Como comprovar eficácia de um medicamento?

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Como	
  comprovar	
  eficácia	
  
de	
  um	
  medicamento?
Ms.	
  Talita	
  Magalhães	
  Rocha
UNIVERSIDADE	
  FEDERAL	
  DO	
  CEARÁ
FACULDADE	
  DE	
  FARMÁCIA,	
  ODONTOLOGIA	
  E	
  ENFERMAGEM
DEPARTAMENTO	
  DE	
  FARMÁCIA
DISCIPLINA:	
  FARMACOGNOSIA	
  I
Desenvolvimento	
  de	
  um	
  medicamento	
  
fitoterápico
Desenvolvimento	
  pré-­‐clínico
Medicamento	
  fitoterápico
Segurança
Toxicidade
Genotoxicidade
Carcinogenicidade
Eficácia
Prova	
  de	
  conceito
Dinâmica	
  e	
  cinética
Ensaios	
  farmacológicos	
  
Modelos	
  experimentais
Métodos	
  moleculares
Métodos	
  moleculares
Inibidores	
  da	
  protease	
  do	
  HIV	
   Inibidores	
  da	
  fosfodiesterase
Inibidores	
  da	
  ciclo-­‐oxigenase
Interação	
  molecular	
  com	
  as	
  isoformas	
  da	
  
COX	
  in	
  silico
Busca
•RSCB	
  
PDB
Preparação
•MOE	
  
2014.1
Validação
•GOLD	
  
5.1.0
Docking
GOLD	
  5.1.0
Complexo	
  
Receptor/Ligante
• Orientações
• Conformações
• Valores	
  de	
  score
• Interações	
  
intermoleculares
MOE,	
  2014;	
  COLE	
  et	
  al.,	
  2005;	
  SELINSKY	
  et	
  al,	
  2001;	
  KURUMBAIL	
  et	
  al,	
  2001
COX-­‐1	
  →	
  1HT5
COX-­‐2	
  →	
  1CX2
Triagem	
  
virtual
Interação	
  molecular	
  da	
  alcaloides	
  
imidazólicos	
  com	
  COX-­‐2
Escores de docking dos resíduos específicos de ligantes da COX-2 
Compostos Score S (PLP) Score S (PLP) 
 Ser353* Tyr355* 
Epiisopilosina 76.82 -77.86 68.08 -68.08 
Epiisopiloturina 65.22 -64.58 67.19 -62.08 
Indometacina 58.10 -55.82 58.74 -56.01 
*Resíduos de proteínas 
Interação	
  molecular	
  da	
  EPIT	
  com	
  COX-­‐2
(a) Conformação de ligação prevista para EPIT no sítio de ligação da COX-2 no resíduo Tyr355 (b) Interações
entre EPIT e COX-2 no sítio de ligação dos resíduos (código PDB 1CX2)
Métodos	
  celulares
Métodos	
  celulares
Métodos	
  celulares
Métodos	
  celulares
Cultura	
  
primária
Diretamente	
  	
  de	
  
tecidos	
  do	
  
organismo
Com	
  ou	
  sem	
  
passo	
  inicial	
  de	
  
fracionamento	
  de	
  
células	
  
Linhagem	
  
celular
Células	
  cultivas	
  de	
  
uma	
  cultura	
  
primária
Subcultivadas	
  por	
  
semanas	
  ou	
  
meses
Vantagens	
  x	
  Desvantagens
Condição	
  de	
  crescimento	
  da	
  cultura
Instabilidade	
  da	
  cultura	
  celular
Perda	
  de	
  características
Dificuldade	
  de	
  extrapolação	
  para	
  o	
  modelo	
  de	
  organismo	
  intacto
Gasto	
  elevado	
  de	
  material
Possibilidade	
  de	
  estudar	
  fenômenos,	
  inacessíveis	
  em	
  tecidos	
  isolados
Obtenção	
  de	
  células	
  com	
  boa	
  homogeneidade	
  e	
  bem	
  caracterizadas
Controle	
  das	
  condições	
  ambientais	
  (pH,	
  temperatura,	
  concentração	
  de	
  
O2 e	
  CO2)
Conhecimento	
  do	
  comportamento	
  e	
  função	
  de	
  uma	
  população	
  isolada	
  
de	
  células
Economia	
  de	
  reagente,	
  tempo,	
  etc.	
  
Métodos	
  celulares
Câmara	
  de	
  fluxo	
  laminar
Estufa	
  de	
  CO2
Centrífuga Microscópio	
  óptico	
  invertido
Garrafa	
  de	
  cultivo	
  celular
Métodos	
  com	
  tecidos	
  /	
  órgãos
Métodos	
  com	
  tecidos
Métodos	
  com	
  modelos	
  animais	
  de	
  
doenças	
  humanas
Modelos	
  animais	
  de	
  doenças	
  humanas
Caracterização	
  das	
  bases	
  fisiopatológicas	
  da	
  doença
Avaliação	
  dos	
  mecanismos	
  de	
  ação	
  de	
  fármacos	
  existentes
Estabelecimento	
  de	
  relações	
  farmacocinéticas/farmacodinâmicas
Estimativa	
  de	
  esquemas	
  posológicos
Determinação	
  das	
  margens	
  de	
  segurança	
  e	
  toxicidade
Avaliação	
  da	
  utilidade	
  terapêutica	
  de	
  novas	
  entidades	
  químicas
Drogas	
  teste
45	
  min
Pressão	
  aplicada	
  na	
  
pata	
  
Von	
  Frey	
  -­‐ Hipernocicepção mecânica	
  medida	
  em	
  pressão/g
Carragenina (i.pl.)
CUNHA	
  et	
  al	
  (2004)
Medição	
  basal	
  :	
  T0
1h	
  (Δ1):	
  T0	
  – T1
3h	
  (Δ2):	
  T0	
  – T3
5h	
  (Δ3):	
  T0	
  – T5	
  
Atividade	
  antinociceptiva:
hipernocicepção	
  inflamatória	
  aguda	
  	
  
Atividade	
  anti-­‐inflamatória	
  in	
  vivo	
  –
Edema	
  de	
  pata
Drogas	
  teste
30	
  min
Volume	
  do	
  
edema	
  (µL)
Vol. edema	
  =	
  Vol. final	
  – Vol. inicial
Carragenina (Cg)
Winter et al., 1962
Atividade	
  anti-­‐inflamatória	
  in	
  vivo	
  –
Peritonite	
  induzida	
  por	
  carragenina	
  em	
  
camundongos
Ferrándis  &  Alcaraz,  1991
Leucócitos
totais
5 h
exsudato
Drogas	
  teste
Carragenina (Cg)
Ferrándis & Alcaraz, 1991
Ferrándis  &  Alcaraz,  1991
Leucócitos
totais
Atividade	
  anti-­‐inflamatória	
  in	
  vivo	
  –
Broncoprovocação antigênica
OVA	
  10	
  mg/km,	
  i.p. CESAC,	
  DEXA,
veículo	
  ou	
  
Salina,	
  v.o.
OVA	
  1	
  mg/mL	
  e	
  
5	
  mg/mL
Coleta	
  do	
  lavado	
  
broncoalveolar
Hutson, 1989
CESAC	
  reduz	
  o	
  número	
  de	
  células	
  no	
  lavado	
  bronco-­‐alveolar	
  
de	
  ratos	
  desafiados	
  por	
  ovalbulmina
No
rm
al
Co
ntr
ole
CE
SA
C  1
00
CE
SA
C  2
00
CE
SA
C  4
00
DE
XA
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
mg/kg
a
bb
b
b
No
  d
e  
cé
lu
la
s  
(x
  1
06
/m
L)
a  vs  Normal;;  b  vs  Controle;;  P<0,05  – ANOVA  e  Teste  de  Tukey  como  post  hoc
Dermatite	
  de	
  contato	
  irritativa	
  
aguda	
  induzida	
  por	
  TPA
TPA	
  	
  2,5	
  µL/orelha OEOG	
  (1	
  -­‐ 4mg/orelha)
DEXA	
  (0,1	
  mg/orelha)
DMSO	
  puro	
  (10μL/orelha)
RECIO	
  ET	
  AL.	
  2000	
  
4h
Efeito	
  do	
  OEOG	
  no	
  edema	
  de	
  orelha	
  agudo	
  induzido	
  
por	
  TPA	
  em	
  camundongos
No
rm
al
Co
ntr
ole
OE
OG
  1
OE
OG
  2
OE
OG
  4
DE
XA
  0,
1
0.0
0.1
0.2
0.3
mg/orelha
+  TPA
a
b b b b
Vo
lu
m
e  
do
  e
de
m
a  
(m
m
)
Metodologias	
  para	
  pesquisa	
  de	
  fármacos	
  com	
  
ação	
  sobre	
  o	
  sistema	
  nervoso	
  central
Labirinto	
  elevado	
  em	
  cruz	
  
Campo	
  aberto Nado	
  forçado
Teste	
  Rota	
  Rod
Pontos	
  críticos
Qual	
  veículo	
  usado	
  para	
  solubilizar	
  candidato	
  a	
  fármaco?
Veículo	
  interfere	
  no	
  parâmetro	
  avaliado?
Vias	
  de	
  administração
Qualquer	
  via	
  pode	
  ser	
  usada?
Doses/Volumes
Dose/volume	
  máximos	
  que	
  pode	
  ser	
  administrados?
Grupos	
  controles
Quais	
  grupos	
  controles	
  devem	
  ser	
  incluídos	
  no	
  protocolo?
Análise	
  dos	
  resultados
Resultado	
  atípico	
  pode	
  ser	
  retirado?
Qual	
  é	
  a	
  análise	
  estatística	
  adequada?
Como	
  interpretar	
  resultados	
  negativos?
Obrigada!