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HEPATITE B
É uma doença causada pelo vírus da Hepatite B ( HBV)que replica ativamente no fígado de pacientes infectados, podendo manifestar de forma crônica, aguda ou fulminante.
No Brasil , a região amazônica é considerada de alta prevalência .
A maioria das infecções agudas causadas pelo HBV é assintomática.
a transmissão se dá por atividade sexual, uso de drogas injetáveis, da transmissão vertical ou exposição ocupacional.
O vírus esta presente no soro em altas quantidades, podem ser detectados também no sêmen, na saliva e nos leucócitos.
Vírus da Hepatite B
O HBV é um membro da família Hepadnaviridae, que apresenta o vírus contendo DNA como material genético.
O HBV apresenta uma estrutura complexa com duplo envoltório composto por:
 
A replicação do DNA do HBV é bastante 
incomum, necessitando a formação de um RNA 
intermediário. O DNA do HBV é uma molécula 
circular, parcialmente dupla fita com 
aproximadamente 3.200 nucleotídeos.
Oito genótipos ( a-h);
Interferon e lamivudina;
A vacinação. 
DIAGNóSTICO LABORATORIAL
Testes bioquímicos; avaliam a função dos hepatócitos, através da determinação dos níveis séricos de TGO e TGP.
Diagnóstico Sorológico: baseia- se na detecção de antígenos e anticorpos circulantes.
DIAGNÓSTICO HISTOLÓGICO
Biopsia;
Diagnostico molecular
Permitem a identificação quantitativa e qualitativa do DNA do HBV. 
Atualmente a técnica mais empregada é a detecção por PCR, um método rapido, direto e extremamente sensível.
Para analises moleculares, podem ser utilizados amostras se soro, plasma ou de tecido.
Tradicionalmente, para a extração do DNA do HBV são utilizados reagentes como a proteinase K, dodecil sulfato de sódio (SDS) e fenol-cloroformio.
A genotipagem é utilizada para caracterizar os isolados variantes do HBV, pode ser definido com base na sequencia de genes S. Ele é importante para avaliar rotas de transmissão, reatividade sorológica, patogenicidade, virulência e resposta a terapias antivirais.
A quantificação do DNA por técnicas moleculares é uma importante ferramenta no monitoramento dos pacientes submetidos a tratamento com drogas antivirais.
Fornece uma analise direta da quantidade de vírus circulante e consequentemente , informações sobre a progressão da doença.
Triagem em banco de sangue
A implantação de testes sorológicos em banco de sangue possibilitou um grande avanço no controle das infecções pós- tranfusionais causadas pelo HBV.
Protocolo para diagnóstico molecular do vírus da hepatite b
A técnica de extração de DNA utiliza como principais reagentes;proteinase k,SDS,fenol e clorofórmio,sendo bastante simples e e viável de ser realizada em qualquer laboratório de biologia molecular.Após a extração de DNA,emprega-se a técnica de PCR para amplificação de parte da região S do genoma do HBV 
O uso da enzima Platinum Taq DNA-polimerase na reação de amplificação permite que sejam realizados 55 ciclos em um único experimento.esse procedimento tornou a técnica muito sensível e evitou a realização do nested PCR,diminuindo,o risco de contaminação laboratorial 
Coleta de amostra
Coletar 5 ml de sangue em tubo contendo anticoagulante EDTA. O plasma deve ser separado por centrifugação e pode ser armazenado a – 20°C ate o momento da realização do teste.
reagentes
Solução Lise: 
Misturar 0,8 ml da solução A com 0,2 da solução B.
Solução a pH 9,0: 
0,242g Tris base;
0,1 g SDS;
0,438 g NaCl;
0,074 g EDTA;
1 mg tRNA, levedura;
Completar o volume com água destilada ate atingir 8ml;
Caso necessario, acertar o pH com HCl.
Solução B:
Dissolver 0,1 g de proteinase K em 10 ml de solução de Cacl2 0,0015M.
Extração de dna por fenol- clorofórmio
Pipetar 250ul de plasma em um tubo de 1,5 ml;
Adicionar 80ul da soluçao lise. Incubar a 37°C por 4 horas;
Acrescentar 350 ul de fenol tamponado (pH8) e misturar no vórtex por 30 segundos;
Centrifugar por 10 minutos e 13.000 r.p.m;
Retirar o sobrenadante e passar para um novo tubo;
Acrescentar aproximadamente 400 ul de etanol absoluto (vol/vol). Misturar por inversão;
Deixar os tubos por 18 horas a – 20°c;
Centrifugar por 30 minutos a 13.000 r.p.m. Desprezar o sobrenadante;
Acrescentar 300 ul de etanol 70%;
Centrifugar po 30 segundos. Desprezar o sobrenadante;
Secar o precipitado por 30 minutos à temperatura ambiente;
Ressuspender o material em 30 ul de agua autoclavada (estéril). O DNA de HBV extraído deve ser armazenado a – 20ºC.
pcr
Sequências dos Oligonucleotídeos
HBMF2 5’- GTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTC – 3’
(SENSO)
HBMR2 5’ – AAGCCANACARTGGGGGAAAGC – 3’
(ANTI- SENSO)
Na sequência de primers,”N” representa qualquer um dos quatro nucleotídeos, enquanto o “T” representa adenina (A) ou guanina (G).
Condições da reação da PCR
3 ul de DNA;
5Ul de tampão 10 X PCR;
1,5 ul de 50 mM MgCl2;
X ul dNTP( 200 UM de cada)
xuL de primer HBMF2 (20 pmol);
X uL de primer HBMR2 (20 pmol);
O,5 uL (2,5 U) de Platinum Taq DNA – polimerase;
X uL de H2O
50 ul
Programa de reação De Pcr
90 °C – 2 minutos
95º C – 45 segundos
62°C – 45 segundos 55 ciclos
72º C – 45 segundos
72° C – 7 minutos
4º C