Apresentação do Antígeno

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TÂNIA SILVIA FRÖDE
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
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The α and β chains of the T-cell receptor (TCR) bind to antigen (Ag)–major histocompatibility complex (MHC) on an antigen-presenting cell (APC), and CD4 or CD8 interacts with the MHC. Both actions stimulate the T cell (1st signal) through the accessory CD3 chains. However, without a 2nd (coactivation) signal, the T cell is anergic or tolerant. The TCR is structurally homologous to the B-cell receptor; the α and β (or γ and δ) chains have constant (C) and variable (V) regions. (1) = 1st signal; (2) = 2nd signal.
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Células CD4+ Th1 
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Células CD4+ Th2
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Células CD4+Th17
Harrington et al., Curr Opin immunol., 18:349-356, 2006.
Tânia Silvia Fröde
Tânia Silvia Fröde
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ANTICORPOS
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
SENESCÊNCIA IMUNOLÓGICA
Sangue periférico: 
↓ 10-15% Ly
↑ Ly T imaturos: CD2+ e CD3-
↓ Células CD3+: NK
↑ Ly T CD45 RO: memória imunológica
↓ Ly
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↑IL-4, IL-5, IL-6:↑resposta Th2
Th2: produção de anticorpos (inclusive auto-ac)
↓ IL-2, interferon gama: ↓resposta Th1
Th1: ativação da célula citotóxica, NK, Macrófagos
Imunidade primária está alterada no idoso
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SENESCÊNCIA IMUNOLÓGICA
↓ Capacidade de proliferação de Ly T
↓ 30% na proliferação de Ly T in vivo
↓ Quimiotaxia de PMN
↓ Capacidade fagocitária de PMN
Lise celular: mediada pelo complemento
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IMUNOSENESCÊNCIA envelhecimento do SI
Eficácia de vacinas em idosos = 60% e adultos jovens 90%
↓ Função tímica, cél. Dendríticas, macrófagos
↓ Cél. T virgens
Acúmulo de Cél. T memória
Alteração perfil TH
Ativação antigênica de Ly T CD45 RO
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IMUNOSENESCÊNCIA
Desregulação das Respostas Th1 e Th2
 Th2: produção de anticorpos (inclusive auto-ac)
 Th1: ativação de célula citotóxica, NK
Alteração perfil Th
 Peroxidação lipídica das membranas celulares
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
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SEPARAÇÃO DO SORO
Soro é a parte líquida do sangue onde não existe fibrinogênio.
Obtenção da Amostra: 
1.  Coletar sangue em tubo seco (sem anticoagulante). 
2.  Centrifugar o soro já coagulado por 5 minutos a 2000 - 2500 rpm.
3.  Separar o soro para um tubo de hemólise sem a passagem de hemácias.
4.  Se ocorrer passagem de hemácias, centrifugar novamente como no item 2.
5. Identificar a amostra.
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
Inativação do Soro: O soro será inativado, caso a reação exija, à 56°C por 30 min. ou 63°C por 04 min. à fim de destruir as proteínas termolábeis do Sistema Complemento que podem promover falsos resultados.
Reinativação do Soro: (56°C durante 10 minutos).
Aliquotar: Os soros positivos devem ser aliquotados e armazenados em freezer para composição de uma soroteca.
Descongelar: brandamente (2-8°C).
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
LÍQUOR E FLUIDOS BIOLÓGICOS
LÍQUOR: DOSAGENS DE ANTICORPOS PARA DIAGNÓSTICO DA NEUROCISTICERCOSE
FLUÍDOS BIOLÓGICOS: LAVADO DA CAVIDADE ABDOMINAL, PLEURAL, ENTRE OUTROS – DOSAGENS DE IMUNOGLOBULINAS DO TIPO SECRETÓRIA: IgA.
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
TESTES IMUNOLÓGICOS
SENSIBILIDADE: CAPACIDADE DO TESTE EM DETECTAR PEQUENAS QUANTIDADES DE ANTÍGENOS E/OU ANTICORPOS
ESPECIFICIDADE: CAPACIDADE DO TESTES EM DISTINGUIR REAÇÃO POSITIVA: DOENÇA E REAÇÃO NEGATIVA: NÃO DOENÇA.
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
PROBLEMAS COM TESTES IMUNOLÓGICOS
 FALSO POSITIVOS = PESQUISA DE ANTICORPOS CUJO DETERMINANTES ANTIGÊNICOS SÃO SEMELHANTES 
FALSO NEGATIVOS = USO DE AC MONOCLONAIS DE ANIMAIS
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
LAVAGEM DE HEMÁCIAS
Objetivo: Retirar o excesso de anticoagulante, anticorpos inespecíficos, proteínas e outras substâncias que possam interferir nas reações a fim de se obter uma papa de hemácias limpa.
 
1.    Homogeneizar o sangue coletado.
2.    Transferir o sangue total para um tubo cônico de plástico.
3.    Centrifugar por 5 minutos a 2000 - 2500 rpm. Retirar o plasma com aspirador a vácuo para obtermos papa de hemácias .
4.    Colocar sobre a hemácia volume de 8 a 10 mL de solução fisiológica (salina/NaCl 0,85 a 0,9%) para lavar a papa de hemácias.
5.    Homogenizar suavemente.
6.    Centrifugar como no item 3.
7.    Retirar o sobrenadante.
8.    Repetir esta lavagem três vezes no mínimo, ou até que o sobrenadante esteja completamente limpo. 
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
PREPARAÇÃO DE SOLUÇÕES DE HEMÁCIAS
As hemácias são preparadas em solução percentual (%).
1. Preparar 10 mL de solução a 5%:
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
DILUIÇÕES SUCESSIVAS
 
1 – Preparar 0,5 mL de solução das seguintes diluições: 1/2, 1/4, 1/8, 1/16.
NOTA: quando a razão ou fator entre as diluições for dois, inicialmente dobra-se o volume que se deseja obter em cada tubo.
Logo: 0,5mL de solução  1 mL de solução (necessário para o cálculo do primeiro tubo).
O título do primeiro tubo é 1/2, o que significa: 1 parte soluto + 1parte solvente
0,5 mL de soro + 0,5 mL de solvente
1 mL de soro + 1 mL de solvente
Estes volumes podem variar bastante, desde que tanto o soro como o solvente tenham os mesmos volumes.
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Preparar 0,5 mL de solução das seguintes diluições: 1/2, 1/4, 1/8, 1/16.
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TÂNIA SILVIA FRÖDE
2 – Preparar uma solução de 0,2 mL das seguintes diluições: 1/3, 1/9, 1/27.
NOTA:
quando a razão não for dois, mas sim, 3, 4, 5...., procede-se de maneira diferente da anterior, não importando qual o fator entre as diluições.
Logo: 1/3 = 1parte soluto + 2 partes solvente = 1 mL de soro + 2 mL de solvente.
Divide-se o volume total da solução desejada (0,2 mL) pelo volume do solvente do primeiro tubo.
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2 – Preparar uma solução de 0,2 mL das seguintes diluições: 1/3, 1/9, 1/27.
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Obrigada