glicosídica (covalente) Pirimidina Puricas Nucleosídio: composto formado pela união da pentose + base nitrogenada Ligação dos componentes do nucleotídeo 9 1´ 1 Puricas Pirimidinas Ligação N- glicosídica – covalente Ligação éster Esta ligação é feita covalentemente através de uma ligação N-β-glicosídica com a hidroxila ligada ao carbono-1’ da pentose. Esta ligação é feita através de uma ligação éster com a hidroxila ligada ao carbono-5’ da pentose Os nucleotídeos se ligam entre si p/ formar os polímeros de AN Ligação Fosfodiéster A ligação ocorre entre o grupo 5’ fosfato de um unidade nucleotídica c/ o grupo 3’- hidroxil do próximo nucleotídeo Orientação das ligações fosfodiéster nas cadeia de AN 5’ 3’ Espinha dorsal dos AN consiste em fosfatos e resíduos de pentoses alternados, e as BN podem ser consideradas como grupos laterais ligadas a esta espinha dorsal em intervalos regulares RNA DNA Adenina Citosina Uracila Guanina Guanina Citosina Timina Adenina Descoberta do DNA Bactéria virulenta, encapsulada, viva. Bactéria não-virulenta, não-encapsulada, viva. Bactéria virulenta, encapsulada, viva. Bactéria virulenta, morta pelo calor. Calor DNA armazena a informação genética Streptococcus pneumoniae Bactéria não-virulenta, viva. DNA isolado de bactéria virulenta, morta. Bactéria não-virulenta, não- encapsulada, viva. Bactéria virulenta, encapsulada. Bactéria virulenta, morta pelo calor. Bactéria não-virulenta, não-encapsulada, viva. Mistura de Bactéria não-virulenta viva e virulenta morta. • Estudos de Chargaff – Composição das bases varia de uma espécie p/ outra – Composição das bases não muda com a idade do organismo nem com o estado nutricional – Amostras de DNA isoladas de diferentes tecidos da mesma espécie tem a mesma composição de bases – Em todos os DNAs o conteúdo de adenina é igual ao de timina (A=T) – Conteúdo de citosina é igual ao de guanina (G=C) – A + G (Purinas) = T + C (Pirimidina) • Estudos por Raios X – DNA como sendo uma molécula longa e fina – Possui dois filamentos associados entre si – Molécula helicoidal James Watson & Francis Crick (1953) Estrutura dos Ácidos Nucléicos (DNA) James Watson & Francis Crick (1953) Estrutura Tridimensional do DNA As fitas são duplas; dispostas em formato helicoidal; dupla hélice Bases N. (hidrofóbicas) das duas fitas estão empilhadas dentro da dupla hélice Grupos fosfatos e pentoses - esqueletos hidrofílicos – externos Melhor encaixe das bases é Adenina c/ Timina e Guanina c/ Citosina Adenina se liga a Timina por meio de duas ligações de hidrogênio Guanina se liga a Citosina por meio de três ligações de hidrogênio As fitas são anti-paralelas As duas fitas de DNA são complementares As fitas não são iguais nem na composição nem na sequência bases 3’ 5’ 5’ 3’ (James Watson & Francis Crick ) Estrutura Tridimensional do DNA Fenda maior Fenda menor Cavidade maior Cavidade menor Formação das L.H. entra as bases LIGAÇÃO ENTRE DUAS FITAS DE DNA (ligações de hidrogênio são formadas em decorrência da presença de grupos ceto (C=O) e amino (C-NH2) nas bases) Ligações covalentes – unem os átomos; Forças de Van der Walls – entre os anéis aromáticos de bases adjacentes (ao lado); Forças hidrofóbicas – forçam as bases a se esconderem dentro da dupla hélice; Ligações de hidrogênio – entre as bases adjacentes. FORÇAS QUE ESTABILIZAM A DUPLA-HÉLICE DNA em formas tridimensionais diferentes Forma ZForma BForma A Ocorrem devido a flexibilidade da molécula de DNA; rotações em torno da ligação N - β – glicosídica; em torno das ligações no esqueleto açúcar-fosfato; devido a mudanças estruturais e térmicas causando dobramentos da cadeia Forma clássica descrita por Watson e Crick e mais abundante; Dupla-hélice gira para a direita; Apresenta uma cavidade maior e uma menor; Conclui uma volta a cada 10,5 pares de base. Obs: Em solução, geralmente o DNA assume a conformação B. Quando há pouca água disponível para interagir com a dupla hélice, o DNA assume a conformação A. DNA TIPO B DNA TIPO A Dupla-hélice gira para a direita; Forma desidratada do tipo B; Conclui uma volta a cada 11 pares de base; Apresenta estrutura mais curta e larga; Forma presente nas regiões híbridas de DNA:RNA e em RNA dupla fita. DNA TIPO Z Dupla-hélice gira para a esquerda; Ocorre quando o açúcar e a base nitrogenada ficam do mesmo lado da ligação glicosídica; Cadeia aparece na forma de zigue-zague; Apresenta estrutura mais longa e fina; Conclui uma volta a cada 12 pares de base; Em eucariotos o DNA tende a assumir a conformação Z-DNA devido à metilação do DNA. Outras estruturas do DNA Certas sequências na molécula do DNA podem formar estruturas comuns e incomuns Aplicado a regiões c/ repetições invertidas de sequências de bases tendo simetria dupla nas duas cadeias do DNA Tais sequências são auto complementares dentro de cada cadeia e forma outros tipos de estruturas: grampo e cruciforme Grampo Cruciforme Uma única cadeia de DNA envolvida Ambas as cadeias de DNA envolvidas Repetição invertida ocorre dentro de cada cadeia individual do DNA, não tem sequência complementar dentro da mesma cadeia. Não forma grampus e estrutura cruciforme Outras estruturas do DNA DNA (Ácido desoxirribonucleico) Funções Armazenar e transmitir a Informação genética Armazenamento da informação genética O DNA carrega as informações genéticas e hereditárias, através de uma codificação química chamada de código genético. - 3 nucleotídeos determinam 1 aminoácido - O código genético é degenerado (+ de 1 códon pode codificar o mesmo aminoácido - É universal (válido para todas as espécies) - Está sujeito a mutações Replicação do DNA É a cópia do DNA usando a própria molécula do DNA como molde Permite que as células filhas recebam a mesma quantidade de DNA da célula mãe Fita parental Fita parentalFitas filhas c Origem c Origem de replicação Forquilha de replicação Replicação do DNA Copiada em pedaços DNA ligase uneos fragmentos Replicação do DNA Nucleotídeo adicionados de forma continua A replicação do DNA é semi-conservativa Molécula parental original Moléculas-filhas da primeira geração Moléculas-filhas da segunda geração Estabilidade do DNA • A estabilidade e regularidade estrutural da molécula de DNA, deve-se principalmente ao fato dos anéis de desoxirribose não possuirem grupos hidroxila no C 2’ – Os grupos hidroxila tanto do C2' como C3' são muito reativos • Podem participar de uma série de ligações pouco usuais permitindo uma variedade enorme de conformações para a molécula de ácido nucléico • Isto não seria uma característica desejável para uma molécula que tem armazenado e transmitido a informação genética durante estes milhões de anos de evolução • O exercício de tal função exige estabilidade e regularidade DNA é a única macromolécula para a qual existem sistemas de reparos As enzimas envolvidas no processo de duplicação garantem a transferência de informação genética de forma intacta RNA (Ácido Ribonucleico) Função Transmissão da informação Genética e Catalítica Atua como um intermediário pelo uso da informação genética codificada no DNA p/ especificar a sequência de aminoácidos na proteína Interpreta e executa a informação do DNA Polímero linear de nucleotídeos unidos por ligações fosfodiéster 5’3’; Ribose - açúcar presente; Timina (T) é substituída pela Uracila (U); Normalmente fita simples, embora possa apresentar pareamento intracadeia (estrutura similar ao DNA tipo A); Alguns vírus apresentam RNA fita dupla como genoma; ESTRUTURA DO RNA Descoberta da função do RNA Em eucariotos o DNA está confinado no núcleo e a síntese de proteínas ocorre nos ribossomos localizados no citosol Qual molécula carrega essa informação no núcleo até os citosol ??? Resposta = RNA RNA é encontrado tanto no núcleo como na citoplasma Transcrição Como RNA realiza a expressão gênica É a síntese do RNA utilizando a molécula do DNA como molde É realizada por um sistema enzimático que converte a informação genética contida em um segmento da fita dupla da molécula de DNA (gene) em uma fita simples de RNA com sequência de bases complementares a uma das fitas do DNA Transcrição do RNA Nem todo DNA pode ser transcrito, apenas o gene Processo da Transcrição É feito pela enzima RNA Polimerase Só transcreve trechos do DNA que são genes Começa no trecho do DNA chamado Promotor Promotor é uma sequência de bases que a enzima reconhece se liga e abre a dupla hélice do DNA Enzima percorre o gene e sintetiza a molécula de RNA Sequência de bases do RNA é dada pela sequência das bases do DNA Se no DNA tem Timina no RNA vai ser Uracila DNA volta a se fechar Expressão Gênica Após a sua síntese a molécula de RNA passa por um processo pois esta ainda não é completamente codificante Splicing Introns: não codificante Removidos Éxons: codificante Ligados uns aos outros RNA mensageiro: Contêm a informação para a síntese de proteínas. Sequência de 3 nucleotídeos = códon Os RNAm representam cerca de 4% do RNA celular total. RNA transportador: Transporta aminoácidos para que ocorra a síntese de proteínas. Lê a informação codificada no RNAm Apresenta anticódon Os RNAt correspondem a 10% do RNA total da célula. RNA ribossômico: Componentes da maquinaria de síntese de proteínas presente nos ribossomos. Os RNAr correspondem a 85 % do RNA total da célula, e são encontrados nos ribossomos (local onde ocorre a síntese protéica). Tipos de RNAs produzidos pela transcrição RNAs são responsáveis pela tradução Síntese de proteínas a partir da informação genética contida no DNA, transcrita em RNA e convertida em proteínas Se a célula vai produzir a proteína hemoglobina, primeiro ela transcreve o gene desta proteína em RNA e depois faz a tradução em proteína Síntese vai até que chegue no ribossomo um códon de parada Expressão Gênica Estrutura Tridimensional do RNA Moléculas de RNA exercem suas funções como fitas simples RNA pode fazer pareamento de bases c/ regiões complementares em sua cadeia e assumir conformação helicoidal Mas nunca de dupla hélice Moléculas de RNA e DNA parecem semelhantes, diferindo pelo fato do RNA apresentar grupo hidroxil na posição 2’ da pentose e Uracil no lugar de Timina Pareamento das bases G=C A=U Interação de empilhamento das bases ajuda na estabilização da estrutura Quando sequências complementares estão presentes a estrutura predominante é a helicoidal a direita Simples fita Bolha Alça interna Grampo Grampo. Hélice do tipo A Estrutura Tridimensional do RNA Quebras na hélice regular causadas por pareamento incorreto (alça interna) ou não pareamento (protuberância) Alças do tipo grampo formam-se entre sequências auto complementares vizinhas; são o tipo mais comum de estrutura recorrente na molécula do RNA Estrutura do RNA Diferença estrutural entre DNA e RNA Localização celular Ribossomos Nucleoide (DNA compactado) Pili Flagelo Envelope celular (membrana) Célula procariótica (bactérias): Não tem organelas (núcleo, mitocondrias, etc) Material genético compactado no nucleóide (não compartimentalizado) Cromossomo único, circular fechado (na maioria das bactérias, ex: Escherichia coli) Célula eucariótica: núcleo, mitocôndrias e cloroplastos Ribossomos Envelope nuclear Núcleo Ribossomos Mitocondrias Cloroplasto Forma celular Heterocromatina: parte inativa do DNA, não codificante Eucrocromatina: parte ativa do DNA, codificante, corresponde a 5% do DNA Química dos Ácidos Nucléicos DNA dupla-fita Desnaturação Anelamento Parcialmente desnaturado Desnaturação total Associação por pareamento de bases DNA fita simples • DNA: pode ser desnaturado e renaturado. • agentes desnaturantes: aquecimento e extremos de pH. •Rompe as ligações de hidrogênio entre os pares das bases e do empilhamento das bases desaminação de bases; hidrólise das ligações N-glicosídicas entre açúcar-base; formação de dímeros de pirimidina induzidos por radiação e lesão oxidativa. Todas são alterações que ocorrem lentamente, mas são significantes por causa da baixa tolerância das células por alterações no material genético. Alterações na estrutura do DNA que causam mudanças permanentes na informação genética codificadas no DNA são chamadas de mutações Reações espontâneas das bases e nucleotídeos Reações espontâneas Reações espontâneas - Depurinação: hidrólise da ligação N-β-glicosídica criando lesão no DNA chamada sítio apúrico + Energia Outras funções dos Nucleotídeos Moeda energética Outras funções dos Nucleotídeos Componente de cofatores enzimáticos Muito Obrigado pela Atenção
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