Antibiograma para identificação de E. coli

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS 
COLÉGIO TÉCNICO 
SETOR DE PATOLOGIA CLÍNICA 
RELATÓRIO DE MICROBIOLOGIA CLÍNICA 
Nome: Esther Iolanda Silva Frois Turma: P3A Data: 05 Mai. 2014 
ANTIBIOGRAMA 
Bactéria usada: E coli 
INTRODUÇÃO 
Quando uma amostra chega ao laboratório, ela deve passar por 3 etapas: isolamento, identificação e 
antibiograma; sendo que ao fim dessas etapas é liberado o laudo laboratorial. 
Por definição, antibiograma é a técnica destinada à determinação da sensibilidade bacteriana in vitro 
frente a agentes antimicrobianos, também conhecidos por Teste de Sensibilidade a Antimicrobianos (TSA). 
 No antibiograma, a bactéria passa por testes que permitem o conhecimento de quais antibióticos ela é sensível 
(em testes qualitativos) e qual a quantidade mínima inibitória (CMI) do antibiótico mais adequado (em testes 
quantitativos). É possível também saber se a cepa da bactéria possui mecanismos de virulência, sendo 
resistente ao tratamento normalmente usado. O antibiograma é de grande importância para o médico, pois 
orienta a escolha do tratamento a ser feito no paciente. 
O teste de disco-difusão em Ágar, descrito por Bauer e Kirby, em 1966, é um dos métodos de 
sensibilidade mais simples e confiáveis. É um método que orienta a escolha do antimicrobiano mais adequado, 
verificando a resistência/sensibilidade do MMO à vários antimicrobianos simultaneamente e permitindo a 
identificação de bactérias multirresistentes, com cepas muito virulentas. Para sua realização, a bactéria, em 
uma suspensão de concentração pré-estabelecida, é inoculada no Ágar e são dispostos discos feitos de papel-
filtro impregnados com o antimicrobiano na placa. Após 24 horas, aproximadamente, de incubação, são 
medidos os diâmetros dos halos formados em torno da droga, mensurados em milímetros, onde quanto maior 
o halo, menos a CMI necessária para o controle do MMO. A interpretação dos resultados é dada como 
antimicrobiano sensível, intermediário ou resistente, de acordo com os critérios estabelecidos pelo Clinical 
and Laboratory Standards Institute (CLSI) no documento de disco-difusão, que é revisado a cada três anos. 
OBJETIVO 
Aprender a realizar o método do disco-difusão em Ágar e conhecer alguns dos antimicrobianos que são 
usados no laboratório de microbiologia. 
METODOLOGIA 
Todo o procedimento foi realizado em área limpa com Álcool 70°, em torno do bico de Bunsen. 
1. PREPARO DO INÓCULO BACTERIANO 
Por suspensão direta, diluir colônias da bactéria em solução salina até atingir turvação semelhante à do tubo 
com concentração padrão pré-estabelecida, que é correspondente a 0,5 da escala de McFarland, sendo 
equivalente a 1,5x10
8
 unidades formadoras de colônia por microlitro de solução salina (UFC)/mL. 
a. Com uma alça bacteriológica, transferir, de 1 a 1, colônias com morfologia semelhante na solução 
salina, homogeneizando e comparando com o tubo padrão 
 
2. INOCULAÇÃO DA PLACA 
Inserir um swab estéril no tubo com a suspensão bacteriana, comprimindo contra a parede interna do tubo para 
tirar o excesso do inoculo, e semear a superfície do Ágar em 3 direções diferentes, assim como na imagem 
abaixo, cobrindo toda a placa. 
 
3. APLICAÇÃO DOS DISCOS DE ANTIBIÓTICO 
Aguardar 5 minutos após o plantio, para que o inoculo seja completamente absorvido pelo Ágar e aplicar, com 
o auxílio de uma pinça estéril (pinça metálica esterilizada na chama do bico de Bunsen) e colocar os discos, 
dispondo-os mantendo um espaço satisfatório entre eles (espaço este de ±3 centímetros), sem mudá-los de 
lugar evitando uma possível falsa leitura do teste. 
a. Dispor os discos a partir do centro. Colocar 1 disco no centro, 4 nas laterais 
 
4. INCUBAÇÃO DAS PLACAS 
Incubar as placas invertidas no máximo 15 minutos após a colocação dos discos, em temperatura máxima de 
35±2°C, por período de acordo com o antibiótico usado, com oxigenação de acordo com a necessidade da 
bactéria. 
 
RESULTADOS E DISCUSSÃO 
Foram escolhidos e utilizados os seguintes antibióticos: Imipenem (IPM), Norfloxatina (NOR), 
Meropenem (ME), Gentamicins (GEN), Ceftriaxona (CEF), Iproflaxacina (CIP), Cefepime(CPM), Sulfazotem 
(SUT), Rifampicina (RIF), Piperacilina+Tazobactam (PPT), Trobamicina (TOB), Cefotaxima (CTX). Os 
discos de antibiótico foram dispostos na placa de Petri grande com Ágar Mueller-Hinton, de forma que 
houvesse uma distancia satisfatória entre eles. 
Após o período de incubação, foi visto que não houve o crescimento da bactéria, sendo assim, não foi 
possível visualizar a reação da E. coli aos antibióticos usados. Porém houve o crescimento de 4 pequenas 
colônias, de coloração acinzentada, na placa, o que é indicativo de contaminação. 
Os resultados encontrados podem ter ocorrido devido a possíveis erros técnicos durante o 
procedimento ou podem estar relacionados com a bactéria usada, pois, em discussão com outros colegas de 
turma, foi visto que os que usaram a E. coli também não observaram crescimento na placa. 
A contaminação pode ter sido resultado do manuseio da placa de disco-difusão fora da área da chama 
do bico de Bunsen. 
 
CONCLUSÃO 
Aprendi com a aula que existem antibióticos adequados para cada bactéria, de acordo com seu grupo (ex.: 
Gram-negativo e Enterobactérias), que a forma de realizar o plantio em Ágar disco-difusão exige um 
procedimento diferente do que é comumente usado para estriar e que deve-se manter a atenção e seguir todos 
os cuidados necessários para a realização correta do teste e obtenção de resultados confiáveis.